陳少鋒，余興華,林嘉民，花中卉

廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院，福建 廈門 361004

婦康寧顆粒劑原劑型為湯劑,是原廈門市湖濱南路廈門中山醫(yī)院的臨床常用經(jīng)驗方,屬于院內(nèi)制劑，由黃芩、黃芪、旱蓮草、三七、五靈脂等多味中藥材組成，具有補(bǔ)中益氣、清熱燥濕、止血涼血、活血化瘀、調(diào)經(jīng)止痛之功效，多用于經(jīng)期異常子宮出血、痛經(jīng)血崩的治療，能夠有效改善經(jīng)期腹痛，減少經(jīng)期出血量，縮短經(jīng)期出血時間，是一種療效確切、安全可靠的純中藥制劑［1］。經(jīng)研發(fā)醇提加水提的綜合提取方法制?？蓪珓└脑鞛轭w粒劑［2-4］，以更進(jìn)一步方便患者臨床使用。為保證婦康寧顆粒產(chǎn)品質(zhì)量的可控性［5］，本研究根據(jù)文獻(xiàn)資料報道［6-10］，建立婦康寧顆粒劑中所含的有效成分黃芩苷的HPLC 測定方法，并證實該方法具有操作簡便、快捷、精密度和準(zhǔn)確度高的優(yōu)點，能夠較好地控制婦康寧顆粒劑的質(zhì)量，也為婦康寧顆粒劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的優(yōu)化提供科學(xué)的依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

依利特p230 高效液相色譜儀；uv230+紫外-可見檢測器；EC2000 色譜工作站；P230/P230p 高壓恒流泵；KQ3200DB 型數(shù)控超聲清洗器；BS2105S 型電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）

1.2 試藥

甲醇為色譜純；雙重蒸餾水；黃芩苷對照品（批號為10715-201117，供含量測定用，由中國藥品生物制品檢定所提供）。其他試劑均為分析純。婦康寧顆粒劑供試品3 批，均由廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院藥學(xué)部制劑室制備。

2 含量測定方法

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸（50∶50）為流動相，檢測波長為275 nm；上述的色譜條件能夠使黃芩苷色譜峰與其他組分色譜峰基本達(dá)到基線分離（分離度>1.5）,理論塔板數(shù)按參照物黃芩苷峰計算不小于3 000。

2.2 對照品溶液的制備

取黃芩苷對照品約10 mg，精密稱定，并將其置于100 mL 量瓶中，加入甲醇溶解稀釋至刻度，再使精密吸取1 mL 溶液至10 mL 量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為10 μg/mL 黃芩苷的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本供試品約1 g，精密稱定，將其置于100 mL具塞錐形瓶中，使用移液管精密量取40 mL 的70%乙醇，加入具塞錐形瓶中，稱定重量，置于微波超聲儀中超聲處理30 min，放置30 min～60 min 后待其冷卻至室溫后再稱定重量，再加入70%乙醇補(bǔ)足損失的重量，充分搖勻后再使用微孔濾膜過濾，棄除初濾液，轉(zhuǎn)用EP 管收集續(xù)濾液，精密吸取續(xù)濾液0.5 mL，將其置于25 mL 容量瓶，并使用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.4 測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

3 方法學(xué)考察

3.1 溶液的制備

3.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品適量，置于10 mL 量瓶中，加入甲醇溶解搖勻后，再加入甲醇至刻度，即得濃度為0.263 mg/mL的對照品溶液。

3.1.2 供試品溶液的制備 取本品粉末約1 g，精密稱定，按“2.3 供試品溶液的制備”方法制備，即得。對照品溶液和供試品溶液的HPLC 色譜圖分別見圖1 和圖2。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液HPLC色譜圖

圖2 供試品溶液HPLC色譜圖

3.2 線性關(guān)系考察

精密吸取對照品溶液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL至5 mL 棕色量瓶中，分別使用膠頭滴管加入甲醇稀釋至刻度。分別吸取20 μL，注入液相色譜儀進(jìn)行分析，以峰面積對進(jìn)樣量（μg）作線性回歸分析，試驗結(jié)果表明，黃芩苷在5.26 μg/mL～26.30 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為Y=60.075X+80.091，r=0.999 8，數(shù)據(jù)見表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的數(shù)據(jù)表

3.3 精密度試驗

取同一供試品（批號20171108）溶液，連續(xù)進(jìn)樣5 次，測定供試品濃度與黃芩苷峰面積積分值。實驗結(jié)果表明該方法精密度良好，RSD=0.395（%）。

3.4 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品（批號20171108）溶液，避光放置，分別于0、2、4、6、8 h 進(jìn)樣測定。實驗結(jié)果表明，供試品溶液在8 h 內(nèi)穩(wěn)定，RSD=0.68%。

3.5 重復(fù)性試驗

取同一批號供試品5 份（批號20171108）每份取樣量約1 g，精密稱定，分別測定每份供試品的含量［9］，結(jié)果見表2。實驗結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性良好，RSD=1.36%。

表2 重復(fù)性試驗結(jié)果

3.6 加樣回收試驗

取婦康寧顆粒劑5 份，每份重量約0.5 g，精密稱定，分別取適量黃芩苷對照品約13 mg，精密稱定，加入具塞錐形瓶中，分別測定每份供試品的含量，計算回收率，見表3。結(jié)果平均回收率為99.07%，RSD 為 0.91%。

表3 加樣回收試驗結(jié)果

3.7 三批樣品含量測定結(jié)果

取 三 批 樣 品（批 號：20171108、20171118、20171122）分別同法測定，各批號樣品的測定結(jié)果見表4。實驗結(jié)果表明三批樣品中黃芩苷的含量均符合質(zhì)量要求。每克含黃芩以黃芩苷（C21H18O11）計算均≥ 25 mg。三批樣品黃芩苷（C21H18O11）平均含量為27.36 mg/g。

表4 樣品中黃芩苷的含量測定結(jié)果

4 結(jié)論

本課題采用高效液相色譜法對婦康寧顆粒劑中君藥黃芩的有效成分黃芩苷的含量進(jìn)行了定量研究，并對其方法學(xué)進(jìn)行考察，結(jié)果表明該方法可以作為婦康寧顆粒劑中黃芩苷的含量測定方法。該研究為完善和提高婦康寧顆粒劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量可控性提供了科學(xué)的依據(jù)。