李進(jìn)，茅小波，楊丹丹

（南通市海門區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 南通 226100）

超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）是1983年于臨床中發(fā)現(xiàn)，之后，全球范圍內(nèi)均有相關(guān)報(bào)道[1-2]。ESBLs是由某些菌株生成的一種酶，此種菌株對頭孢類、青霉素等β-內(nèi)酰胺類藥物均具有較強(qiáng)耐藥性[3]。隨著抗菌藥物的廣泛運(yùn)用，產(chǎn)ESBLs菌株檢出率顯著升高（尤其是大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌），目前已成為引起院內(nèi)感染的重要致病菌[4]。因此，產(chǎn)ESBLs菌株與其耐藥性的監(jiān)測，對醫(yī)院感染控制及抗菌治療的開展均具有重要意義?；诖?，為了解本院產(chǎn)ESBLs株菌檢出情況及其耐藥性，現(xiàn)對本院門診與住院患者各種臨床標(biāo)本分離的150株菌株（包括肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌）展開探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年6月至2020年6月本院門診和住院患者各種臨床樣本（血、痰、尿、腹水、膽汁、膿液等）分離出的肺炎克雷伯菌與大腸埃希菌共150株。

1.2 方法

1.2.1 藥敏實(shí)驗(yàn) 以瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)，參照NCCLS即美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會制定的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)[5]，評估結(jié)果。

1.2.2 ESBLs菌株試驗(yàn) 以雙紙片協(xié)助試驗(yàn)，依據(jù)常規(guī)紙片擴(kuò)散法進(jìn)行細(xì)菌接種，將阿莫西林-克拉維酸紙片貼在平板中心，然后將氨曲南、頭孢噻肟、頭孢他啶紙片貼在其周圍，若周邊3個(gè)藥敏紙片任何一個(gè)存在抑菌圈向阿莫西林-克拉維酸紙片靠近且邊緣發(fā)生擴(kuò)大現(xiàn)象，則可判定為產(chǎn)ESBLs可疑菌株。

1.2.3 ESBLs菌株驗(yàn)證試驗(yàn) 按照NCCLS推薦紙片擴(kuò)散確證法進(jìn)行試驗(yàn)，應(yīng)用頭孢噻肟-克拉維酸、頭孢他啶-克拉維酸、頭孢他啶進(jìn)行檢測。比較兩組內(nèi)不加入克拉維酸抑菌圈直徑與任意一個(gè)藥物添加克拉維酸抑菌圈直徑，當(dāng)增大差異超過5 mm時(shí)，表明此菌株產(chǎn)ESBLs。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察菌株內(nèi)產(chǎn)ESBLs株檢出數(shù)與其對單種抗菌藥物和多種抗菌藥物的耐藥性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，予以χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺炎克雷伯菌與大腸埃希菌內(nèi)產(chǎn)ESBLs菌株檢出情況150株菌株中，肺炎克雷伯菌有69株，大腸埃希菌有81株，兩者產(chǎn)ESBLs菌株檢出率分別為43.48%、41.98%，見表1。

表1 肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs菌株檢出情況Table 1 Detection of ESBLs-producing strains of Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli

2.2 產(chǎn)ESBLs菌株對單種抗生素的耐藥性分析 肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs菌株對SXT、AMK、GEN、CIP、ATM、CSL、FEP、CAZ、CTX、AMC、TIP、PIP的耐藥性均明顯高于不產(chǎn)ESBLs菌株（P＜0.05）。肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs菌株對IPM、AMP的耐藥性比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2 產(chǎn)ESBLs菌株對單種抗生素的耐藥性[n（%）]Table 2 Resistance of ESBLs-producing strains to single antibiotics[n(%)]

2.3 產(chǎn)ESBLs菌株對多種抗菌藥物的耐藥性分析 肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs菌株對IPM聯(lián)合SXT、AMK、CIP的耐藥性均較低。肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs菌株對頭孢菌素類、青霉素類聯(lián)合酶抑制劑方案的耐藥性，見表3。

表3 產(chǎn)ESBLs菌株對多種抗菌藥物的耐藥性分析[n（%）]Table 3 Analysis of the resistance of ESBLs-producing strains to a variety of antibacterial drugs[n(%)]

3 討論

隨著新型超廣譜β-內(nèi)酰胺類藥物的出現(xiàn)及廣泛運(yùn)用、推廣，對微生態(tài)環(huán)境內(nèi)各種細(xì)菌造成較大選擇壓力，迫使細(xì)菌出現(xiàn)新的耐藥機(jī)制，以便能良好地適應(yīng)其生存環(huán)境，其中具備重要意義的機(jī)制之一為革蘭氏陰性桿菌產(chǎn)ESBLs，從而對氨曲南、第3代頭孢菌素等新型β-內(nèi)酰胺類藥物產(chǎn)生耐藥。另外，由整合子或轉(zhuǎn)座子、質(zhì)粒引導(dǎo)的ESBLs編碼基因可于不同屬種細(xì)菌遺傳物質(zhì)間聚集重排或轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致多重耐藥性發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)顯著升高。ESBLs是一些革蘭陰性桿菌的部分菌株形成的一種酶，這些菌株對β-內(nèi)酰胺類藥物（如頭孢類、青霉素類）均具有耐藥性[6]。細(xì)菌生成ESBLs后可滅活窄譜、廣譜抗革蘭陰性桿菌青霉素、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類、頭孢菌素等抗菌藥物。ESBLs多來源于腸桿菌科細(xì)菌，于腸桿菌科細(xì)菌內(nèi)產(chǎn)ESBLs較多的為大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌[7-8]。因此，臨床應(yīng)加強(qiáng)對產(chǎn)ESBLs菌株與其耐藥性的監(jiān)測，以便于后期合理應(yīng)用抗菌藥物，降低細(xì)菌耐藥性。

本研究結(jié)果顯示，150株菌株中共檢出64株產(chǎn)ESBLs菌株，占42.67%，其中在肺炎克雷伯菌株內(nèi)檢出30株，在大腸埃希菌內(nèi)檢出34株。除亞胺培南、氨芐西林外，肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs菌株的耐藥性顯著均高于不產(chǎn)ESBLs菌株，提示肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs菌株，可增加菌株的耐藥性。因此，臨床應(yīng)加強(qiáng)對以上菌株產(chǎn)ESBLs的監(jiān)測。肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs菌株對亞胺培南耐藥性均較低，分別為3.33%、5.88%。肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs除對亞胺培南、頭孢哌酮-他唑巴坦耐藥性較低外，對其他抗菌藥物耐藥性均高于70.00%，且本研究結(jié)果顯示，產(chǎn)ESBLs對亞胺培南與其他抗菌藥物的耐藥性也較低，分別為0.00%～3.33%、0.00%～2.94%。但產(chǎn)ESBLs除對亞胺培南、頭孢哌酮-舒巴坦外，對復(fù)方新諾明等幾種藥物均具有多重耐藥性。另外，頭孢菌素類、青霉素類聯(lián)合酶抑制劑治療方案與不加入酶抑制劑多重耐藥性相比有所下降，但酶抑制劑的應(yīng)用并不能解決全部問題，也說明肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs菌可能還存在其他耐藥機(jī)制。另外，肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs對頭孢哌-酮舒巴坦聯(lián)合酶抑制劑的耐藥性低于哌拉西林聯(lián)合酶抑制劑。因此，臨床可優(yōu)先考慮頭孢菌素類聯(lián)合酶抑制劑抗菌治療方案。

綜上所述，產(chǎn)ESBLs菌株的分離率與耐藥性均較高，是目前臨床上需重點(diǎn)解決的問題。為避免產(chǎn)ESBLs造成的院內(nèi)感染及控制ESBLs生成株其產(chǎn)酶基因擴(kuò)散，臨床應(yīng)加強(qiáng)對廣譜β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物的合理運(yùn)用。