廖先喆，齊亞銀

（新疆維吾爾自治區(qū)石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院832000）

沙門(mén)氏菌屬腸桿菌科，是人畜共患病的一種，能引發(fā)多種動(dòng)物疾病。感染人后粘附在腸道[1]，引起腹瀉、腹部絞痛、發(fā)熱等癥狀[2]。沙門(mén)氏菌不僅會(huì)對(duì)人類身體健康造成危害，嚴(yán)重影響食品安全[3]，還會(huì)影響社會(huì)的穩(wěn)定及發(fā)展[4]。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)樣品

試驗(yàn)樣品采自新疆某地區(qū)生豬屠宰場(chǎng)當(dāng)日屠宰的60只宰后豬胴體拭子。

1.1.2 試劑

SS瓊脂培養(yǎng)基、BHI培養(yǎng)基購(gòu)自青島高科園海博生物技術(shù)有限公司；2×TaqPlusMastermixⅡ購(gòu)自南京諾唯贊生物科技股份有限公司；2KDNAMaker購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)有限公司；SuperRde核酸染液購(gòu)自合肥蘭杰柯科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品采集

采樣前將60份3mL的BPW配入5mL的離心管中。用無(wú)菌棉拭子分別涂抹屠宰場(chǎng)中宰后生豬的肚皮、頸頜、大腿內(nèi)側(cè)，將棉拭子放入BPW的離心管中，蓋緊瓶蓋做好標(biāo)記，放入樣品袋中。

1.2.2 細(xì)菌分離純化

將樣品渦旋均質(zhì)，移取0.5mL，轉(zhuǎn)種于4.5mL的BHI液體培養(yǎng)基內(nèi)，震蕩培養(yǎng)箱37℃、180r/min培養(yǎng)18～24h。劃線接種于SS瓊脂培養(yǎng)基上，放入恒溫培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)18～24h。挑選黑色菌落再轉(zhuǎn)種于BHI液體培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)18～24h。

1.2.3 形態(tài)學(xué)觀察

使用接種環(huán)將純化后菌液涂抹在載玻片上，利用革蘭染色法處理后在顯微鏡下觀察。

1.2.4 PCR鑒定

對(duì)提取的細(xì)菌DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系為25μL：2×TaqPlusMastermixⅡ12.5μL,雙蒸水9.7uL，上下游引物各0.4μL,細(xì)菌DNA模板2μL。引物序列為F：5′-CTGGCGGTGG GTTTTGTTGTCTTCTCTATT-3′，R：5′-AGTTTCTCCCCCTCTTC ATGCGTTACCC-3′[5]；反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min；94℃變性40S，63℃退火30S，72℃延伸1min10S，共30個(gè)循環(huán)；72℃終延伸10min；4℃終止。擴(kuò)增特異性片段大小約為1050bp。

2 結(jié)果與分析

2.1 平板培養(yǎng)結(jié)果

在SS瓊脂培養(yǎng)基上，沙門(mén)氏菌菌落呈半透明且中間帶有黑點(diǎn)（圖1）。

圖1 沙門(mén)氏菌培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)果

2.2 形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果

100倍油鏡下觀察經(jīng)革蘭氏染色的沙門(mén)氏菌涂片，可見(jiàn)粉色的革蘭氏陰性短桿菌（圖2）。

圖2 沙門(mén)氏菌形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果

2.3 PCR鑒定結(jié)果

利用沙門(mén)氏菌特異性引物對(duì)分離菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果顯示，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為1050bp（圖3），本次試驗(yàn)共分離出5株豬源沙門(mén)氏菌，檢出率為8.33%。

3 討論

沙門(mén)氏菌是引起細(xì)菌性食物中毒的主要致病菌之一，消費(fèi)者誤食被沙門(mén)氏菌污染的食物后可能引起食物中毒。沙門(mén)氏菌感染人后的主要癥狀是發(fā)熱、腹瀉，還有可能引發(fā)菌血癥。在全世界，沙門(mén)氏菌每年感染超過(guò)1億人，其中有15萬(wàn)人因?yàn)楦腥玖松抽T(mén)氏菌而死亡[6]。試驗(yàn)中豬胴體上沙門(mén)氏菌的分離率為8.33%，本次試驗(yàn)樣品采集的豬胴體拭子是在生豬經(jīng)屠宰、沖洗、高溫后進(jìn)行的，處于屠宰后期，即將進(jìn)入消費(fèi)市場(chǎng)。在豬胴體上檢出沙門(mén)氏菌，無(wú)疑將會(huì)對(duì)消費(fèi)者的健康造成巨大威脅。屠宰場(chǎng)應(yīng)當(dāng)加大檢疫力度以保障消費(fèi)者的健康。