譚婧姿 向鐘文 黃思思 張海濤

南華大學(xué)藥學(xué)院，湖南 衡陽 421000

日常生活中，難免會(huì)出現(xiàn)如燒傷、燙傷等皮膚損傷，此時(shí)傷口會(huì)進(jìn)行一系列應(yīng)激反應(yīng)以達(dá)到自我修復(fù)。正常傷口愈合需通過急性炎癥、增殖和瘢痕塑型過程，但常因外部因素（如感染）使急性炎癥轉(zhuǎn)變?yōu)槁匝装Y導(dǎo)致愈合速度減慢。創(chuàng)傷敷料護(hù)創(chuàng)促愈，同時(shí)小巧便攜。傳統(tǒng)敷料藥用成分簡陋，有的無藥用成分。市面上大多敷料藥效部分的殺菌促愈性能均未有針對性，如3D透明敷貼僅形成一層隔膜，用于防止感染。

透明質(zhì)酸（HA）帶負(fù)電荷，具有特殊的保水性，被稱為理想的天然保濕因子。不同分子量的HA具有不同特點(diǎn)：高分子量可在皮膚表面營造利于愈合的濕性環(huán)境，低分子量可進(jìn)入真皮層參與細(xì)胞分裂和內(nèi)源性物質(zhì)調(diào)節(jié)。Shetty[1]等還證實(shí)HA可與某些疼痛介質(zhì)結(jié)合而緩解疼痛。HA的外源性補(bǔ)充可刺激其內(nèi)源性分泌[2]，故本研究選用HA。

殼寡糖是自然界中唯一的正電寡糖，能吸引負(fù)電荷的紅細(xì)胞、炎癥因子、胞壁酸等[3]，表現(xiàn)出止血、消炎、抑菌的重要特性。

基于此，本文利用正負(fù)電相吸，將HA、殼寡糖層層自組裝起來，結(jié)合苯扎氯銨抑菌液設(shè)計(jì)了一種新型抑菌促愈敷料包，以期解決大多傳統(tǒng)敷料藥效、性能不佳等問題，為敷料的臨床應(yīng)用和研究提供了新思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 核心抑菌成分

0.01%苯扎氯銨溶液，3 mL/瓶。

1.1.2 敷料促愈層

以天蠶絲作為基質(zhì)，通過四步浸料烘干法依次浸取促愈液。促愈液為8000和4.4w分子量、0.1%的HA溶液[4]和3000分子量、0.3%的殼寡糖溶液[5]。

1.1.3 敷料繃帶層

外層為無紡布，內(nèi)層為聚四氟乙烯微孔膜。后者粒徑滿足傷口防水透氣的需要且理化性質(zhì)高度穩(wěn)定。

1.2 制作

如圖1a，敷料包內(nèi)含有：①苯扎氯銨抑菌液，②碘伏棉簽，③親膚敷料，④繃帶層采用PTFE微孔膜，⑤促愈層。將天蠶絲作為基質(zhì)，通過靜電層層自組裝原理（圖1b）浸漬吸附HA、殼寡糖。

圖1 新型抑菌促愈敷料包設(shè)計(jì)

1.3 方法

1.3.1 深I(lǐng)I度燙傷小鼠模型

參照劉利兵[6]等工作，取35層紗布剪成棉塊浸漬于開水中，用鑷子快速夾出置于小鼠脫毛背部，分別于4 s、8 s、12 s時(shí)間點(diǎn)移除。取燙傷區(qū)皮膚行HE染色，以表皮層完全受損、累及真皮層且伴炎癥細(xì)胞浸潤定義為深I(lǐng)I度燙傷。

1.3.2 分組及治療過程

①碘伏組：僅碘伏消毒。

②陽性對照組：碘伏消毒，市售云南白藥創(chuàng)可貼包扎。

③繃帶組：碘伏消毒，本敷料繃帶層包扎。

④敷料組：碘伏消毒，本親膚敷料包扎。

⑤新型敷料包組：碘伏消毒，滴加苯扎氯銨抑菌液，使用本親膚敷料包扎。

各組分別于燙傷后1 d、2 d、6 d、11 d、14 d進(jìn)行治療，觀察創(chuàng)面愈合情況并計(jì)算每次創(chuàng)面愈合率。14 d后處死小鼠，取全層皮膚進(jìn)行HE染色鏡下觀察。

1.4 評價(jià)指標(biāo)

1.4.1 創(chuàng)面情況

創(chuàng)傷粘連程度、溫度濕度、顏色質(zhì)地、瘢痕狀態(tài)，是否有膿腫痂皮。

1.4.2 創(chuàng)面愈合率

保鮮膜覆蓋創(chuàng)面描繪邊緣至網(wǎng)格坐標(biāo)紙，滿半格記1格，不滿半格記0.5格，計(jì)數(shù)作為面積指標(biāo)。按公式取平均數(shù)作為創(chuàng)面愈合率，創(chuàng)面愈合率（%）=（造模第一天面積指標(biāo)-測量當(dāng)日面積指標(biāo)）/造模第一天面積指標(biāo)×100%。痊愈：愈合率＞90%；顯效：愈合率75%；有效：愈合率50%；好轉(zhuǎn)：愈合率20%；無效：治愈率＜20%。

1.4.3 病理組織切片觀察

行HE染色，在顯微鏡下瀏覽切片，于不同倍數(shù)下詳細(xì)觀察組織情況，觀察基本病理改變?nèi)绯溲[、變性壞死、肉芽增生、炎性變化等。

2 結(jié) 果

2.1 燙傷模型的建立

通過優(yōu)化方案，確定燙傷時(shí)間為8 s，構(gòu)建了穩(wěn)定可復(fù)制的小鼠深I(lǐng)I度燙傷模型。如圖2，表皮細(xì)胞核碎裂（黃色箭頭），真皮層膠原呈嗜酸性均質(zhì)狀（紅色箭頭），周圍少量炎性細(xì)胞散在分布（黑色箭頭）。燙傷累及真皮深層伴炎癥細(xì)胞浸潤。

圖2 8s燙傷顯微鏡觀察（20x）

2.2 創(chuàng)面情況及愈合率

2.2.1創(chuàng)面情況

燙傷后各組創(chuàng)面明顯隆起、紅白相間、發(fā)熱微濕。7 d時(shí)，敷料組和新型敷料包組創(chuàng)面先于其他各組顯暗紅色、輕度起痂。14 d后，新型敷料包組創(chuàng)面毛發(fā)旺盛，痂皮脫落區(qū)皮膚緊實(shí)，有輕微色素沉積，愈合良好，其他各組均有不同程度的微腫和結(jié)痂。

2.2.2 創(chuàng)面愈合率

如圖3、表1可見，6 ～11 d為修復(fù)黃金期；③繃帶組初期愈合速度與①碘伏組相似，后期因能有效阻絕外來刺激使其愈合效果優(yōu)于自然愈合；初期②云南白藥創(chuàng)口貼組促愈效果明顯優(yōu)于④敷料組，最終兩組近乎一致；苯扎氯銨起到抑菌作用，聯(lián)合使用后，⑤新型敷料包組表現(xiàn)出較高的愈合速度，最終愈合率最高。

圖3 各處理組不同時(shí)間促愈率（深Ⅱ度燙傷小鼠）

表1 各處理組對深I(lǐng)I度燙傷小鼠皮膚愈合率的影響

2.2.3 病理組織切片觀察

14 d處死小鼠，取全層皮膚中截面進(jìn)行HE染色病理切片觀察，如圖4所示，5組均有不同程度的愈合、毛囊等附屬結(jié)構(gòu)的恢復(fù)及表皮層的色素沉積。其中④、⑤組膠原纖維增厚增生至與正常皮膚相似；①、②、③組皮膚愈合未達(dá)全層，有少量血管周圍浸潤和真皮層水腫。

圖4 14d后各組小鼠皮膚愈合切片觀察（10x）

3 討 論

現(xiàn)有敷料大多僅停留在護(hù)創(chuàng)不受外來刺激帶來二次感染的層面上，并未針對敷料的抑菌能力、促愈療效等方面做出研究改進(jìn)。本文采用自制新型抑菌促愈敷料包研究其對小鼠深I(lǐng)I度燙傷創(chuàng)面的促愈作用，結(jié)果顯示，該敷料包可有效防止二次感染，顯著促進(jìn)皮膚組織修復(fù)與再生。結(jié)合使用苯扎氯銨抑菌液后，促愈效果優(yōu)于云南白藥創(chuàng)可貼，可大幅提高創(chuàng)傷修復(fù)的愈合質(zhì)量。本敷料包的使用為敷料的研制發(fā)展提供了新的思路，在提高病患生活質(zhì)量上有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。

帶正電荷的殼寡糖發(fā)揮的凝血消炎、止痛抑菌作用和帶負(fù)電荷的透明質(zhì)酸發(fā)揮的保濕止痛、抑瘢促愈作用，使它們成為應(yīng)用于皮膚修復(fù)的最佳材料。加之獨(dú)特的電荷性使其能被自組裝起來，不僅在空間上結(jié)合緊密，其所構(gòu)成的組裝體也具有釋藥穩(wěn)定特性。余俊等[7]研究殼聚糖和HA納米聚電解質(zhì)復(fù)合物表明了二者的結(jié)合是一種靜電穩(wěn)定模式。天蠶絲是最細(xì)、最輕柔的天然纖維素，素有“人體第二肌膚”的美稱，在本敷料包中是首選的載藥基質(zhì)。本研究將天蠶絲、HA、殼寡糖這些天然可降解的促愈材料結(jié)合起來，充分發(fā)揮藥物的優(yōu)勢，并結(jié)合苯扎氯銨抑菌液，形成新型抑菌促愈敷料包。20世紀(jì)中葉濕性傷口愈合理論的提出，發(fā)現(xiàn)濕潤環(huán)境更能促進(jìn)傷口愈合，而使用滴加苯扎氯銨抑菌液不僅能抑菌，還能創(chuàng)造濕性環(huán)境，提供有利的促愈條件。市售苯扎氯銨溶液明確表明0.1%以下的苯扎氯銨對皮膚無刺激性，并對不同適用方法和濃度做出規(guī)定，創(chuàng)面消毒用0.01%的溶液。

本研究已初步探索了新型敷料包的促愈能力，但傷口修復(fù)是一個(gè)精密且復(fù)雜的過程，且隨生活質(zhì)量的提升，對醫(yī)療護(hù)理的要求定會(huì)不斷提高，對于敷料促愈的要求重心也會(huì)漸漸從消炎止血向無痕美觀轉(zhuǎn)移，因此，可考慮添加其他的輔料或附加劑進(jìn)一步改善藥物的促愈能力，如添加生長因子抑制或淡化瘢痕，是將來需要探討研究的問題。