楊志峰

高危型人乳頭狀瘤病毒(high-risk liuman papillomavirus，HR-HPV)的持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素［1］，通過檢測HPV 可以對患者宮頸癌起到一定的預(yù)測作用。目前臨床上廣泛應(yīng)用的HPV 檢測方法是HPV-DNA 檢測，其預(yù)測病變風(fēng)險(xiǎn)的效果好于細(xì)胞學(xué)檢測［2］。不過單純的病毒載量檢測無法具體分辨HPV 病毒型別，且多數(shù)患者為HPV 一過性感染，HPV-DNA 檢測在宮頸癌早期病變以及患者病情進(jìn)展的診斷價(jià)值不高。研究發(fā)現(xiàn)［3］，機(jī)體中HPV 病毒的復(fù)制極有可能與高危型HPV 中的E6、E7 編碼的癌蛋白有關(guān)，微小核糖核酸(miRNA)失調(diào)在宮頸癌變及進(jìn)展的早期階段較常出現(xiàn)，可以反映宿主對HPV 感染的反應(yīng)，從而用于宮頸癌的早期診斷。本次研究對HPVDNA 與RNA 狀態(tài)與宮頸癌前病變患者病情變化的相關(guān)性進(jìn)行了分析討論，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選擇2019 年1～12 月在本院經(jīng)組織病理學(xué)檢驗(yàn)后確診為宮頸疾病的100 例患者，根據(jù)病情分為A 組(宮頸癌患者，33 例)與B 組(宮頸癌前病變患者，67 例)，另選擇100 例同期在本院進(jìn)行宮頸癌篩查的健康女性作為C 組。A 組年齡27～48 歲，平均年齡(35.47±4.63)歲；孕次0～5 次，產(chǎn)次0～3 次。B 組年齡26～47 歲，平均年齡(35.25±4.15)歲；孕次0～4 次，產(chǎn)次0～3 次；分型：CIN Ⅰ型34 例，CIN Ⅱ型20 例，CIN Ⅲ型13 例。C 組年齡25～49 歲，平均年齡(35.33±4.56)歲；孕次0～3 次，產(chǎn)次0～2 次。三組年齡、孕次、產(chǎn)次等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本次研究經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)。宮頸疾病患者納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18 歲；②患者經(jīng)病理學(xué)檢查明確病情；③符合《中國宮頸癌及癌前病變規(guī)范化診療指南(試行)》中宮頸疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］；④配合檢查者；⑤了解研究內(nèi)容，自愿參加并簽訂知情同意書。宮頸疾病患者排除標(biāo)準(zhǔn)：①有子宮手術(shù)史；②幼稚子宮；③合并其他惡性腫瘤；④臨床資料不全；⑤中途退出者。健康女性納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18 歲；②因外陰瘙癢、陰道流血、陰道分泌物增多、白帶異常等癥狀進(jìn)行宮頸癌篩查；③配合檢查進(jìn)行；④了解研究內(nèi)容，自愿參加并簽訂知情同意書。健康女性排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期和哺乳期患者；②有子宮手術(shù)史；③幼稚子宮；④臨床資料不全；⑤中途退出者。

1.2 方法 所有研究對象均進(jìn)行HPV-DNA 和HPV E6/E7 mRNA 檢測。檢測方法：檢查前3 d 禁止性生活，取膀胱截石位，陰窺充分暴露宮頸，用棉簽拭擦宮頸表面分泌物，用無菌宮頸采樣器緊貼宮頸表面順時(shí)針旋轉(zhuǎn)3 周取樣。將取樣后的刷頭浸入細(xì)胞保存液并充分漂洗，洗脫標(biāo)本然后沿刷柄折痕處折斷保留刷頭，旋緊管蓋，貼好標(biāo)簽后送檢。①HPV-DNA：應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)反向點(diǎn)雜交技術(shù)檢測高危HPV-DNA，包 括HPV16、18、31、33、35、39、45、S1、52、56、58、59、66、68、73。陽性標(biāo)準(zhǔn)：檢出任一型高危HPV-DNA 含量＞1 pg/ml。②HPV E6/E7 mRNA：采用APTIMA HPV 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測，將提取的mRNA 應(yīng)用轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增(TMA)法擴(kuò)增，使用HPA法對擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行檢測，通過選擇劑淬滅未雜交探針上的熒光區(qū)分雜交和未雜交探針，然后使用光度計(jì)測量雜交混合物熒光光量子，分析信號與截點(diǎn)比值(S/CO)進(jìn)行結(jié)果判定。陽性標(biāo)準(zhǔn)：檢測值≥1。HPV-DNA 和HPV E6/E7 mRNA 檢測任一結(jié)果陽性的患者進(jìn)行鏡下組織病理學(xué)活檢。其中檢驗(yàn)結(jié)果為宮頸癌前病變的患者按照進(jìn)行CINⅠ～Ⅲ分型。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較各組HPV 感染情況及其亞型分布；②比較各組HPV-DNA 負(fù)荷量、HPV E6/E7 mRNA 表達(dá)量情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組HPV 感染情況及其亞型分布比較 B 組單一感染率低于A 組，多重感染率高于A 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；C 組所有受檢者無感染發(fā)生。在亞型分布上，A 組、B 組中HPV16 占比高于其他型，B 組HPV16 占比高于A 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 各組HPV 感染情況及其亞型分布比較 ［n(%)］

2.2 各組HPV-DNA 負(fù)荷量、HPV E6/E7 mRNA 表達(dá)量情況比較 A、C 組HPV-DNA 負(fù)荷量低于B 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；B 組中HPV-DNA 負(fù)荷量CIN Ⅲ型＞CIN Ⅱ型＞CINⅠ型，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在HPV E6/E7 mRNA 表達(dá)量上，A 組＞B 組＞C 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；B 組中HPV E6/E7 mRNA 表達(dá)量CIN Ⅲ型＞CIN Ⅱ型＞CINⅠ型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 各組HPV-DNA 負(fù)荷量、HPV E6/E7 mRNA 表達(dá)量情況比較()

表2 各組HPV-DNA 負(fù)荷量、HPV E6/E7 mRNA 表達(dá)量情況比較()

注：與C 組比較，aP＜0.05；與A 組比較，bP＜0.05

3 討論

HPV 感染宮頸細(xì)胞后會將其DNA 通過非同源重組方式與宿主細(xì)胞基因進(jìn)行整合，進(jìn)而大量轉(zhuǎn)錄致癌基因E6、E7 的mRNA，引起HPV E6/E7 癌蛋白高表達(dá)［5］。然后癌蛋白分別與人體P53 蛋白和pRb 蛋白結(jié)合，使腫瘤抑制基因p53 與pRb 失活，損傷細(xì)胞DNA，激活端粒酶活性，最終引起細(xì)胞過度增殖，觸發(fā)細(xì)胞永生化及惡性轉(zhuǎn)化，造成惡性腫瘤發(fā)生［6］。因此，臨床上通過檢測HPV E6/E7 mRNA 的表達(dá)狀況可以對患者HPV DNA 與宿主細(xì)胞基因的整合情況進(jìn)行判斷，從而分析患者是否為一過性HPV 感染或?qū)m頸癌前病變，有利于臨床上對宮頸癌前病變患者的診斷以及病情進(jìn)展的判斷。

本次研究中對HPV-DNA 和RNA 狀態(tài)對宮頸癌前病變患者的病情變化的關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，B 組單一感染率55.22%低于A 組的75.76%，多重感染率44.78%高于A 組的24.24%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；C 組所有受檢者無感染發(fā)生。有研究顯示［7］HPV-DNA 負(fù)荷高低與患者的病情顯著相關(guān)，即 HPVDNA 負(fù)荷高病變的風(fēng)險(xiǎn)遞增，HPV-DNA 與宮頸疾病患者病情相關(guān)性還有待進(jìn)一步研究證實(shí)。HPV E6/E7 mRNA 表達(dá)量檢測情況則顯示隨宮頸患者病情進(jìn)展，表達(dá)量呈明顯上升趨勢，B 組中HPV E6/E7 mRNA 表達(dá)量CIN Ⅲ型＞CIN Ⅱ型＞CINⅠ型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

綜上所述，HPV E6/E7 mRNA 檢測相較于HPVDNA 檢測在判斷宮頸癌前病變患者疾病進(jìn)展情況上有著更好的應(yīng)用價(jià)值，臨床上通過綜合應(yīng)用相關(guān)檢測方法進(jìn)行宮頸癌篩查可以更好的實(shí)現(xiàn)對疾病的早期診斷、早期治療，從而為女性宮頸健康提供過更好的保障。