鄭雙雙，劉貞，鐘振華，夏紅英，程奇珍

江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330029

吉西他濱是嘧啶類抗代謝藥物，是細(xì)胞周期特異性抗代謝藥物［1］，與其他藥物聯(lián)合應(yīng)用治療非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）、上皮性卵巢癌宮頸癌、晚期胰腺癌、乳腺癌等［2-5］。注射用吉西他濱為注射用粉針劑，在分裝、貯存過(guò)程中，藥用鹵化丁基膠塞用于制劑密封，直接長(zhǎng)時(shí)間與藥品接觸［6］，而在膠塞生產(chǎn)過(guò)程中，需要加入多種添加劑，以此來(lái)延長(zhǎng)藥用膠塞的使用時(shí)間，其中還需要進(jìn)行硫化處理，在該過(guò)程中不可避免的殘留一些未降解的有害物質(zhì)如游離硫［7］，根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《化學(xué)藥品注射劑與塑料包裝材料相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》［8］，指出包裝系統(tǒng)應(yīng)與藥品具有良好的相容性，引入的浸出物產(chǎn)生的風(fēng)險(xiǎn)應(yīng)在控制安全范圍內(nèi)，本研究參考文獻(xiàn)［9-11］，采用高效液相色譜法測(cè)定藥品中游離硫的含量，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證該方法方便、準(zhǔn)確，可用于注射用鹽酸吉西他濱中游離硫的測(cè)定。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Waters Alliance 2695 型高效液相色譜儀，METTLER TOLEDO MS105 型電子天平，METTLER TOLEDO ML204 型電子天平，Hpp749 恒溫恒濕試驗(yàn)箱、SYNERGY UV 超純水機(jī)。

1.2 試劑、試藥

硫（批號(hào)：20190610，CAS 號(hào)：7704-34-9，生產(chǎn)廠家：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，含量≥99.999%）。無(wú)水乙醇［批號(hào)：Lot.No.20161012，CAS 號(hào)：64-17-5，生產(chǎn)廠家：永華化學(xué)科技（江蘇）有限公司，色譜純］。甲醇（批號(hào)：Lot#WXBC8664V，CAS 號(hào)：67-56-1，生產(chǎn)廠家：SIGMA，色譜純）。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-3 C18（250 mm×4.6 mm×5 μm）；柱溫：35 ℃；流動(dòng)相：甲醇-水（95∶5）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：264 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品貯備液 精密稱取硫25.58 mg，置100 mL 容量瓶中，加無(wú)水乙醇適量超聲使硫溶解，用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，即得濃度為0.255 8 mg/mL對(duì)照品貯備液。

2.2.2 供試品溶液 取樣品2 瓶（規(guī)格0.2 g）、1 瓶（規(guī)格1.0 g）分別加水3 mL（規(guī)格0.2 g）、15 mL（規(guī)格1.0 g）使內(nèi)容物溶解并轉(zhuǎn)移至同一10 mL（規(guī)格0.2 g）、25 mL（規(guī)格1.0 g）量瓶中，用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 空白溶液 量取3 mL 水置10 mL 量瓶中，用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，即得。

2.3 線性關(guān)系試驗(yàn)

精密量取上述“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液1 mL 分別置10、20、50 mL 量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為⑦25.580 0 μg/mL、⑥12.790 0 μg/mL、⑤5.116 0 μg/mL 的對(duì)照品溶液，精密量取對(duì)照品溶液⑦1 mL 置10 mL 量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為④2.558 0 μg/mL 的對(duì)照品溶液，精密量取對(duì)照品溶液⑥1 mL分別置10、20 mL 量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為③1.279 0 μg/mL、②0.639 5 μg/mL 的對(duì)照品溶液，精密量取對(duì)照品溶液④1 mL置10 mL 量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為①0.255 8 μg/mL 的對(duì)照品溶液。精密量取上述系列線性關(guān)系對(duì)照品溶液各20 μL，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。以硫濃度（x，μg/ mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果詳見(jiàn)圖1。

圖1 硫線性關(guān)系圖

2.4 精密度試驗(yàn)

精密量取“2.3”項(xiàng)下對(duì)照品溶液⑤5.116 0 μg/mL 20 μL，連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄測(cè)定結(jié)果。結(jié)果：硫的峰面積的RSD 為1.0%（n=6），表明儀器精密度較好。

2.5 回收率試驗(yàn)

取陰性樣品（A 公司生產(chǎn)，批號(hào)：190119）兩瓶，分別加水3 mL 溶解后，轉(zhuǎn)移至10 mL 量瓶中，精密量取“2.2.1”對(duì)照品貯備液0.1、0.2、0.3 mL 置上述量瓶中，用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，按線性項(xiàng)下的回歸方程計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取注射用吉西他濱供試品1 批（A 公司生產(chǎn)，批號(hào)：190119）2 瓶，分別加水3 mL 溶解后，轉(zhuǎn)移至10 mL 量瓶中，精密量取“2.2.1”對(duì)照品貯備液0.2 mL 置上述量瓶中，用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，于0、2、4、6、8、12、16、20、24 h 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果：硫的峰面積24 h 內(nèi)基本不變，RSD%為1.2%，滿足測(cè)定要求。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取注射用吉西他濱供試品1 批（A 公司生產(chǎn)，批號(hào)：190119）2 瓶，分別加水3 mL 溶解后，轉(zhuǎn)移至10 mL 量瓶中，精密量取對(duì)照品貯備液Sa（精密稱取硫12.99 mg，置50 mL 容量瓶中，加無(wú)水乙醇適量超聲使硫溶解，用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，即得）0.2 mL 置上述量瓶中，用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò)；按上述方法平行制備6 份供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算硫的含量，結(jié)果測(cè)得硫平均含量為52.59 μg，RSD 為1.0%，表明重復(fù)性良好。

2.8 定量限與檢測(cè)限

分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液Sa 適量，用無(wú)水乙醇稀釋數(shù)倍，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，按信噪比為10∶1、3∶1 計(jì)算定量限、檢測(cè)限。結(jié)果定量限為0.519 6 μg/瓶、檢測(cè)限為0.259 8 μg/瓶。

3 樣品測(cè)定結(jié)果與討論

采用新建方法對(duì)8 家企業(yè)58 批次市售注射用吉西他濱進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果均未檢出硫；采用新建方法對(duì)12 批次注射用吉西他濱0 月、3 月加速正置、倒置進(jìn)行硫的測(cè)定，結(jié)果均未檢出硫。由于0 月、3 月加速樣品中均未檢出硫，考慮硫從藥品包材遷移的可能性不大，藥品被污染的可能性較小，本品使用時(shí)硫所引發(fā)安全風(fēng)險(xiǎn)較低。

本方法采用高效液相色譜法測(cè)定游離硫的含量，該方法快速簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適用于注射用鹽酸吉西他濱中硫的含量分析。