王 海，張世龍，付娟芝

慶陽(yáng)市第二人民醫(yī)院，甘肅 慶陽(yáng)745000

中醫(yī)認(rèn)為糖尿病（diabetes mellitus，DM）屬于“消渴”“肥胖”范疇［1-3］，其發(fā)病的主要因素為稟賦異常、五臟柔弱、素體陰虛、過(guò)食肥甘、情志失調(diào)，稟賦異常為內(nèi)因，飲食情志為誘因，內(nèi)外因相結(jié)合而致［4-8］?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，環(huán)境因素、肥胖、飲食結(jié)構(gòu)不合理、熱量攝入過(guò)多、體力活動(dòng)減少、吸煙等是其主要誘發(fā)因素［9］。養(yǎng)陰止渴丸由黃芪、太子參等17味中藥組成，具有清熱生津，益氣養(yǎng)陰的功效。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用動(dòng)物模型對(duì)其調(diào)節(jié)血糖作用進(jìn)行研究［10-13］，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠SPF級(jí)72只，體質(zhì)量180～220 g，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（甘）2011-0004。昆明種小鼠SPF級(jí)60只，體質(zhì)量（20±2）g，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（甘）2011-0004。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，飼喂標(biāo)準(zhǔn)飼料，溫度20±2℃，相對(duì)濕度60%～70%，大鼠適應(yīng)7天后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，小鼠適應(yīng)3天后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

1.2 藥物及儀器養(yǎng)陰止渴丸（以下簡(jiǎn)稱ZKW）（慶陽(yáng)市第二人民醫(yī)院制劑室制備，批號(hào)：160401，規(guī)格：60 g/瓶）；格列本脲片［上海醫(yī)藥（集團(tuán)）有限公司信誼制藥總廠，批號(hào)：160310，規(guī)格：2.5 mg/片］；四氧嘧啶（ALX，Sigma，批號(hào)：GA16908，規(guī)格：5 g/瓶），二甲雙胍腸溶片（山東力諾科峰制藥有限公司，批號(hào)：SC00825，規(guī)格：0.25 g/片）。HX502T型電子天平（浙江天東衡器廠）；三諾安穩(wěn)血糖測(cè)試儀（長(zhǎng)沙三諾生物傳感技術(shù)股份有限公司，YZB/湘0074-2008，B1116KD1522，試紙條批號(hào)：2135/7AL-2135/7AP）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 試藥制備1）大鼠受試藥物的制備：取養(yǎng)陰止渴丸40 g，研磨成粉末，加150 mL蒸餾水浸泡過(guò)夜，超聲提取30 min，過(guò)濾，取上清液，蒸餾水定容至100 mL，作為高劑量受試品；取高劑量受試品減半稀釋，為中劑量受試品；取中劑量受試品減半稀釋，為低劑量受試品。得高、中、低劑量分別為4.0、2.0、1.0 g/kg的受試藥物（相當(dāng)于臨床成人日用量的14、7、3.5倍）。2）小鼠受試藥物的制備：取養(yǎng)陰止渴丸28.6 g，制備過(guò)程同大鼠受試藥物，得高、中、低劑量濃度分別為5.71、2.86、1.43 g/kg的受試藥物（相當(dāng)于臨床成人日用量的20、10、5倍）。

1.3.2 大鼠實(shí)驗(yàn)

1.3.2.1 分組及造模 取Wistar大鼠，雌雄兼用，禁食不禁水12 h，測(cè)定空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）為4.0～6.0 mmol/L的大鼠72只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組（鹽酸二甲雙胍片0.2 g/kg，相當(dāng)于臨床成人日用量的7倍），ZKW高、中、低劑量組（4.0、2.0、1.0 g/kg，相當(dāng)于臨床成人日用量的14、7、3.5倍），每組12只。按10 mL/kg體質(zhì)量容積灌胃給藥，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組灌服等量的生理鹽水，每日1次，連續(xù)30天。給藥第10天各組動(dòng)物禁食不禁水12 h，測(cè)定各組大鼠FBG后，除空白對(duì)照組腹腔注射等容量生理鹽水外，其余各組大鼠一次性腹腔注射四氧嘧啶200 mg/kg［14-15］（溶于0.9%的生理鹽水），4.5～5.0 h后各組大鼠灌胃50%葡萄糖每只2.0 mL；72 h后大鼠FBG值≥11.1 mmol/L為糖尿病大鼠造模成功［9-14］。

1.3.2.2 觀察指標(biāo)1）于給藥第0、10、20、30天稱各組大鼠體質(zhì)量、24 h進(jìn)食量飲水量及FBG；2）于大鼠股動(dòng)脈取血，室溫放置6 h，離心半徑20 cm，4000 r/min離心15 min，分離血清，按試劑盒說(shuō)明書(shū)采用放射免疫分析法（RIA）測(cè)定各大鼠血清胰島素，計(jì)算胰島素敏感性指數(shù)（insulin sensitive index，ISI）［15-17］。

1.3.3 小鼠實(shí)驗(yàn)

1.3.3.1 分組及給藥 取小鼠，雌雄兼用，禁食不禁水12 h后測(cè)定FBG為4.0～6.0 mmol/L的小鼠60只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組（格列本脲片用量0.01 g/kg，相當(dāng)于臨床成人日用量的10倍），ZKW高、中、低劑量組分別為5.71、2.86、1.43 g/kg，每組12只?？瞻讓?duì)照組灌服等量的生理鹽水，其余各組按20 mL/kg體質(zhì)量容積給予對(duì)應(yīng)藥物灌胃，每日1次，連續(xù)7天。

1.3.3.2 觀察指標(biāo) 第7天各組動(dòng)物禁食不禁水12 h，進(jìn)行糖耐量試驗(yàn)（灌服葡萄糖水溶液1.5 g/kg），測(cè)定小鼠血糖值［18］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料采用±s表示，多組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），兩組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，模型對(duì)照組死亡3只，陽(yáng)性對(duì)照組死亡1只，ZKW高劑量組死亡2只，ZKW中劑量組死亡2只，ZKW低劑量組死亡3只。

2.1.1 大鼠體質(zhì)量 給藥第10天，各組大鼠體質(zhì)量正常增加，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；給藥第20天，模型對(duì)照組、ZKW各劑量組大鼠體質(zhì)量明顯減少，與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；給藥第30天，陽(yáng)性對(duì)照組和ZKW高、中、低劑量組大鼠體質(zhì)量降低，與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；陽(yáng)性對(duì)照組、ZKW高劑量組與模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)體質(zhì)量比較（±s）

表1 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)體質(zhì)量比較（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，**表示P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，#表示P＜0.05；-表示無(wú)數(shù)值

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2.1.2 大鼠飲食量 給藥第20天，模型對(duì)照組，ZKW中、低劑量組與空白對(duì)照組比較，日進(jìn)食量和日飲水量均明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；陽(yáng)性對(duì)照組、ZKW高劑量組大鼠日進(jìn)食量和飲水量相對(duì)減少，與模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。給藥第30天，模型對(duì)照組和ZKW各劑量組大鼠進(jìn)食量均增大，與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；ZKW高劑量組大鼠的飲水量較少，與模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2—3。

表2 各組大鼠日進(jìn)食量比較（±s）

表2 各組大鼠日進(jìn)食量比較（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，**表示P＜0.01，*表示P＜0.05；與模型對(duì)照組比較，##表示P＜0.01，＃表示P＜0.05；-表示無(wú)數(shù)值

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2.1.3 大鼠FBG給藥第20天，模型對(duì)照組、ZKW各劑量組大鼠血糖明顯升高，與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；ZKW各劑量組與模型對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。給藥第30天，陽(yáng)性對(duì)照組、ZKW各劑量組大鼠血糖明顯降低，與模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)FBG比較（±s）

表4 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)FBG比較（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，**表示P＜0.01，*表示P＜0.05；與模型對(duì)照組比較，##表示P＜0.01，＃表示P＜0.05；-表示無(wú)數(shù)值

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2.1.4 大鼠血清胰島素及ISI給藥第30天各組大鼠血清胰島素水平明顯降低，模型對(duì)照組大鼠ISI明顯升高，與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；陽(yáng)性對(duì)照組ZKW高、中劑量組大鼠ISI明顯降低，與模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表5。

表5 各組大鼠血清胰島素和ISI比較（±s）

表5 各組大鼠血清胰島素和ISI比較（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，**表示P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，#表示P＜0.05；-表示無(wú)數(shù)值

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2.2 小鼠糖耐量實(shí)驗(yàn)給藥第7天，ZKW各劑量組小鼠空腹血糖均降低的趨勢(shì)，呈量-效關(guān)系，但與空白對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。給藥第7天進(jìn)行糖耐量試驗(yàn)，在30、60、120 min各組血糖均明顯升高；ZKW高、中劑量組小鼠在各時(shí)間點(diǎn)血糖有降低的趨勢(shì)，與空白對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表6。

表3 各組大鼠日飲水量比較（±s）

表3 各組大鼠日飲水量比較（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，*表示P＜0.05；與模型對(duì)照組比較，#表示P＜0.05；-表示無(wú)數(shù)值

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表6 各組小鼠不同時(shí)間點(diǎn)血糖比較（±s）

表6 各組小鼠不同時(shí)間點(diǎn)血糖比較（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，*表示P＜0.05

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3 討論

中醫(yī)認(rèn)為消渴病的病因病機(jī)主要有以下4個(gè)方面：一是稟賦不足；二是飲食失節(jié)；三是情志失調(diào)；四是勞欲過(guò)度。養(yǎng)陰止渴丸是慶陽(yáng)市第二人民醫(yī)院內(nèi)分泌科張世龍主任醫(yī)師臨床經(jīng)驗(yàn)方。方中黃芪、生地黃、太子參益氣養(yǎng)陰，生津止渴；葛根、桑白皮、夏枯草、地骨皮清泄三焦之火，養(yǎng)陰潤(rùn)燥；苦瓜、黃連、知母、玄參清熱瀉火，生津潤(rùn)燥；丹參、荔枝核、鬼箭羽疏肝理氣，活血化瘀；蒼術(shù)健脾化濕、和胃；仙鶴草解毒補(bǔ)虛。諸藥合用使陰液得復(fù)、脈絡(luò)通利、燥熱自消。

本研究結(jié)果表明，養(yǎng)陰止渴丸對(duì)DM模型大鼠、小鼠有一定的治療作用，能降低模型大鼠空腹血糖、改善ISI，但對(duì)正常血糖無(wú)明顯影響，且增加正常小鼠的糖耐量。