栗鳳娟，梅麗，王軍軍，趙珊珊

（江蘇萬邦醫(yī)藥科技有限公司，江蘇徐州 221004）

2型糖尿?。═2DM）主要由胰島素抵抗和胰島β細胞功能降低引起[1]，是一種常見的內(nèi)分泌代謝疾病，具有遺傳易感性，容易在環(huán)境因素的觸發(fā)下發(fā)病。門冬胰島素30注射液是一種預混型胰島素類似物，含有30%的速效成分（門冬胰島素）和70%的中效成分（魚精蛋白門冬胰島素），既可以提供降低餐后血糖的速效胰島素成分，又可以提供降低空腹血糖和基礎血糖的中效胰島素成分[2]。A1chieve等研究觀察門冬胰島素30注射液在臨床治療2型糖尿病的安全性和療效，證實血糖控制不佳的中國2型糖尿病患者，無論是否已經(jīng)接受過口服降糖藥或其他胰島素治療，接受門冬胰島素30注射液治療24周后耐受性和安全性均良好，同時顯著改善了血糖控制[3]。另外一項國際開放、非隨機、非干預的臨床觀察性試驗——IMPROVETM研究同樣表明，門冬胰島素30注射液起始治療26周后，患者的HbA1c、空腹血糖水平和重度低血糖事件發(fā)生概率均顯著下降，從而也證明了門冬胰島素30注射液在2型糖尿病患者起始治療中可以兼顧有效性和安全性[4]。目前大量研究表明，門冬胰島素30注射液在臨床治療2型糖尿病具有良好的安全性、方便性和有效性，值得臨床推廣應用。所以，門冬胰島素30注射液在臨床使用過程中穩(wěn)定性的研究具有非常重要的意義。

門冬胰島素30注射液已經(jīng)在臨床中廣泛應用，近年來，越來越多的學者研究其在臨床應用中的療效，但是對其使用中的質(zhì)量還未見報道[5-10]。選取甲乙兩個公司生產(chǎn)的門冬胰島素30 注射液各3 批，按照筆式注射器使用說明書，對筆芯內(nèi)的門冬胰島素30注射液完全模擬臨床注射進行操作，至注射行程終點。按照人均體重75 kg，0.4 IU/（kg·d）的給藥劑量進行計算，選擇注射劑量30 IU，同時選取患者單次注射劑量100 μL（即10 IU）作為小樣本量待測供試品溶液的體積。同時，為排除筆式注射器的注射精度對實驗結(jié)果的影響，采用首先注射出較大體積的藥液，再用微量移液器吸取的方式，盡量排除可能引入的系統(tǒng)誤差[1]。孫雪等研究發(fā)現(xiàn)小樣本量法和大樣本量法檢測同批次的預混注射液，檢驗結(jié)果無顯著差異，并符合方法學的驗證要求[11]。本文采用高效液相色譜儀對筆芯中門冬胰島素30注射液的初始、中間、取樣后筆芯中剩余藥液的含量與可溶性門冬胰島素進行檢測，評價其在臨床使用中是否穩(wěn)定和符合相關(guān)規(guī)定，為門冬胰島素30注射液正確使用和保存提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1 試劑

乙腈，色譜純，德國Merck公司；無水硫酸鈉、乙醇胺，分析純，國藥集團化學試劑有限公司；磷酸，質(zhì)量分數(shù)≥85.0%，國藥集團化學試劑有限公司；門冬胰島素（對照），15 mg/支，批號410011-201902，中國食品檢定研究院；諾和銳30，3 mL∶300 IU，批號2019032052、2019031942、2019021142，諾和諾德（中國）制藥有限公司；門冬胰島素注射液，3 mL∶300 IU，批號201903504、201903505、201903506，江蘇萬邦生化醫(yī)藥集團有限責任公司。

1.1.2 儀器

SPD-M20A DAD檢測器高效液相色譜儀，島津企業(yè)管理（中國）有限公司；FE20酸度計，梅特勒集團；XS105分析天平，梅特勒集團。

1.2 試驗方法

1.2.1 色譜條件

色 譜 柱：Inertsil ODS-SP（250 mm×4.0 mm，5 μm），流動相A為0.1 mol/L硫酸鹽緩沖液（pH3.4）-乙腈（90∶10），流動相B為乙腈－水（50∶50），柱溫：40 ℃，流速：1.0 mL/min，檢測波長：214 nm，樣品倉溫度：5 ℃，進樣量：20 μL。

1.2.2 系統(tǒng)適用性溶液的制備

取門冬胰島素對照品適量，用0.01 mol/L鹽酸溶液溶解并且稀釋制成3.5 mg/mL的溶液，室溫放置24 h以上，使B3Asp門冬胰島素和A21Asp門冬胰島素的含量不低于1%，作為系統(tǒng)適用性溶液。

1.2.3 對照品溶液的制備

精密稱取門冬胰島素對照品適量，加0.01 mol/L鹽酸溶液溶解并且定量稀釋制成100 IU/mL的溶液，作為對照品溶液。

1.2.4 供試品溶液的制備

每批樣品各取12支，平均分為6組進行試驗。完全按照筆式注射器及筆芯使用說明書操作，緩慢顛倒或滾動筆芯至規(guī)定的次數(shù)，將筆芯和注射器針頭正確安裝在筆式注射器上，首先排出筆芯中的氣泡，再正確設置注射劑量30 IU（1～9 d，模擬患者用法和用量，按照體重75 kg，0.4 IU/（kg·d）的給藥劑量進行計算），并推注出藥液，取下針頭，將上述裝有筆芯的注射器在室溫下避光放置。每24 h重復上述操作，并分別在1 d、3 d、6 d和9 d收集推注出的藥液至容器中，并快速用微量移液器精密吸取兩份200 μL藥液。按照上述操作方法推注至行程終點前15 IU處，放置24 h，將注射器與筆芯緩慢顛倒或滾動筆芯規(guī)定的次數(shù)，推注藥液至行程終點，并快速用微量移液器從容器中精密吸取200 μL藥液，進行剩余藥液混勻后的檢測[1]。

取200 μL藥液，加入6 μL 1 mol/L鹽酸溶液酸化，振搖至完全澄清，作為含量的供試品溶液。取200 μL藥液與200 μL 0.1 mol/L Tris-鹽酸緩沖液（pH8.2）混合均勻，（25±1）℃放置1 h，過濾后取濾液，每200 μL加入1 mol/L鹽酸溶液6 μL，作為可溶性門冬胰島素的供試品溶液。

2 結(jié)果與分析

在系統(tǒng)適用性色譜圖中，門冬胰島素主峰與B3Asp門冬胰島素和A21Asp門冬胰島素峰的分離度為3.91，門冬胰島素主峰的拖尾因子為0.96，均符合規(guī)定。按外標法以門冬胰島素峰與B28Asp門冬胰島素、A21Asp門冬胰島素、B3Asp門冬胰島素和B3isoAsp門冬胰島素峰面積之和計算門冬胰島素含量。門冬胰島素30注射液使用過程中及使用終末期含量與可溶性門冬胰島素的檢測結(jié)果見表1。

表1 門冬胰島素30注射液使用過程中及使用終末期門冬胰島素含量與可溶性門冬胰島素檢測結(jié)果

本研究中的注射行程終點依據(jù)筆式注射器使用說明書“注射停止”的描述確定。在實驗中考察了甲乙兩個公司生產(chǎn)的門冬胰島素30 注射液各3 批筆芯樣品的實際裝量，并對注射至行程終點后殘余在筆芯中的藥液體積進行了檢測，最終確定了注射至行程終點的取樣時間點，并且選取了注射至行程終點前15 IU處作為剩余藥液的混勻體積，用來考察玻璃珠在筆芯內(nèi)活動空間減小后，藥液中門冬胰島素含量和可溶性門冬胰島素是否穩(wěn)定并符合規(guī)定。結(jié)果表明，筆芯中門冬胰島素30注射液在使用過程中及使用終末期的含量和可溶性門冬胰島素均沒有顯著差異，并且門冬胰島素含量與可溶性門冬胰島素均符合規(guī)定標準（門冬胰島素含量標準為95.0%～105.0%，可溶性門冬胰島素標準為25.0%～35.0%）。所以門冬胰島素30注射液在使用中及使用終末期均可保證成分充分混勻。

由于本實驗的溫度僅模擬了臨床用藥常見的使用溫度和保存溫度，不能代表其他特殊的溫度條件，因此患者在使用過程中需要嚴格按照使用說明書操作才可以完全保證藥品的質(zhì)量。

在可溶性門冬胰島素的檢測過程中，為了使部分與魚精蛋白物理吸附的可溶性門冬胰島素解吸附，向藥液中加入0.1 mol/L的Tris緩沖液（pH 8.2）?；鞈乙褐械木w大小為1～30 μm，通過0.2 μm濾膜過濾，可以使可溶性門冬胰島素的檢測結(jié)果準確可靠。

3 結(jié)論

患者在臨床使用中嚴格依據(jù)筆式注射器及筆芯使用說明書進行操作，門冬胰島素30注射液筆芯內(nèi)門冬胰島素含量與可溶性門冬胰島素均未發(fā)生顯著變化，穩(wěn)定性良好。