彭燕娟

（西藏自治區(qū)獸醫(yī)生物藥品制造廠 850003）

羊敗血性鏈球菌病是由C群馬鏈球菌獸疫亞種引起的一種急性熱性傳染病，尤其對(duì)山羊和綿羊具有高致病性，多伴隨全身性出血性敗血癥和纖維素性胸膜炎。C群馬鏈球菌獸疫亞種為革蘭氏陽(yáng)性菌，形態(tài)為不規(guī)則圓形，菌體呈長(zhǎng)鏈狀排列，至多有170個(gè)單球相連，不形成芽孢，一般無(wú)鞭毛。部分菌株在病料中或含血清的培養(yǎng)基中能形成莢膜。羊敗血性鏈球菌病常呈地方流行性或散發(fā)，在新發(fā)病區(qū)多呈流行性發(fā)生，而老疫區(qū)則往往呈散發(fā)性流行或地方性流行，且具有明顯的季節(jié)性，多發(fā)生于冬春季節(jié)。缺草、寒冷、體弱、擁擠等易誘發(fā)此病，發(fā)病率達(dá)15%～24%，如不及時(shí)治療，死亡率可達(dá)90%左右。臨床上將羊敗血性鏈球菌病分為最急性型、急性型、亞急性型和慢性型等。最急性型病羊的最初癥狀不明顯，多于24 h內(nèi)死亡。急性型和亞急性型臨床癥狀相似，急性型病程2～3d，亞急性型癥狀相對(duì)較輕，病程1～2周，大部分病羊在發(fā)病初期體溫升高，食欲不振或完全廢絕，呼吸困難，有黏性鼻涕流出，糞便中帶有黏液或血等，亞急性型病羊在發(fā)病后期還多表現(xiàn)臥地不起，全身寒戰(zhàn)，伴隨尖叫或磨牙等特征。慢性型病羊癥狀不穩(wěn)定，體質(zhì)消瘦，常伴有咳嗽和關(guān)節(jié)炎，病程可持續(xù)1個(gè)月。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品

羊敗血性鏈球菌病滅活疫苗和羊快疫、猝疽、羔羊痢疾、腸毒血癥三聯(lián)四防滅活疫苗購(gòu)自西藏自治區(qū)獸醫(yī)生物藥品制造廠，羊敗血性鏈球菌病活疫苗購(gòu)自青海生物藥品廠。注射用青霉素鈉、注射用磺胺嘧啶鈉購(gòu)自合肥中龍神力動(dòng)物藥業(yè)有限公司。本研究所用培養(yǎng)基有本廠小培養(yǎng)組自制。

1.1.2 試驗(yàn)用動(dòng)物

本試驗(yàn)所用家兔、小鼠、易感羊均由本廠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組提供。

1.2 方法

1.2.1 病原學(xué)檢查

1.2.1.1 涂片鏡檢

取病料涂片、染色、鏡檢，見(jiàn)到呈單個(gè)、成對(duì)或短鏈有莢膜的革蘭氏陽(yáng)性鏈球菌。

1.2.1.2 細(xì)菌分離與鑒定

將適量病料分別接種至馬丁氏肉湯、鮮血瓊脂平板、葡萄糖朧氨酸鮮血瓊脂斜面、石蕊牛奶、1%美蘭牛奶、含50%膽汁的培養(yǎng)基、朧氨酸肉湯（pH9.6）、含6.5%氯化鈉的朧氨酸肉湯、馬尿酸鈉培養(yǎng)基、纖維素固體培養(yǎng)基等培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間，觀察其生長(zhǎng)狀況及現(xiàn)象。隨后利用含疊氮化鈉的培養(yǎng)基選擇分離鏈球菌，并通過(guò)乙酰甲基甲醇（VP）試驗(yàn)、甲基紅（MR）試驗(yàn)、發(fā)酵（葡萄糖、乳糖、麥芽糖、半乳糖、山梨醇、甘露醇、木糖、鼠李糖）試驗(yàn)等進(jìn)一步鑒定分離得到的鏈球菌的生理生化特征。

1.2.1.3 動(dòng)物回歸試檢

向家兔皮下注射或靜脈注射1 mL鏈球菌菌液，向小鼠腹腔注射0.5 mL鏈球菌菌液，觀察家兔和小鼠5d內(nèi)的死亡情況。取死后家兔和小鼠的肝、腹水涂片鏡檢。

1.2.2 疫苗免疫和藥物治療試驗(yàn)

1.2.2.1 疫苗免疫試驗(yàn)

將40只易感羊隨機(jī)分為4組，每組10只。第1組皮下注射羊敗血性鏈球菌病滅活疫苗（5mL/只），第2組尾根皮下注射羊敗血性鏈球菌病活疫苗（1頭份/只），第3組皮下注射羊快疫、猝疽、羔羊痢疾、腸毒血癥三聯(lián)四防滅活疫苗（5mL/只），第4組為對(duì)照組（不做處理）。免疫21d后向每只羊靜脈注射1 MLD的羊鏈球菌強(qiáng)毒菌液，連續(xù)觀察21d。

1.2.2.2 藥物治療試驗(yàn)

將40只易感羊隨機(jī)分為4組，每組10只。向每只羊靜脈注射1 MLD羊鏈球菌強(qiáng)毒菌液。當(dāng)易感羊出現(xiàn)羊敗血性鏈球菌病臨床癥狀時(shí)進(jìn)行治療。第1組每天肌肉注射2次注射用青霉素鈉（160萬(wàn)U），第2組每天肌肉注射2次注射用磺胺嘧啶鈉（10mL），第3組每天肌肉注射2次注射用青霉素鈉（80萬(wàn)U）和注射用磺胺嘧啶鈉（5mL），第4組為對(duì)照組（不做處理），連續(xù)觀察至臨床癥狀消失。

2 結(jié)果

2.1 病原學(xué)檢查結(jié)果

病料于馬丁氏肉湯中培養(yǎng)24 h后，菌液混濁，管底有沉淀；在鮮血瓊脂平板上形成R溶血，菌落細(xì)小無(wú)色，呈露珠狀；葡萄糖朧氨酸鮮血瓊脂斜面上的菌落呈半透明淡灰色，且濕潤(rùn)，閃光，極粘稠。我們進(jìn)一步將通過(guò)疊氮化鈉選擇分離得到的鏈球菌做鑒定，得到以下結(jié)果：該鏈球菌可使石蕊牛奶變紅但不凝固，不能使1%美蘭牛奶褪色，在含50%膽汁的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，耐受膽鹽，在朧氨酸肉湯（pH9.6）和含6.5%氯化鈉的朧氨酸肉湯中均不生長(zhǎng)，不能水解馬尿酸鈉、纖維素和葡萄糖，可產(chǎn)生硫化氫，不還原硝酸鹽，不液化明膠，不產(chǎn)生靛基質(zhì)，能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、半乳糖、山梨醇、甘露醇、產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵木糖、鼠李糖等。

動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)表明該鏈球菌具有強(qiáng)毒性。攻毒后，家兔多于24～48 h內(nèi)死亡，小鼠多于第4d死亡。取肝、腹水涂片鏡檢，均可觀察到3～5個(gè)相連的革蘭氏陽(yáng)性鏈球菌菌落。

2.2 疫苗免疫和藥物治療試驗(yàn)

2.2.1 病理診斷

羊發(fā)病后的特征性病理變化主要包括各個(gè)臟器泛發(fā)性出血，淋巴結(jié)腫大出血，鼻、咽喉和氣管黏膜出血；肺水腫或氣腫，出血，出現(xiàn)肝變區(qū)；胸腔、腹腔及心包腔出現(xiàn)大量積液；心冠溝及心內(nèi)外包膜有小點(diǎn)狀出血；肝腫大呈泥土色，邊緣鈍厚，包膜下有出血點(diǎn)；膽囊腫大2～4倍，膽汁外滲；腎臟質(zhì)脆、變軟，出血梗塞，包膜不易剝離；各個(gè)器官漿膜面附有粘稠的纖維素性滲出物。

2.2.2 疫苗免疫試驗(yàn)結(jié)果

免疫羊敗血性鏈球菌病滅活疫苗和羊敗血性鏈球菌病活疫苗兩組均未出現(xiàn)免疫羊發(fā)病和死亡的情況，第3組免疫羊快疫、猝疽、羔羊痢疾、腸毒血癥三聯(lián)四防滅活疫苗的10只羊均發(fā)病出現(xiàn)鏈球菌病臨床癥狀，觀察至21d僅4只羊死亡，第4組未免疫任何疫苗，10只羊均發(fā)病出現(xiàn)鏈球菌病臨床癥狀，觀察至21d有7只羊死亡（表1）。我們推測(cè)第3組免疫效果較差是由于鏈球菌感染病程長(zhǎng)導(dǎo)致羊抵抗力下降，從而引起猝疽、羔羊痢疾或腸毒血癥等梭菌病發(fā)作，免疫梭菌病疫苗后有效控制了梭菌病引起的癥狀，第4組則是由于感染梭菌病引發(fā)了易感羊的大量死亡。

表1 羊敗血性鏈球菌病疫苗免疫效果

2.2.3 藥物治療試驗(yàn)結(jié)果

從表2可知，對(duì)照組臨床癥狀持續(xù)存在，最后全部死亡，在易感羊剛發(fā)生羊敗血性鏈球菌病臨床癥狀時(shí)，使用注射用青霉素鈉（160萬(wàn)U）或注射磺胺嘧啶鈉（10 mL）進(jìn)行藥物治療可有效控制臨床癥狀，當(dāng)聯(lián)合使用注射用青霉素鈉（80萬(wàn)U）和注射用磺胺嘧啶鈉（5 mL）進(jìn)行治療時(shí)，仍有2只羊出現(xiàn)臨床癥狀，我們推測(cè)這是兩種藥物相互拮抗或產(chǎn)生副作用的結(jié)果。

表2 羊敗血性鏈球菌病藥物治療效果

3 小結(jié)與討論

3.1 疫苗免疫

近幾年，在西藏自治區(qū)羊鏈球菌病多發(fā)的拉薩、山南、日喀則三市進(jìn)行疫苗免疫。結(jié)果表明羊敗血性鏈球菌病活疫苗免疫效果與羊敗血性鏈球菌病滅活疫苗相近，均優(yōu)于羊快疫、猝疽、羔羊痢疾、腸毒血癥三聯(lián)四防滅活疫苗，且羊敗血性鏈球菌病活疫苗無(wú)佐劑和甲醛引起的副作用。因此，建議優(yōu)先采用羊敗血性鏈球菌病活疫苗進(jìn)行免疫。

3.2 藥物治療

在未進(jìn)行疫苗免疫的地方，若發(fā)生羊敗血性鏈球菌病，為避免羊只發(fā)病死亡，建議采用每天肌肉注射2次注射用磺胺嘧啶鈉（10 mL）進(jìn)行治療，該治療方法療程較短，效果較好。

3.3 預(yù)防措施

3.3.1加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高羊群的抗病能力。在換季時(shí)，給羊群飼喂添加有維生素、礦物質(zhì)及預(yù)防藥物的飼料，并在春冬寒冷的季節(jié)，做好防寒保暖的工作。

3.3.2做好羊舍消毒工作，不混群放牧，減少病菌傳染。常用的消毒藥有2%來(lái)蘇兒、0.5%漂白粉和2%石炭酸等，也可采用日光照射，以上消毒方式均可在2h內(nèi)殺死羊鏈球菌。

3.3.3嚴(yán)格執(zhí)行隔離檢疫。在羊敗血性鏈球菌病非流行地區(qū)購(gòu)買(mǎi)養(yǎng)殖，且新購(gòu)入的羊必須隔離20d后才能移入消毒后的羊圈。

3.3.4消滅體外寄生蟲(chóng)。羊虱蠅是羊的常見(jiàn)寄生蟲(chóng)，由于羊鏈球菌能存活在羊虱蠅體內(nèi)，因此建議每年使用阿維菌素或伊維菌素兩次以消滅羊的體外寄生蟲(chóng)。