張松林 熊蕾蕾 余燕娟 靳秀紅

鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院河南省兒童醫(yī)院鄭州兒童醫(yī)院呼吸內(nèi)科 450000

肺炎支原體肺炎是小兒常見肺炎類型，近年來發(fā)病率明顯上升，且患兒群體呈低齡化趨勢(shì)，重癥肺炎比例明顯增多，治療難度提高。一般認(rèn)為病程較長(zhǎng)、反復(fù)發(fā)作、病情較重、大環(huán)內(nèi)脂類抗生素治療效果不佳者為難治性肺炎支原體肺炎，治療難度更大，通過分析其病情程度針對(duì)性制定干預(yù)措施對(duì)改善預(yù)后有積極作用。有相關(guān)報(bào)道指出，免疫紊亂是肺炎支原體肺炎主要發(fā)病機(jī)制，且可誘導(dǎo)多種炎性細(xì)胞因子，從而形成全身免疫反應(yīng)及炎性反應(yīng)［1］。本研究以鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院收治的肺炎患兒及支氣管狹窄、需做纖維支氣管鏡、無感染病灶的兒童為研究對(duì)象，以分析T細(xì)胞亞群、白細(xì)胞介素（IL）-8、IL-10、調(diào)節(jié)激活正常T 細(xì)胞表達(dá)和分泌因子（RANTES）的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院2018 年7月至2021年1月收治的支氣管狹窄患兒進(jìn)行前瞻性研究，根據(jù)不同感染類型分組，難治性肺炎支原體肺炎患兒34 例為觀察組，其中男21 例，女13 例；年齡范圍為3～12 歲，年齡（7.43±1.09）歲；病程范圍為5～22 d，病程（13.61±4.16）d。普通支氣管肺炎患兒32 例為肺炎組，其中男20 例，女12 例；年齡范圍為2～12 歲，年齡（7.24±1.15）歲；病程范圍為4～23 d，病程（13.95±4.23）d。支氣管狹窄、需做纖維支氣管鏡、無感染病灶的兒童31例為對(duì)照組，其中男20例，女11 例；年齡范圍為2～11 歲，年齡（7.06±1.20）歲。3 組研究對(duì)象的性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。患兒家屬知情本研究并簽署同意書。

本研究經(jīng)鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過（倫審號(hào)2019-0513）。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn) 難治性肺炎支原體肺炎納入標(biāo)準(zhǔn)：入院前或者入院后肺炎支原體肺炎患兒經(jīng)大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物正規(guī)治療7 d及以上，臨床征象加重，仍持續(xù)發(fā)熱，肺部影像學(xué)所見加重者。肺炎組即支氣管肺炎納入標(biāo)準(zhǔn)：肺部體征可聞及密布固定性的中、細(xì)濕啰音，胸部X 線片征象為肺野中內(nèi)帶小片影或小斑片影，部分融合成較大片狀影，符合支氣管肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：即胸部CT 提示局部氣管狹窄，需進(jìn)一步行纖維支氣管鏡檢查，肺部無感染的健康兒童。排除標(biāo)準(zhǔn)：哮喘、其他變態(tài)反應(yīng)性病史；采血前1 個(gè)月均無免疫藥物治療史；合并其他病原體感染；心肺功能異常。

1.3 方法 3 組兒童于入院次日晨起空腹采取靜脈血3 ml，其中2 ml 不抗凝，3 000 r/min（離心半徑8 cm），離心15 min，-80 ℃凍存血清。另1 ml 新鮮全血EDTA-2Na 抗凝后上流式機(jī)待用。采用流式細(xì)胞儀收獲淋巴細(xì)胞，用Cell Quest Plot 軟件程序分析數(shù)據(jù)獲取CD4+、CD8+的表達(dá)率。采用ELISA 法檢測(cè)血清IL-8、IL-10、RANTES 濃度，其中血清IL-8、IL-10在標(biāo)本采集當(dāng)天由鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科完成，血清RANTES 濃度檢測(cè)由鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科協(xié)同完成。試劑盒均購(gòu)自北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司。

1.4 觀察指標(biāo) （1）統(tǒng)計(jì)3組T細(xì)胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES 水平檢測(cè)結(jié)果。（2）分析難治性肺炎支原體肺炎患兒不同病情程度的T 細(xì)胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES 水平。疾病嚴(yán)重程度以crub-65評(píng)分進(jìn)行評(píng)估，每存在下列情況之一則計(jì)1 分：意識(shí)障礙、血尿素氮＞7 mmol/L、呼吸頻率＞30次/min、收縮壓＜90 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）或舒張壓＜60 mmHg、年齡＞65 歲，1 分表示輕度，2 分表示中度，3 分及以上表示重度。（3）分析難治性肺炎支原體肺炎患兒T 細(xì)胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES 水平與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。（4）難治性肺炎支原體肺炎患兒疾病嚴(yán)重程度的多因素分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料采取Bartlett方差齊性檢驗(yàn)與Shapiro-wilk正態(tài)性檢驗(yàn)，均確認(rèn)具備方差齊性且近似服從正態(tài)分布，以（±s）表示，采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，組間比較采用單因素方差分析或Kruskal-Wallis 檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)系數(shù)進(jìn)行直線相關(guān)分析，以logistic 多元回歸方程行多因素分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 3 組T 細(xì)胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES 水平檢測(cè)結(jié)果 3組CD4+、CD8+、IL-8、IL-10、RANTES 水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），且觀察組均CD4+、CD8+水平均低于肺炎組、對(duì)照組，IL-8、IL-10、RANTES水平均高于肺炎組、對(duì)照組（均P＜0.05）。見表1。

表1 3組研究對(duì)象T細(xì)胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES水平檢測(cè)結(jié)果（± s）

表1 3組研究對(duì)象T細(xì)胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES水平檢測(cè)結(jié)果（± s）

注：觀察組為難治性肺炎支原體肺炎患兒，肺炎組為普通支氣管肺炎患兒，對(duì)照組為支氣管狹窄、需做纖維支氣管鏡、無感染病灶兒童；IL為白細(xì)胞介素，RANTES為調(diào)節(jié)激活正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子；與觀察組比較，aP＜0.05；與肺炎組比較，bP＜0.05

CD4+（%）22.53±4.19 34.36±4.93a 35.12±6.75a 57.416＜0.001 CD8+（%）22.11±2.03 26.62±2.35a 27.06±3.15a 38.570＜0.001 RANTES（μg/L）33.51±3.17 30.06±3.26a 26.84±3.12ab 35.651＜0.001組別觀察組肺炎組對(duì)照組F值P值例數(shù)34 32 31 IL-8（pg/ml）26.38±4.25 14.16±2.91a 7.52±1.69ab 298.193＜0.001 IL-10（pg/ml）15.73±2.11 11.06±1.85a 7.90±1.66ab 141.822＜0.001

2.2 難治性肺炎支原體肺炎患兒不同病情程度T細(xì)胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES 水平 不同嚴(yán)重程度難治性支原體肺炎患兒CD4+、CD8+、IL-8、IL-10、RANTES 水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），隨病情程度加重CD4+、CD8+水平呈下降趨勢(shì)，IL-8、IL-10、RANTES 水平呈上升趨勢(shì)（均P＜0.05）。見表2。

表2 難治性肺炎支原體肺炎患兒不同病情程度T細(xì)胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES水平（± s）

表2 難治性肺炎支原體肺炎患兒不同病情程度T細(xì)胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES水平（± s）

注：IL為白細(xì)胞介素，RANTES為調(diào)節(jié)激活正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子；與輕度患兒比較，aP＜0.05，與中度患者比較，bP＜0.05

病情程度輕度中度重度F值P值例數(shù)11 13 10 CD4+（%）25.76±4.03 21.64±3.67a 17.52±3.09ab 13.458＜0.001 CD8+（%）24.50±2.15 22.16±2.46a 18.23±2.88ab 16.746＜0.001 RANTES（μg/L）29.41±3.85 32.79±4.05a 35.76±3.84ab 6.885 0.003 IL-8（pg/ml）17.35±3.49 25.56±3.21a 29.46±3.48ab 35.689＜0.001 IL-10（pg/ml）12.46±2.53 15.98±1.65a 18.33±2.41ab 19.221＜0.001

2.3 難治性肺炎支原體肺炎患兒T 細(xì)胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES 水平與病情程度的相關(guān)性 Spearman 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，CD4+、CD8+水平與難治性肺炎支原體肺炎患兒病情嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)（r1=-0.516，P1＜0.001；r2=-0.489，P2＜0.001），IL-8、IL-10、RANTES 水平與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)（r1=0.564，P1＜0.001；r2=0.612，P2＜0.001；r3=0.441，P3＜0.001）。

2.4 難治性肺炎支原體肺炎患兒疾病嚴(yán)重程度的多因素分析 結(jié)果顯示，CD4+、CD8+、IL-8、IL-10、RANTES 水平均為難治性肺炎支原體肺炎患兒病情嚴(yán)重程度的影響因素（均P＜0.05），見表3。

表3 難治性肺炎支原體肺炎患兒疾病嚴(yán)重程度的多因素分析（34例）

3 討 論

有數(shù)據(jù)顯示，近10 年肺炎支原體肺炎感染率提高近10 倍，難治性肺炎支原體肺炎發(fā)病率同樣有上升趨勢(shì)［2-3］。肺炎支原體是造成呼吸道感染的主要致病菌，同時(shí)是導(dǎo)致小兒肺炎的首要因素。肺支原體肺炎發(fā)病緩慢，臨床癥狀無明顯特異性，但若未及時(shí)干預(yù)，可引發(fā)肺部嚴(yán)重?fù)p傷，甚至誘發(fā)呼吸衰竭，威脅患兒健康［4-5］。難治性肺炎支原體肺炎是反復(fù)出現(xiàn)的、刺激性的肺炎支原體肺炎，目前臨床認(rèn)為其主要致病因素與免疫功能異常、合并其他感染等因素有關(guān)［6-7］。免疫功能紊亂是導(dǎo)致肺炎支原體肺炎的重要機(jī)制，而T 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)以Th1/Th2 失衡為主要表現(xiàn)［8］。有研究認(rèn)為，肺炎支原體肺炎感染可誘發(fā)體液免疫及細(xì)胞免疫功能紊亂，Th2 細(xì)胞介導(dǎo)免疫處于優(yōu)勢(shì)，Th1 介導(dǎo)的免疫受到抑制［9］。本研究中觀察組CD4+、CD8+水平均明顯低于肺炎組、對(duì)照組，說明難治性肺炎支原體肺炎患兒免疫功能紊亂更加明顯。

肺炎支原體感染期間可產(chǎn)生炎性因子，炎性因子過度表達(dá)是肺炎支原體肺炎主要特征。IL-8是多源性炎性細(xì)胞因子，可趨化T 淋巴細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞，促使炎癥細(xì)胞聚集并釋放大量活性物質(zhì)，IL-8 過度表達(dá)可造成組織損傷，對(duì)反映肺炎支原體肺炎病情程度及轉(zhuǎn)歸情況有重要價(jià)值［10-11］。IL-10 是抑制性細(xì)胞因子，可抑制單核巨噬細(xì)胞功能起到抑制炎性反應(yīng)的作用，其分泌不足會(huì)造成炎癥過程中不可逆組織損傷，在機(jī)體感染或其他誘因刺激下呈高水平表達(dá)［12］。RANTES 可趨化嗜酸性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)、激活T 淋巴細(xì)胞增殖，介導(dǎo)白細(xì)胞轉(zhuǎn)移，促使白細(xì)胞附著于內(nèi)皮細(xì)胞［13］。RANTES 可影響Th1、Th2 細(xì)胞而參與免疫反應(yīng)，在Th1/Th2免疫失衡過程中有重要作用。本研究中觀察組IL-8、IL-10、RANTES 水平明顯高于肺炎組、對(duì)照組，說明炎性反應(yīng)及免疫失衡在難治性肺炎支原體肺炎發(fā)病過程中有明顯作用。進(jìn)一步分析顯示，CD4+、CD8+水平與難治性肺炎支原體肺炎患兒病情嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)，IL-8、IL-10、RANTES 水平與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，且均為難治性肺炎支原體肺炎患兒病情嚴(yán)重程度的影響因素，說明通過檢測(cè)CD4+、CD8+、IL-8、IL-10、RANTES 水平可分析肺炎支原體肺炎患兒病情程度，對(duì)臨床干預(yù)提供詳細(xì)信息。

綜上所述，難治性肺炎支原體肺炎患兒CD4+、CD8+水平呈低表達(dá)，IL-8、IL-10、RANTES 水平呈高表達(dá)，且CD4+、CD8+、IL-8、IL-10、RANTES 水平可用于分析難治性肺炎支原體患兒病情程度，有助于為臨床制定干預(yù)措施提供客觀依據(jù)，具有重要臨床價(jià)值。

利益沖突：作者已申明文章無相關(guān)利益沖突。