曹陽(yáng)芷, 孔德瑜, 楊玉社*

(1. 中國(guó)科學(xué)院 上海藥物研究所，上海 201203； 2. 中國(guó)科學(xué)院大學(xué)，北京 100049)

血栓栓塞性疾病是一種常見的心腦血管疾病(CVD)，是人類健康最危險(xiǎn)的殺手之一[1-3]。目前，中國(guó)心血管疾病患者人數(shù)已達(dá)到3.3億且保持遞增趨勢(shì)，對(duì)社會(huì)造成了沉重負(fù)擔(dān)[4]。目前臨床治療策略以抗凝治療、抗血小板治療和溶栓為主[5-6]。血小板活化與聚集是CVD的重要致病因素，因此抑制血小板聚集是治療CVD的首要方向[7-9]。

目前可用的抗血小板藥物包括環(huán)氧化酶抑制劑、P2Y嘌呤受體12(P2Y12)拮抗劑、蛋白酶激活受體拮抗劑和糖蛋白GPⅡb/Ⅲa 受體拮抗劑[10]。常用抗血小板藥物主要有阿司匹林(Aspirin)、氯吡格雷(Clopidogrel)、替格瑞洛(Ticagrelor)等。隨著臨床研究的不斷深入，這些藥物逐漸暴露了很多問題，如藥物抵抗和出血發(fā)生率高等[11-13]。因此，尋找療效更佳、安全性更好的口服可逆抗血小板藥物具有重要的臨床意義。

AZD-1283為阿斯利康公司研發(fā)的新型口服抗血小板化合物，因代謝問題終止于臨床Ⅱ期試驗(yàn)[14-16]。DY-038是以AZD1283為先導(dǎo)化合物發(fā)現(xiàn)的候選化合物，顯示出較好的體內(nèi)抗血栓藥效和較低的出血風(fēng)險(xiǎn)[17]。經(jīng)過調(diào)研，我們認(rèn)為DY-038的活性仍有提升的空間。結(jié)合前期化合物優(yōu)化的構(gòu)效關(guān)系[17]，設(shè)想對(duì)DY-038的疏水片段展開進(jìn)一步的構(gòu)效關(guān)系研究，以期發(fā)現(xiàn)活性更優(yōu)的候選化合物。

本文設(shè)計(jì)并合成了14個(gè)新型的雙環(huán)吡啶類化合物(13a～13n, Scheme 1～2)，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR，13C NMR和MS(ESI)表征。采用比濁法血小板聚集試驗(yàn)研究了13a～13n對(duì)人源血小板聚集的抑制作用。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

X-4型顯微熔點(diǎn)儀；Bruker Biospin Avance III 400 MHz型核磁共振儀(CDCl3或DMSO-d6為溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo))；Finnigan LCQ-DECA型質(zhì)譜儀；Agilent 1100型液相色譜儀。

化合物11[17]和化合物9[18]按文獻(xiàn)方法合成；其余所用試劑均為化學(xué)純或分析純。

1.2 合成

(1)4a～4d的合成[17]

4a： 白色固體，產(chǎn)率76%, m.p.99.6～100.4 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.27(d,J=7.8 Hz, 2H), 7.21(d,J=7.8 Hz, 2H), 6.81(s, 2H), 4.21(s, 2H), 2.60(q,J=7.6 Hz, 2H), 1.18(t,J=7.6 Hz, 3H)。

4b: 白色固體，產(chǎn)率75%, m.p.131.3～132.3 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.30～7.22(m, 4H), 6.83(s, 2H), 4.21(s, 2H), 2.89(p,J=6.9 Hz, 1H), 1.20(d,J=6.9 Hz, 6H)。

4c: 白色固體，產(chǎn)率72%, m.p.121.8～122.6 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.42～7.37(m, 2H), 7.31～7.26(m, 2H), 6.84(s, 2H), 4.21(s, 2H), 1.28(s, 9H)。

4d: 白色固體，產(chǎn)率73%, m.p.163.5～164.1 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.69～7.65(m, 4H), 7.50～7.44(m, 4H), 7.40～7.35(m, 1H), 6.89(s, 2H), 4.31(s, 2H)。

(2)6a～6e的合成(以6a為例)

在反應(yīng)瓶中加入5a(0.65 g, 3.08 mmol)、Na2SO3(0.8 g, 6.31 mmol)和H2O 5 mL，攪拌下于110 ℃反應(yīng)過夜(TLC監(jiān)測(cè)，展開劑：A=PE/EA=10/1,V/V)。冷卻至室溫，析出白色固體6a，干燥后直接投入下一步反應(yīng)；MS(ESI)m/z: 211.1{[M-H]-}。

用類似的方法合成6b～6e。6b: 白色固體，MS(ESI)m/z: 203.0{[M-H]-}；6c: 白色固體，MS(ESI)m/z: 211.0{[M-H]-};6d: 白色固體，MS(ESI)m/z: 177.0{[M-H]-};6e: 白色固體，MS(ESI)m/z: 175.1{[M-H]-}。

(3)6f～6j的合成(以6f為例)

在反應(yīng)瓶中加入5f(3.0 g, 18.4 mmol)和水30 mL，往溶液中加入Na2SO3(5.8 g, 46 mmol)，攪拌下于110 ℃反應(yīng)2 h(TLC監(jiān)測(cè))。加入1 M HCl調(diào)至pH=5，減壓濃縮，殘余物加入甲醇 30 mL，于60 ℃攪拌0.5 h。過濾，濾液減壓濃縮后直接投入下一步；MS(ESI)m/z: 172.0{[M-H]-}。

用類似的方法合成6g～6j。6g: 黃色固體，MS(ESI)m/z: 186.0{[M-H]-}；6h: 白色固體，MS(ESI)m/z: 172.0{[M-H]-};6i: 黃色固體，MS(ESI)m/z: 186.1{[M-H]-};6j: 白色固體，MS(ESI)m/z: 197.0{[M-H]-}。

Chart 1

Scheme 1

(4)7a～7c的合成(以7a為例)

向反應(yīng)瓶中加入6a(3.08 mmol)和DCM 6 mL，氬氣保護(hù)，緩慢加入五氯化磷(1 mL, 7.7 mmol)，反應(yīng)過夜(TLC監(jiān)測(cè)，展開劑A=50/1)。加水?dāng)嚢? min,用二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，依次用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮后得7a,直接投入下一步反應(yīng)。

用類似的方法合成黃色油狀液體7b和深紫色油狀液體7c。

(5)7d和7e的合成(以7d為例)

在反應(yīng)瓶中加入6a(28.41 mmol)，氬氣保護(hù)，冰浴冷卻下緩慢加入三氯氧磷 30 mL，攪拌下于100 ℃反應(yīng)48 h(TLC監(jiān)測(cè)，展開劑：純PE)。向冰水中緩慢加入反應(yīng)液，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，依次用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮得7d，直接投入下一步反應(yīng)。

Scheme 2

用類似的方法合成黃色油狀液體7b。

(6)7f～7j的合成(以7f為例)

在反應(yīng)瓶中加入6a(18.4 mmol)，氬氣保護(hù)，冰浴冷卻下緩慢加入三氯氧磷30 mL和五氯化磷(12 g, 57.8 mmol)，攪拌反應(yīng)過夜(TLC監(jiān)測(cè))。旋蒸除溶，殘余物加入適量二氯甲烷，減壓濃縮3次得7f,直接投入下一步反應(yīng)。

用類似的方法合成7g～7j。

(7)8a～8j的合成(以8a為例)

在反應(yīng)瓶中加入7a(3.08 mmol)和THF 6 mL，攪拌使其溶解；冰浴冷卻下滴加氨水(2 mL)，攪拌反應(yīng)過夜(TLC 監(jiān)測(cè)，展開劑A=1/1)。加入適量水，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，依次用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮后用純石油醚打漿，過濾得白色固體8a0.2 g，產(chǎn)率30%, m.p.114.4～115.3 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.25～7.20(m, 2H), 7.09～7.04(m, 2H), 6.79(s, 2H), 4.19(s, 2H), 1.95～1.87(m, 1H), 0.99～0.91(m, 2H), 0.70～0.63(m, 2H); MS(ESI)m/z: 210.2{[M-H]-}。

用類似的方法合成8b～8j。

8b: 白色固體，產(chǎn)率56%, m.p.145.9～146.6 ℃;1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.33～7.28(m, 1H), 7.09～7.01(m, 2H), 6.97(s, 2H), 4.25(s, 2H), 2.32(s, 3H); MS(ESI)m/z: 202.1{[M-H]-}。

8c: 黃色固體，產(chǎn)率23%, m.p.97.2～98.1 ℃；1H NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 7.52(d,J=3.8 Hz, 1H), 7.04(dt,J=3.8 Hz, 0.8 Hz, 1H), 5.00(s, 2H), 4.76(d,J=0.8 Hz, 2H); MS(ESI)m/z: 209.9{[M-H]-}。

8d：淡黃色固體，產(chǎn)率40%, m.p.70.1～71.5 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 6.76(s, 2H), 2.85(d,J=5.6 Hz, 2H), 1.91～1.77(m, 3H), 1.70～1.53(m, 3H), 1.30～0.98(m, 5H); MS(ESI)m/z: 176.1{[M-H]-}。

8e：黃色固體，產(chǎn)率30%, m.p.56.8～57.4 ℃；1H NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 5.70(d,J=10.8 Hz, 1H), 5.63(d,J=10.8 Hz, 1H), 4.76(s, 2H), 3.13(dd,J=6.2 Hz, 3.4 Hz, 2H), 2.40～2.27(m, 2H), 2.14～2.05(m, 2H), 2.00～1.87(m, 2H), 1.53～1.42(m, 1H); MS(ESI)m/z: 174.0{[M-H]-}。

8f: 紅色固體，產(chǎn)率10%, m.p.163.7～164.2 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.56(dd,J=4.9 Hz, 1.9 Hz, 1H), 7.82(td,J=7.8 Hz, 1.9 Hz, 1H), 7.48(dd,J=7.8 Hz, 1.2 Hz, 1H), 7.36(ddd,J=7.8 Hz, 4.9 Hz, 1.2 Hz, 1H), 6.93(s, 2H), 4.43(s, 2H)。

8g: 黃色固體，產(chǎn)率21%, m.p.142.1～143.2 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.39(s, 1H), 7.63(d,J=8.2 Hz, 1H), 7.36(d,J=8.2 Hz, 1H), 6.87(s, 2H), 4.38(s, 2H), 2.30(s, 3H)。

8h： 黃色固體，產(chǎn)率6%, m.p.127.2～128.5 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.54(d,J=4.4 Hz, 2H), 7.77(d,J=7.9 Hz, 1H), 7.41(dd,J=7.9 Hz, 4.4 Hz, 1H), 6.95(s, 2H), 4.32(s, 2H)。

8i： 黃色固體，產(chǎn)率25%, m.p.240.1～251.3 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.39(d,J=2.3 Hz, 1H), 7.65(dd,J=7.9 Hz, 2.3 Hz, 1H), 7.26(d,J=7.9 Hz, 1H), 6.90(s, 2H), 4.26(s, 2H), 2.46(s, 3H)。

8j： 黃色固體，產(chǎn)率8%, m.p.181.3～182.1 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.71(d,J=2.1 Hz, 1H), 8.10(d,J=8.0 Hz, 1H), 8.02(dd,J=8.0 Hz, 2.1 Hz, 1H), 7.02(s, 2H), 4.48(s, 2H)。

(8)10的合成

在反應(yīng)瓶中加入9(4.5 g, 18.5 mmol)和1,4-二氧六環(huán) 20 mL，攪拌使其溶解;冰浴冷卻下滴加4 M HCl(23 mL, 92.5 mmol)，于室溫?cái)嚢璺磻?yīng)4 h(TLC監(jiān)測(cè)，展開劑：DCM/MeOH=10/1,V/V,溴甲酚綠顯色)。過濾得淡黃色固體103.2 g；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 12.73(s, 1H), 3.20～3.10(m, 2H), 2.86～2.74(m, 2H), 2.09～2.00(m, 2H), 1.65～1.55(m, 2H), 1.17(s, 3H); MS(ESI)m/z: 144.1{[M+H]+}。

(9)12的合成

在反應(yīng)瓶中加入11(2.88 g, 14.89 mmol)、10(3.2 g, 17.87 mmol)和乙醇20 mL，滴加N,N-二異丙基乙胺(6.1 mL, 37.23 mmol)，于室溫?cái)嚢璺磻?yīng)過夜(TLC監(jiān)測(cè)，展開劑A=3/1)。加入少量水，用4 M HCl調(diào)至pH=5，析出紅色固體，過濾，濾餅加入甲醇(20V)和活性炭(10%)，于65 ℃攪拌2 h脫色；用硅藻土過濾，濾液減壓濃縮得淡黃色固體124.1 g，兩步產(chǎn)率89%, m.p.152.7～153.9 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 12.57(s, 1H), 8.55(s, 1H), 5.24(s, 2H), 4.20(dt,J=14.0 Hz, 4.5 Hz, 2H), 3.49(ddd,J=13.6 Hz, 10.0 Hz, 3.7 Hz, 2H), 2.09(dt,J=14.0 Hz, 4.5 Hz, 2H), 1.53(ddd,J=13.6 Hz, 10.0 Hz, 3.7 Hz, 2H), 1.21(s, 3H)。

(10)13a～13f和13h～13l的合成(以13m為例)

在反應(yīng)瓶中加入12(100 mg, 0.332 mmol)和DCM 8 mL，攪拌使其溶解；加入EDCI(0.13 g, 0.664 mmol)、 HOBt(0.09 g, 0.664 mmol)、 DIPEA(0.165 mL, 0.996 mmol)，氬氣保護(hù)，室溫?cái)嚢?5 min后加入磺酰胺類化合物(0.21 g, 1.16 mmol)，攪拌反應(yīng)過夜(TLC監(jiān)測(cè)，展開劑：DCM/MeOH=20/1,V/V)。加入適量水，分液，水層用二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，依次用1M HCl和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮后經(jīng)硅膠柱層析(洗脫劑:DCM/MeOH=150/1)純化得油狀液體，加入4～5滴甲醇，加超聲，析出純白色固體13m34 mg，產(chǎn)率22%， HPLC純度98.7%, m.p.204.4～205.8 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 11.53(s, 1H), 8.56(s, 1H), 5.25(s, 2H), 4.13～4.04(m, 2H), 3.61～3.51(m, 2H), 3.33(d,J=6.4 Hz, 3H), 2.20～2.11(m, 2H), 1.87～1.77(m, 3H), 1.70～1.53(m, 5H), 1.26(s, 3H), 1.24～1.01(m, 5H);13C NMR(151 MHz, DMSO-d6)δ: 176.21, 170.74, 167.71, 161.41, 143.30, 117.48, 108.19, 92.98, 69.91, 58.37, 44.85, 42.19, 33.29, 33.24, 31.94, 25.38, 25.28, 23.34; MS(ESI)m/z: 459.3{[M-H]-}。

用類似的方法合成13a～13f、13h～13l。

13a: 白色固體，產(chǎn)率42%，HPLC純度99.3%, m.p.215.3～216.2 ℃；1H NMR(500 MHz, DMSO-d6)δ: 11.33(s, 1H), 8.56(s, 1H), 7.23(s, 4H), 5.25(s, 2H), 4.72(s, 2H), 4.09～4.01(m, 2H), 3.57～3.49(m, 2H), 2.58(q,J=7.6 Hz, 2H), 2.17～2.09(m, 2H), 1.60～1.52(m, 2H), 1.19(s, 3H), 1.14(t,J=7.6 Hz, 3H);13C NMR(126 MHz, DMSO-d6)δ: 176.38, 170.72, 167.67, 161.37, 144.42, 143.27, 130.69, 127.92, 117.46, 108.14, 92.91, 69.88, 57.62, 44.73, 42.21, 33.17, 27.86, 23.23, 15.55; MS(ESI)m/z: 481.3{[M-H]-}。

13b: 白色固體，產(chǎn)率37%， HPLC純度99.0%, m.p.220.7～221.4 ℃；1H NMR(500 MHz, DMSO-d6)δ: 11.33(s, 1H), 8.55(s, 1H), 7.27～7.22(m, 4H), 5.25(s, 2H), 4.72(s, 2H), 4.08～4.01(m, 2H), 3.56～3.49(m, 2H), 2.86(p,J=6.9 Hz, 1H), 2.17～2.10(m, 2H), 1.59～1.52(m, 2H), 1.19(s, 3H), 1.17(d,J=6.9 Hz, 6H);13C NMR(126 MHz, DMSO-d6)δ: 176.38, 170.72, 167.67, 161.37, 149.02, 143.27, 130.70, 126.47, 126.36, 117.46, 108.15, 92.91, 69.89, 57.62, 44.74, 42.22, 33.18, 23.77, 23.24; MS(ESI)m/z: 495.3{[M-H]-}。

13c: 白色固體，產(chǎn)率45%， HPLC純度98.9%, m.p.200.3～202.0 ℃；1H NMR(500 MHz, DMSO-d6)δ: 11.32(s, 1H), 8.55(s, 1H), 7.40(d,J=8.3 Hz, 2H), 7.25(d,J=8.3 Hz, 2H), 5.25(s, 2H), 4.72(s, 2H), 4.07～4.01(m, 2H), 3.56～3.49(m, 2H), 2.17～2.10(m, 2H), 1.59～1.52(m, 2H), 1.25(s, 9H), 1.19(s, 3H);13C NMR(126 MHz, DMSO-d6)δ: 176.36, 170.71, 167.65, 161.35, 151.23, 143.26, 130.40, 126.00, 125.31, 117.44, 108.12, 92.88, 69.86, 57.54, 44.71, 42.20, 34.31, 33.15, 30.98, 23.24; MS(ESI)m/z: 509.3{[M-H]-}。

13d: 白色固體，產(chǎn)率42%， HPLC純度99.1%, m.p.228.8～230.2 ℃；1H NMR(500 MHz, DMSO-d6)δ: 11.39(s, 1H), 8.50(s, 1H), 7.69～7.65(m, 2H), 7.64～7.59(m, 2H), 7.46～7.40(m, 4H), 7.38～7.34(m, 1H), 5.22(s, 2H), 4.83(s, 2H), 4.06～3.99(m, 2H), 3.49～3.42(m, 2H), 2.18～2.11(m, 2H), 1.59～1.52(m, 2H), 1.21(s, 3H);13C NMR(126 MHz, DMSO-d6)δ: 176.37, 170.65, 167.65, 161.45, 143.17, 140.52, 139.39, 131.28, 128.93, 128.22, 127.70, 126.81, 126.63, 117.44, 108.18, 92.98, 69.86, 57.67, 44.72, 42.27, 33.15, 23.37; MS(ESI)m/z: 529.3{[M-H]-}。

13e: 白色固體，產(chǎn)率16%， HPLC純度94.6%, m.p.216.5～217.5 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 11.33(s, 1H), 8.57(s, 1H), 7.18(d,J=8.1 Hz, 2H), 7.07(d,J=8.1 Hz, 2H), 5.26(s, 2H), 4.70(s, 2H), 4.08～4.00(m, 2H), 3.56～3.47(m, 3H), 2.17～2.09(m, 2H), 1.92～1.85(m, 1H), 1.60～1.50(m, 2H), 1.18(s, 3H), 0.97～0.90(m, 2H), 0.66～0.60(m, 2H);13C NMR(126 MHz, DMSO-d6)δ: 176.35, 170.69, 167.64, 161.36, 144.54, 143.23, 130.60, 125.73, 125.40, 117.44, 108.14, 92.91, 69.87, 57.61, 44.72, 42.20, 33.17, 23.25, 14.82, 9.61; MS(ESI)m/z: 493.2{[M-H]-}。

13f: 白色固體，產(chǎn)率36%， HPLC純度98.8%, m.p.192.6～193.5 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 11.48(s, 1H), 8.57(s, 1H), 7.31～7.26(m, 1H), 7.11～7.04(m, 2H), 5.26(s, 2H), 4.76(s, 2H), 4.08～4.03(m, 2H), 3.64～3.55(m, 2H), 2.31(s, 3H), 2.18～2.10(m, 2H), 1.99(s, 3H), 1.62～1.54(m, 2H);13C NMR(151 MHz, DMSO-d6)δ: 176.35, 170.73, 167.69, 161.40, 160.73(d,JCF=247.64 Hz), 143.28, 141.58, 132.90(d,JCF=3.02 Hz), 125.21, 117.47, 115.86(d,JCF=21.14 Hz), 108.16, 92.94, 69.90, 51.32, 44.71, 42.26, 33.19, 23.09, 20.64; MS(ESI)m/z: 485.3{[M-H]-}。

13h: 白色固體，產(chǎn)率31%， HPLC純度99.0%, m.p.180.4～181.7 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.49(s, 1H), 8.41～8.36(m, 1H), 7.71～7.63(m, 1H), 7.44～7.38(m, 1H), 7.24～7.14(m, 1H), 5.24(s, 2H), 4.46(s, 2H), 4.24～4.17(m, 2H), 3.44～3.37(m, 2H), 2.21～2.13(m, 2H), 1.24～1.21(m, 2H), 1.02(s, 3H);13C NMR(151 MHz, DMSO-d6)δ: 170.85, 167.79, 161.10, 148.65, 143.36, 135.90, 125.02, 122.20, 117.67, 107.44, 92.22, 69.88, 59.10, 45.78, 42.40, 31.55, 29.44; MS(ESI)m/z: 454.2{[M-H]-}。

13i:白色固體，產(chǎn)率30%， HPLC純度99.3%, m.p.176.7～177.2 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.50(s, 1H), 8.21(s, 1H), 7.49(d,J=7.9 Hz, 1H), 7.31(d,J=7.9 Hz, 1H), 5.24(s, 2H), 4.42(s, 2H), 4.24～4.15(m, 2H), 3.42～3.36(m, 2H), 2.19(s, 3H), 2.18～2.11(m, 2H), 1.25～1.23(m, 2H), 1.02(s, 3H);13C NMR(151 MHz, DMSO-d6)δ: 170.84, 167.77, 161.09, 148.79, 143.37, 136.25, 124.37, 117.64, 107.38, 92.19, 69.87, 58.68, 45.76, 42.37, 35.17, 17.56; MS(ESI)m/z: 468.3{[M-H]-}。

13j: 白色固體，產(chǎn)率30%， HPLC純度97.1%, m.p.163.4～164.7 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.56～8.51(m, 1H), 8.49～8.42(m, 2H), 7.74～7.66(m, 1H), 7.36(s, 1H), 5.76(s, 1H), 5.24(s, 2H), 4.13(s, 2H), 3.65～3.57(m, 2H), 3.34～3.29(m, 2H), 3.17～3.09(m, 2H), 2.17～2.10(m, 2H), 1.08(s, 3H);13C NMR(151 MHz, DMSO-d6)δ: 170.81, 167.76, 161.21, 153.38, 151.07, 143.35, 140.21, 137.99, 134.10, 123.17, 117.57, 115.59, 107.83, 92.57, 69.91, 54.88, 45.31, 42.32, 31.57, 29.44; MS(ESI)m/z: 454.3{[M-H]-}。

13k: 白色固體，產(chǎn)率38%， HPLC純度98.0%, m.p.240.0～241.1 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.53(s, 1H), 8.30(s, 1H), 7.57(d,J=8.0 Hz, 1H), 7.20(d,J=8.0 Hz, 1H), 5.76(s, 1H), 5.25(s, 2H), 4.48(s, 2H), 4.19～4.08(m, 2H), 3.52～3.35(m, 2H), 2.41(s, 3H), 2.17～2.09(m, 2H), 1.56～1.36(m, 2H), 1.08(s, 3H);13C NMR(151 MHz, DMSO-d6)δ: 170.77, 167.72, 161.22, 150.29, 143.32, 138.21, 122.60, 117.54, 107.83, 92.59, 69.89, 53.45, 42.29, 31.54, 29.43, 23.69; MS(ESI)m/z: 468.3{[M-H]-}。

13l: 白色固體，產(chǎn)率35%， HPLC純度97.3%, m.p.187.4～188.7 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.59(s, 1H), 8.51(s, 1H), 7.98(d,J=7.8 Hz, 1H), 7.91(d,J=7.8 Hz, 1H), 5.76(s, 1H), 5.24(s, 2H), 4.52(s, 2H), 4.22～4.09(m, 2H), 3.32～3.21(m, 2H), 2.17～2.06(m, 2H), 1.37～1.26(m, 2H), 1.02(s, 3H);13C NMR(151 MHz, DMSO-d6)δ: 170.84, 167.79, 161.23, 152.51, 143.34, 139.13, 128.39, 117.62, 107.65, 92.45, 69.91, 54.62, 45.73, 42.37, 34.87; MS(ESI)m/z: 479.3{[M-H]-}。

(11)13g和13n的合成(以13g為例)

在反應(yīng)瓶中加入12(100 mg, 0.332 mmol)和乙腈8 mL，攪拌使其溶解；加入TBTU(0.14 g, 0.432 mmol)、 LiCl(0.0035 g, 0.083 mmol)、 TEA(0.185 mL, 1.328 mmol)，氬氣保護(hù)，于室溫?cái)嚢?5 min后加入磺酰胺類化合物(77.06 mg, 0.365 mmol)，攪拌下反應(yīng)過夜(TLC監(jiān)測(cè)，展開劑：DCM/MeOH=20/1,V/V)。加入適量水，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，依次用1M HCl和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮后經(jīng)硅膠柱層析(洗脫劑:DCM/MeOH=150/1)純化得油狀液體，加入4～5滴甲醇，超聲，析出純白色固體13g0.1 g，產(chǎn)率62%， HPLC純度97.5%, m.p.186.3～187.2 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 12.24(s, 1H), 8.54(s, 1H), 7.63(d,J=3.9 Hz, 1H), 7.23(d,J=3.9 Hz, 1H), 5.23(s, 2H), 5.07(s, 2H), 4.11～4.01(m, 2H), 3.49～3.40(m, 2H), 2.15～2.05(m, 2H), 1.60～1.49(m, 2H), 1.18(s, 3H);13C NMR(126 MHz, DMSO-d6)δ: 175.50, 170.66, 167.64, 161.31, 148.57, 143.20, 140.00, 133.89, 128.03, 117.41, 108.17, 92.91, 69.88, 44.76, 42.23, 33.20, 23.04; MS(ESI)m/z: 493.2{[M-H]-}。

用類似的方法合成白色固體13n，產(chǎn)率36%，純度97.6%, m.p.185.7～186.9 ℃；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 11.57(s, 1H), 8.56(s, 1H), 5.69～5.63(m, 1H), 5.63～5.57(m, 1H), 5.25(s, 2H), 4.11～4.04(m, 2H), 3.62～3.53(m, 3H), 3.45～3.41(m, 2H), 2.20～2.13(m, 3H), 2.02(s, 2H), 1.91～1.80(m, 2H), 1.65～1.56(m, 3H), 1.26(s, 3H);13C NMR(151 MHz)δ: 170.77, 167.72, 161.27, 143.31, 126.61, 117.54, 107.85, 92.64, 69.88, 45.33, 42.19, 30.75, 29.44, 27.67, 24.04; MS(ESI)m/z: 457.3{[M-H]-}。

1.3 體外抗血小板活性測(cè)試

志愿者全血抽取靜脈血，以l/6的右旋枸櫞酸ACD (85 mmol/L枸櫞酸鈉, 71.38 mmol/枸櫞酸, 27.78 mmol/L葡萄糖)抗凝，于室溫離心10 min，分離富血小板血漿(PRP)。

在雙通道光血小板聚集儀上進(jìn)行比濁法血小板聚集試驗(yàn)。首先預(yù)熱血小板聚集儀至37 ℃，比濁管中加入400 μL血小板懸液和攪拌子，以PPP為參比，于37 ℃恒溫恒速攪拌下描記基線，待基線穩(wěn)定后，加入不同濃度的13a～13n和對(duì)照藥AZD-1283處理血小板2 min后，加入誘導(dǎo)劑ADP觀察記錄聚集曲線變化，并計(jì)算IC50值[19]。

2 結(jié)果與討論

2.1 合成

有關(guān)芳基甲磺酰胺、非芳基甲磺酰胺類化合物合成的報(bào)道較少，本文介紹了合成該類化合物的兩種方法(Scheme 1)：從價(jià)廉易得的氯甲基苯環(huán)類化合物(1a～1d)出發(fā)，經(jīng)硫脲鹽酸鹽(2a～2d)的氯代和氨解反應(yīng)合成苯基甲磺酰胺及其衍生物(4a～4d)；通過相應(yīng)的鹵代物(5a～5j)形成磺酸鈉(6a～6e)或磺酸(6f～6j)，再經(jīng)不同氯代試劑(PCl5、 POCl3、 POCl3+ PCl5)氯代，順利實(shí)現(xiàn)甲磺酰氯的合成，最后經(jīng)氨解反應(yīng)得到相應(yīng)的甲磺酰胺類化合物8a～8j。

1-Boc-4-甲基-4-哌啶甲酸(9)在鹽酸條件下脫Boc保護(hù)基，形成的鹽酸鹽不溶于1,4-二氧六環(huán)溶液，可直接過濾得到。在DIPEA堿性條件下，哌啶鹽酸鹽類化合物(10)與吡啶類化合物(11)發(fā)生親核取代反應(yīng)制備出關(guān)鍵中間體12。合成13a～13n的關(guān)鍵在于羧酸片段12與甲磺酰胺類化合物的縮合。通過不同的縮合條件(EDCI+HOBt、 TBTU)可實(shí)現(xiàn)片段連接。需要注意的是，該步產(chǎn)率較低的原因在于磺酰胺的親核能力較弱和羧酸與縮合試劑形成的活性酯中間體會(huì)部分水解為羧酸。我們嘗試升高溫度來提高磺酰胺的親核能力，但發(fā)現(xiàn)隨著反應(yīng)溫度的升高，活性酯并沒有相應(yīng)的減少，反而水解成羧酸的量增加了，導(dǎo)致產(chǎn)率降低。通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)比較可知，當(dāng)溫度在25 ℃左右時(shí)產(chǎn)率較高。后處理時(shí)通過硅膠柱層析初次純化后再經(jīng)過甲醇的打漿可將純度控制在95%以上，滿足了后續(xù)活性測(cè)試的要求。

2.2 抗血小板活性

表1為13a～13n體外抗血小板聚集活性。由表1可知，13c和13g具有一定的抗血小板聚集活性，其中化合物13g的IC50值為44.08 μM。

表1 13a～13n對(duì)ADP誘導(dǎo)血小板聚集率的影響

2.3 構(gòu)效關(guān)系

由表1可見，大部分化合物活性下降甚至喪失，其中化合物13g表現(xiàn)出一定的體外抗血小板聚集活性(IC50=44.08 μM)。初步構(gòu)效分析表明：(1)依諾格雷是諾華公司研發(fā)的一種口服抗血小板藥物，曾進(jìn)入過臨床Ⅲ期[20]，設(shè)想引入其結(jié)構(gòu)中的5-氯噻吩優(yōu)勢(shì)片段，合成出了13g，而13g的體外活性也驗(yàn)證了這一設(shè)想的合理性；(2)將DY-038結(jié)構(gòu)中的疏水片段中的甲基替換成不同的取代基(13a～13f)時(shí)，活性幾乎喪失。同樣地，將疏水片段(對(duì)甲基苯基)替換成吡啶及其衍生物(13h～13l)、非芳香環(huán)(13m和13l)時(shí)，活性也幾乎喪失。這提示疏水片段(對(duì)甲基苯基)可能是DY-038的優(yōu)勢(shì)構(gòu)象，后期可作進(jìn)一步研究。

以DY-038為先導(dǎo)，對(duì)其疏水側(cè)鏈進(jìn)行較為系統(tǒng)的構(gòu)效關(guān)系研究，設(shè)計(jì)、合成了14個(gè)新型的雙環(huán)吡啶類化合物(13a～13n)，并研究了它們體外對(duì)人血小板聚集的抑制活性。結(jié)果表明，大部分化合物活性下降或消失，化合物13g表現(xiàn)出一定的體外抗血小板聚集活性(IC50=44.08 μM)，其疏水側(cè)鏈結(jié)構(gòu)與DY-038有較大差異，這為進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)優(yōu)化提供了依據(jù)和思路。