柏 潔, 鄭扣龍

(南通大學(xué)第二附屬醫(yī)院 心血管內(nèi)科, 江蘇 南通, 226001)

心血管疾病嚴(yán)重威脅著人類健康。急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)因其起病急，病情進(jìn)展迅速，死亡率高，已成為成年人猝死的主要原因之一[1]。《中國心血管病報(bào)告2018》[2]指出: STEMI正處于逐漸年輕化的態(tài)勢，嚴(yán)重威脅中國人民健康，成為重大的公共衛(wèi)生問題。信號素4D(Sema4D)又稱CD100，是一種150 kDa的I型整膜糖蛋白，由大多數(shù)造血細(xì)胞表達(dá)，包括B和T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、血小板等。Sema4D的表達(dá)通常在細(xì)胞激活后增加，變成具有生物學(xué)活性的 120-kDa 片段，并與其受體 plexin-B1結(jié)合，通過細(xì)胞表面 Met 結(jié)構(gòu)的酪氨酸激酶使下游的相關(guān)信號分子發(fā)生磷酸化，參與免疫反應(yīng)、血栓形成、動(dòng)脈粥樣硬化性疾病等[3-5]。目前國內(nèi)外主要研究[6]報(bào)道了血清可溶性信號素4D(sSema4D)水平與慢性心衰的關(guān)系，而關(guān)于sSema4D水平與急性心肌梗死冠狀動(dòng)脈血栓負(fù)荷的研究較少。本研究探討sSema4D對STEMI血栓負(fù)荷的預(yù)測價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2020年4月—2021年3月收治于南通市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科住院部的STEMI確診患者46例(STEMI組)，其中男32例，女14例; 不穩(wěn)定型心絞痛(UA)患者40例(UA組)，男29例，女11例; 同時(shí)選取同時(shí)間段冠狀動(dòng)脈造影(CAG)陰性住院患者40例為對照組，其中男25例，女15例。后根據(jù)Yip標(biāo)準(zhǔn)[7]劃分血栓負(fù)荷，將STEMI患者分為高血栓負(fù)荷組20例和非高血栓負(fù)荷組26例。CAG及手術(shù)報(bào)告在2名經(jīng)驗(yàn)豐富的冠狀動(dòng)脈介入醫(yī)師協(xié)助下對患者進(jìn)行操作。所有患者均經(jīng)心電圖、超聲心動(dòng)圖、心肌酶譜檢查符合臨床確診標(biāo)準(zhǔn)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(2019KN09), 所有患者均簽署知情同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn): 18～75歲符合STEMI診斷標(biāo)準(zhǔn)患者(患者符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)等制定的2019年STEMI診斷和治療指南[8])、UA患者和CAG陰性患者(CAG的陰性標(biāo)準(zhǔn)為冠狀動(dòng)脈主干或其主要分支管腔直徑狹窄50%)。所有患者在術(shù)前均服用阿司匹林300 mg和替格瑞洛180 mg, 以排除抗血小板藥物對實(shí)驗(yàn)的影響。排除標(biāo)準(zhǔn): 合并嚴(yán)重的心臟性疾病者; 合并嚴(yán)重的先天性心臟病者; 存在結(jié)締組織病、創(chuàng)傷、急慢性感染者; 肝功能不全(定義為谷丙轉(zhuǎn)氨酶或總膽紅素大于正常上限的3倍)者; 腎功能不全(定義為血肌酐大于正常上限的1.5倍)者; 具有高危出血風(fēng)險(xiǎn)的患者; 活動(dòng)性消化性潰瘍及皮膚潰瘍者; 對阿斯匹林、替格瑞洛過敏者; 心源性休克者; 懷孕及哺乳期婦女; 合并惡性腫瘤者; CAG顯示左主干病變者。

1.2 方法

入組患者均于入院后次日清晨抽取肘靜脈血 2 mL, 置入干燥的肝素鋰采血管中，分別送本院實(shí)驗(yàn)室、生化室進(jìn)行檢測。所有患者在術(shù)前抽取血液3 mL, 置入干燥的肝素鋰采血管中，使用離心機(jī)于3 000轉(zhuǎn)/min離心15 min, 用移液器仔細(xì)收集上清液于EP管中，將EP管進(jìn)行編號和分組，保存于-80℃冰箱中以備檢測時(shí)使用。STEMI組患者與對照組各隨機(jī)選取6例，于術(shù)后連續(xù)3天抽取肘靜脈血 2 mL以提取實(shí)驗(yàn)指標(biāo)。

統(tǒng)一收集血清標(biāo)本后，采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測血清 sSema4D水平。試劑盒購于上海酶研生物科技有限公司，生產(chǎn)貨號各自是 EK-H11846, 嚴(yán)格按照說明書步驟進(jìn)行操作。統(tǒng)一收集血液標(biāo)本后檢測超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)水平，同時(shí)用Spearman相關(guān)分析比較STEMI組中sSema4D與hs-CRP的相關(guān)性。

其他常規(guī)化驗(yàn)檢查均送至本院生化室，相關(guān)分析由全自動(dòng)血液分析儀(希森美康, XN-9100)、全自動(dòng)生化分析儀(南京三和儀器有限公司, LAboSPECT008AS)、酶標(biāo)儀(Therm, Multiskan FC)完成。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 基本特征

3組年齡、性別、吸煙史、糖尿病、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、腎功能(肌酐)、肝功能(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)等臨床指標(biāo)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 見表1。

表1 3組基本資料比較 M

2.2 sSema4D在STEMI中的作用

sSema4D在STEMI組患者的外周血中相較于UA組和對照組均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); UA組外周血中的sSema4D與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 見圖1。STEMI高血栓負(fù)荷組(n=20)sSema4D表達(dá)量高于STEMI非高血栓負(fù)荷組(n=26), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見圖2。

與STEMI組比較, ?P<0.05。圖1 STEMI組、UA組和對照組血清sSema4D水平比較

與非高血栓負(fù)荷組比較, ?P<0.05。圖2 STEMI高血栓負(fù)荷組與非高血栓負(fù)荷組sSema4D水平比較

2.3 sSema4D表達(dá)水平隨時(shí)間衰減

檢測STEMI組和對照組患者第1、2、3天的外周血中sSema4D表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)STEMI組外周血中sSema4D表達(dá)水平衰減幅度大于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖3。

2.4 STEMI患者血清中sSema4D與hs-CRP水平相關(guān)性

檢測STEMI患者h(yuǎn)s-CRP水平(見表1)，并用Spearman相關(guān)分析比較STEMI組患者血清中sSema4D和hs-CRP的相關(guān)性。根據(jù)hs-CRP水平分1.0∶1～10 mmoL/L組、2.0∶10～20 mmoL/L組、3.0∶20～30 mmoL/L組、4.0∶30 mmoL/L組，分析發(fā)現(xiàn)sSema4D與hs-CRP呈正相關(guān)(P<0.05), 相關(guān)系數(shù)為0.384, 見圖4。

3 討 論

根據(jù)傳統(tǒng)觀念, Sema4D作用是通過非免疫組織的(神經(jīng)元、內(nèi)皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞)中的叢蛋白和免疫系統(tǒng)中的CD72介導(dǎo)的。Sema4D和CD72表達(dá)于血小板上[9]。在血小板活化過程中, Sema4D和CD72表達(dá)增加，隨后Sema4D胞外區(qū)逐漸脫落。當(dāng)血栓開始形成時(shí)，血小板相關(guān)的Sema4D可以與附近血小板上的受體結(jié)合，促進(jìn)血栓形成[10], 提示Sema4D在血小板活化中起重要作用。既往研究[11-13]報(bào)道，在心血管疾病中, sSema4D參與了動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的形成，與心房顫動(dòng)存在獨(dú)立相關(guān)性。

本研究采用ELISA試劑盒檢測3組患者血清中sSema4D水平，得出STEMI組的sSema4D水平顯著高于UA組和對照組，而UA組與對照組之間無明顯差異，且這種差異性在STEMI組中的高血栓負(fù)荷和非高血栓負(fù)荷患者中更能體現(xiàn)。前面提到sSema4D在血小板活化中起重要作用，參與血栓的形成，與本研究結(jié)果相一致。

本研究顯示, STEMI組表達(dá)sSema4D水平的衰減幅度明顯大于對照組，說明一方面是由于患者自身代謝因素的影響，另一方面在干預(yù)下，患者的炎癥反應(yīng)正在好轉(zhuǎn)，筆者推測sSema4D與患者體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)存在某種相關(guān)性[14]。由于本研究只測定了術(shù)后連續(xù)3天的水平，還需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)探究其存在關(guān)聯(lián)的確切機(jī)制。

本研究分析了STEMI組sSema4D和hs-CRP水平之間的相關(guān)性，得出兩者之間呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.384(P<0.05)。hs-CRP通過介導(dǎo)炎癥反應(yīng)在STEMI患者中發(fā)揮作用，這也更加證實(shí)了此前研究結(jié)論[5]。本研究推測sSema4D是否也可以同hs-CRP一樣成為新型的心肌炎癥標(biāo)志物。sSema4D不僅能調(diào)節(jié)炎癥免疫反應(yīng)，還參與許多生理和病理過程，包括血管生成[15]、成骨[16]和腫瘤的轉(zhuǎn)化[17], 使其成為許多疾病治療的干預(yù)分子，如抑制Sema4D/Plexin-B1信號通路可以從減少新生血管生成，減輕糖尿病視網(wǎng)膜病變血管功能障礙[18]。筆者推測減少Sema4D與血小板表面Plexin-B1結(jié)合可以減少血栓形成，并可以作為急性心肌梗死免疫治療的潛在靶點(diǎn)。一直以來，心肌標(biāo)志物對冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的診斷、治療以及預(yù)后的判定，降低疾病死亡率起到了關(guān)鍵作用[19]。肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌鈣蛋白(CTn)是目前心肌損傷的主要標(biāo)志物，上一代心肌梗死的“金標(biāo)準(zhǔn)”CK-MB, 仍存在特異性不足的缺點(diǎn)，而且并不能診斷到微小的心肌梗死[20]。當(dāng)血管狹窄導(dǎo)致心肌損傷, CK、CK-MB和CTn會(huì)出現(xiàn)陽性反應(yīng)，在一定程度上反映了心肌損傷程度，但對冠狀動(dòng)脈整體情況的評估不一定靈敏，而且在早起預(yù)防疾病發(fā)生之前，作用甚微。

研究結(jié)果表明, sSema4D在STEMI組患者的外周血中相較于UA組和對照組均顯著升高; STEMI高血栓負(fù)荷組sSema4D表達(dá)量顯著高于STEMI非高血栓負(fù)荷組，初步反映了sSema4D對急性心肌梗死血栓負(fù)荷的預(yù)測價(jià)值。但本研究存在一些不足，由于納入標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格，可入選患者數(shù)量有限，結(jié)果代表性有限。本研究只探究STEMI組和對照組sSema4D在不同時(shí)間段的水平，未將UA組作為實(shí)驗(yàn)組，且時(shí)間段設(shè)置過短，只檢測了患者3天內(nèi)的sSema4D表達(dá)水平，需要進(jìn)一步完善。

綜上所述，STEMI患者的外周血中sSema4D表達(dá)水平高于UA組和對照組患者，并且在STEMI高血栓負(fù)荷組中呈高表達(dá)趨勢, sSema4D可能對STEMI高血栓負(fù)荷具有預(yù)測價(jià)值，有望作為STEMI的治療靶點(diǎn)，還可能成為預(yù)防冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的新的炎癥指標(biāo)。