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        新疆某屠宰場豬源沙門氏菌的分離鑒定

        2021-11-06 06:54:54廖先喆齊亞銀
        今日畜牧獸醫(yī) 2021年10期
        關鍵詞:胴體屠宰場沙門氏菌

        廖先喆,齊亞銀

        (新疆維吾爾自治區(qū)石河子大學動物科技學院832000)

        沙門氏菌屬腸桿菌科,是人畜共患病的一種,能引發(fā)多種動物疾病。感染人后粘附在腸道[1],引起腹瀉、腹部絞痛、發(fā)熱等癥狀[2]。沙門氏菌不僅會對人類身體健康造成危害,嚴重影響食品安全[3],還會影響社會的穩(wěn)定及發(fā)展[4]。

        1 材料與方法

        1.1 試驗材料

        1.1.1 試驗樣品

        試驗樣品采自新疆某地區(qū)生豬屠宰場當日屠宰的60只宰后豬胴體拭子。

        1.1.2 試劑

        SS瓊脂培養(yǎng)基、BHI培養(yǎng)基購自青島高科園海博生物技術有限公司;2×TaqPlusMastermixⅡ購自南京諾唯贊生物科技股份有限公司;2KDNAMaker購自北京全式金生物技術有限公司;SuperRde核酸染液購自合肥蘭杰柯科技有限公司。

        1.2 試驗方法

        1.2.1 樣品采集

        采樣前將60份3mL的BPW配入5mL的離心管中。用無菌棉拭子分別涂抹屠宰場中宰后生豬的肚皮、頸頜、大腿內側,將棉拭子放入BPW的離心管中,蓋緊瓶蓋做好標記,放入樣品袋中。

        1.2.2 細菌分離純化

        將樣品渦旋均質,移取0.5mL,轉種于4.5mL的BHI液體培養(yǎng)基內,震蕩培養(yǎng)箱37℃、180r/min培養(yǎng)18~24h。劃線接種于SS瓊脂培養(yǎng)基上,放入恒溫培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)18~24h。挑選黑色菌落再轉種于BHI液體培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)18~24h。

        1.2.3 形態(tài)學觀察

        使用接種環(huán)將純化后菌液涂抹在載玻片上,利用革蘭染色法處理后在顯微鏡下觀察。

        1.2.4 PCR鑒定

        對提取的細菌DNA進行PCR擴增,反應體系為25μL:2×TaqPlusMastermixⅡ12.5μL,雙蒸水9.7uL,上下游引物各0.4μL,細菌DNA模板2μL。引物序列為F:5′-CTGGCGGTGG GTTTTGTTGTCTTCTCTATT-3′,R:5′-AGTTTCTCCCCCTCTTC ATGCGTTACCC-3′[5];反應程序為:94℃預變性5min;94℃變性40S,63℃退火30S,72℃延伸1min10S,共30個循環(huán);72℃終延伸10min;4℃終止。擴增特異性片段大小約為1050bp。

        2 結果與分析

        2.1 平板培養(yǎng)結果

        在SS瓊脂培養(yǎng)基上,沙門氏菌菌落呈半透明且中間帶有黑點(圖1)。

        圖1 沙門氏菌培養(yǎng)基培養(yǎng)結果

        2.2 形態(tài)學觀察結果

        100倍油鏡下觀察經革蘭氏染色的沙門氏菌涂片,可見粉色的革蘭氏陰性短桿菌(圖2)。

        圖2 沙門氏菌形態(tài)學觀察結果

        2.3 PCR鑒定結果

        利用沙門氏菌特異性引物對分離菌進行PCR擴增,結果顯示,擴增片段長度為1050bp(圖3),本次試驗共分離出5株豬源沙門氏菌,檢出率為8.33%。

        3 討論

        沙門氏菌是引起細菌性食物中毒的主要致病菌之一,消費者誤食被沙門氏菌污染的食物后可能引起食物中毒。沙門氏菌感染人后的主要癥狀是發(fā)熱、腹瀉,還有可能引發(fā)菌血癥。在全世界,沙門氏菌每年感染超過1億人,其中有15萬人因為感染了沙門氏菌而死亡[6]。試驗中豬胴體上沙門氏菌的分離率為8.33%,本次試驗樣品采集的豬胴體拭子是在生豬經屠宰、沖洗、高溫后進行的,處于屠宰后期,即將進入消費市場。在豬胴體上檢出沙門氏菌,無疑將會對消費者的健康造成巨大威脅。屠宰場應當加大檢疫力度以保障消費者的健康。

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