孫菲菲，張振凌,3*，梁 迪，余海英，鄭旭亞，黃亞森

1河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院；2河南省中藥特色炮制技術(shù)工程研究中心；3呼吸疾病中醫(yī)藥防治省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心，鄭州 450008

麝香(Musk)為麝科動(dòng)物林麝(MoschusberezovskiiFlerov)，馬麝(MoschussifanicusPrzewalski)和原麝(MoschusmoschiferusLinnaeus)成熟雄體香囊中的干燥分泌物，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，有2 000多年的藥用歷史，其性溫，味辛，歸心、脾經(jīng)，具有開竅醒神、活血通經(jīng)、消腫止痛等功效[1]。麝為國家一級(jí)保護(hù)野生動(dòng)物，為保護(hù)麝資源和滿足醫(yī)藥行業(yè)的需要，臨床多使用人工麝香，但人工麝香功效遠(yuǎn)不如天然麝香，本草記載靈貓香與麝鼠香具有與麝香類似的功效[2]。麝鼠香為嚙齒目倉鼠科麝鼠屬動(dòng)物麝鼠(OndatrazibethicaLinnaeus)成齡雄性香腺囊內(nèi)的乳白色分泌物，具有消炎止痛、活血散瘀、芳香開竅的作用，用于癰瘡腫毒、中風(fēng)昏迷、跌打損傷等癥[3]。研究發(fā)現(xiàn)麝鼠香中含有與麝香相同的麝香酮、環(huán)十五烷酮以及其他相類似的大環(huán)酮類等成分，也發(fā)現(xiàn)麝鼠香具有類似麝香的氣味[2]?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)表明麝鼠香的藥理作用與天然麝香相近，能起到抗炎鎮(zhèn)痛、減慢心率、降低血壓、增強(qiáng)心臟功能和降低血液粘稠度、改善心肌缺血和保護(hù)心臟缺血性損傷等作用[4-7]，并且可以促進(jìn)動(dòng)物生長，在抗衰老和治療冠心病方面具有廣闊前景[8]。在天然麝香資源匱乏的情況下，國內(nèi)外都在尋找新的資源，麝鼠香有可能成為麝香入藥的新資源。本研究采用GC-MS對(duì)麝鼠香和麝香進(jìn)行化學(xué)成分分析，比較兩者成分差異，并測(cè)定麝鼠香中環(huán)十五烷酮含量，為麝鼠香入藥及其資源的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器

TRACE1300-TSQ8000EVO氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(賽默飛公司)；BT25S型十萬分之一電子天平(賽多利斯科技儀器有限公司)；KQ-500DV型超聲清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；MX-S型漩渦振蕩儀(北京大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；TG16-WS高速臺(tái)式離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司)。

1.2 材料

環(huán)十五烷酮對(duì)照品(批號(hào)：M29J11K117112，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%)、麝香酮對(duì)照品(批號(hào)：B18N10D103404，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%)，上海源葉生物科技有限公司；乙酸乙酯為色譜純。麝鼠香(江蘇宿遷市麝香鼠養(yǎng)殖專業(yè)合作社提供)，經(jīng)中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所陳玉山教授鑒定為倉鼠科動(dòng)物麝鼠成齡雄性香腺囊內(nèi)的乳白色分泌物；麝香(河南保和堂麝鼠香有限公司提供)，經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)張振凌教授鑒定為鹿科動(dòng)物林麝，馬麝或原麝成熟雄體香囊中的干燥分泌物。

2 方法與結(jié)果

2.1 GC-MS分析條件

2.1.1 色譜條件

采用TG-5MS石英毛細(xì)管柱(0.25 mm × 30 m，0.25 μm)，載氣：高純度氦氣(99.999%)，體積流量1.0 mL/min，進(jìn)樣量1.0 μL，分流比50∶1，進(jìn)樣口溫度250 ℃，程序升溫，80 ℃保持2 min，以速率10 ℃/min升至 260 ℃，保持30 min[9]。

2.1.2 質(zhì)譜條件

EI電離源，電子能量70 eV，離子源溫度230 ℃，傳輸線溫度280 ℃，溶劑延遲時(shí)間3 min，檢測(cè)模式為全掃描模式，質(zhì)量掃描范圍m/z：30～500 amu。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取環(huán)十五烷酮對(duì)照品1.24 mg置于5 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，搖勻，即得環(huán)十五烷對(duì)照品母液，備用。

精密稱取麝香酮對(duì)照品2.24 mg置于5 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，搖勻，即得麝香酮對(duì)照品溶液，備用。

2.3 供試品溶液的制備

分別取麝鼠香、麝香(置于研缽中研成粉末，過五號(hào)篩)50 mg，精密稱定，置于10 mL具塞玻璃試管中，加入乙酸乙酯5 mL，密塞，用漩渦振蕩儀混合1 min后，轉(zhuǎn)移至離心管中，用離心機(jī)以8 000 rpm離心2 min，取上清液，過0.22 μm有機(jī)相微孔濾膜，備用。

2.4 結(jié)果與分析

按上述實(shí)驗(yàn)條件對(duì)麝鼠香、麝香進(jìn)行GC-MS分析，得到麝鼠香和麝香的總離子流圖(見圖1)。各色譜峰使用NIST14標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫進(jìn)行檢索比對(duì)，選擇匹配度高于80%的色譜峰，并參照相關(guān)文獻(xiàn)[4,9-15]進(jìn)一步確認(rèn)其化學(xué)成分，按色譜峰面積歸一化法計(jì)算各成分的相對(duì)百分含量，結(jié)果見表1。通過質(zhì)譜分析和標(biāo)準(zhǔn)譜圖檢索，麝鼠香共檢出58個(gè)峰，初步鑒定出化合物23個(gè)，占總峰面積的90.38%；麝香共檢出43個(gè)峰，鑒定出化合物19個(gè)，占總峰面積的91.21%。結(jié)果分析顯示，麝鼠香中酯類化合物含量最高，達(dá)36.57%，其次為大環(huán)酮類成分，占32.59%，脂肪酸類、甾體類、醇類化合物分別為13.34%、6.56%、1.32%；麝香中大環(huán)酮類化合物含量最高，達(dá)44.5%，其次為甾體類成分占25.93%，脂肪酸類成分占20.35%，還含有少量的醛類為0.43%；麝鼠香、麝香中共有化合物有6種，分別為十四烷酸、環(huán)十五烷酮、十六烷酸、油酸、硬脂酸和膽固醇。

表1 麝鼠香、麝香化學(xué)成分保留時(shí)間及相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)Table 1 The retention time and relative mass fraction of the chemical constituents of muskrat and musk

續(xù)表1(Continued Tab.1)

圖1 環(huán)十五烷酮對(duì)照品(A)、麝鼠香(B)、麝香(C)、麝香酮對(duì)照品(D)總離子流圖Fig.1 Total ion chromatograms of cyclopentadecanone standard (A),muskrat (B),musk (C) and muscone standard (D)

2.5 麝鼠香中環(huán)十五烷酮的含量測(cè)定

2.5.1 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2”項(xiàng)下環(huán)十五烷酮對(duì)照品母液適量，至5 mL容量瓶中并定容，配制成質(zhì)量濃度分別為1.24、2.48、12.4、24.8、62.124 μg/mL的環(huán)十五烷酮對(duì)照品溶液，過0.22 μm的微孔濾膜，按照“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，記錄色譜峰面積，以對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)(X)，對(duì)照品峰面積值為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，結(jié)果Y=3.96E+09X+3.82E+06，R2=0.999 8，線性范圍為1.24～124.0 ng。

2.5.2 精密度試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下環(huán)十五烷酮對(duì)照品溶液，按照“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算環(huán)十五烷酮峰面積的RSD為1.17%，表明該方法精密度良好。

2.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，在0、2、4、6、8、10、24 h進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算環(huán)十五烷酮峰面積RSD值為0.79%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一麝鼠香樣品6份，按照“2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按照“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算環(huán)十五烷酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD值為1.39%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.5 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已測(cè)定含量的麝鼠香樣品6份，每份25 mg，加入0.3 mL濃度為0.248 mg/mL的環(huán)十五烷酮對(duì)照品溶液，加入乙酸乙酯4.7 mL，混勻，按“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果環(huán)十五烷酮的平均回收率為99.3%，RSD值為2.49%，表明加樣回收率良好，方法可行(見表2)。

表2 麝鼠香中環(huán)十五烷酮加樣回收率試驗(yàn)Table 2 Recovery test of cyclopentadecanone in muskrat

2.5.6 不同批次麝鼠香中環(huán)十五烷酮的含量測(cè)定

取不同批次麝鼠香50 mg，按照“2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按照“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算樣品中環(huán)十五烷酮的含量，結(jié)果見表3。

表3 不同批次麝鼠香中環(huán)十五烷酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)Table 3 The contents of cyclopentadecanone in different batches of muskrat

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，麝鼠香和麝香中共有成分有十四烷酸，環(huán)十五烷酮，十六烷酸，油酸，硬脂酸和膽固醇，兩者所含成分種類相似，都含有酯類，脂肪酸類，大環(huán)烷酮類及甾體類化合物。文獻(xiàn)研究顯示麝鼠香中含有環(huán)十五烷酮和麝香酮，所以認(rèn)為其可成為麝香入藥的新資源，但本實(shí)驗(yàn)通過采用麝香酮對(duì)照品進(jìn)行了比對(duì)，結(jié)果表明麝鼠香中并不含有麝香酮。并且，以往文獻(xiàn)研究結(jié)果顯示對(duì)于其是否含有麝香酮結(jié)果并不一致，Liu[4]、Zhao[11]、Peng[16]等在麝鼠香中檢測(cè)到了麝香酮，Hu[17]、Mou[18]、Zhao[19]、Li[9]等沒有檢測(cè)到，可能是以前儀器分辨率較低，在當(dāng)時(shí)又缺少對(duì)照品的情況下，兩種物質(zhì)出峰時(shí)間相近，所以誤把環(huán)十五烷酮認(rèn)為是麝香酮了。雖然麝鼠香中不含有麝香酮，但含有多種大環(huán)酮類化合物，其中環(huán)十五環(huán)酮和環(huán)十七烷酮含量較高，分別占9.89%和19.1%，Hu等[17]通過麝香、靈貓香、麝鼠香中大環(huán)酮類成分的分離與鑒定研究證明大環(huán)酮類化合物是麝香類藥物發(fā)揮藥效的主要成分，是具有芳香開竅的主要物質(zhì)，所以麝鼠香中環(huán)十五烷酮和環(huán)十七烷酮是其主要香氣成分及發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)。研究表明，麝香酮具有抗癡呆、抗腦缺血、抗炎、抗心肌缺血、抗腫瘤、抗早孕和抗著床等多種作用，同時(shí)其還可以興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)[20]，但關(guān)于環(huán)十五烷酮和環(huán)十七烷酮是否具有同樣的藥理作用，尚未有人進(jìn)行研究，可作為下一階段研究目標(biāo)，比較麝香酮與其藥理作用差異，為麝鼠香成為新的藥用資源提供科學(xué)理論依據(jù)。

麝鼠香中還含有棕櫚油酸、棕櫚酸、油酸、亞油酸等脂肪酸類成分，研究發(fā)現(xiàn)，脂肪酸類化合物有較強(qiáng)的抗氧化作用，且兼具調(diào)節(jié)血脂、軟化血管、降低血壓、抗血小板聚集、促進(jìn)微循環(huán)等活性[21,22]，同時(shí)還有抗腫瘤、提高生物膜相對(duì)流動(dòng)性的免疫調(diào)節(jié)作用[23]。亞油酸是人體和動(dòng)物生長發(fā)育的必須脂肪酸，油酸有降血脂，預(yù)防動(dòng)脈硬化的功效[23]，棕櫚油酸對(duì)肥胖癥、糖尿病和脂肪肝等具有一定的療效，可預(yù)防或減少心血管疾病的發(fā)生[24]，且對(duì)傷口發(fā)炎具有抑制效果以及具有改善皮膚光滑度等作用[25]。同時(shí)通過動(dòng)物藥理實(shí)驗(yàn)表明，麝鼠香系列化妝品具有較強(qiáng)的抗衰老活性，能促進(jìn)皮膚內(nèi)SOD活性，抑制脂質(zhì)過氧化物丙二醛(MDA)的產(chǎn)生，降低脂褐質(zhì)的含量和單胺氧化酶(MAO-B)的活性，還具有抗炎、抑菌和促進(jìn)皮膚的新陳代謝，有較好的潤膚作用[26]。另外，Xu[27]研究發(fā)現(xiàn)麝鼠香可抑制血小板聚集，延長PT(凝血酶原)、TT(凝血酶)時(shí)間，能抑制紅細(xì)胞聚集，降低紅細(xì)胞的脆性，增加其變形性，降低全血粘度，從而具有活血化瘀的作用，可預(yù)防血栓性疾病的發(fā)生，麝鼠香活血化瘀的作用，可能與其含有的不飽和脂肪酸有關(guān)，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

麝鼠香不僅藥理作用廣泛，其香氣純正，氣味柔和，留香持久，還是一種優(yōu)良的定香劑，可用于調(diào)制香水、膏、霜等，可廣泛應(yīng)用于日化工業(yè)，麝鼠香中含有的酯類、脂肪酸類、大環(huán)酮類物質(zhì)，使得麝鼠香具有了天然動(dòng)物香料的物質(zhì)基礎(chǔ)，是繼麝香、靈貓香、海貍香、龍涎香四大名香之后的又一名貴天然動(dòng)物香料，麝鼠香在香料、日化工業(yè)以及醫(yī)藥行業(yè)方面都具有廣闊的應(yīng)用前景。本文建立了麝鼠香的GC-MS分析方法，并同時(shí)測(cè)定了環(huán)十五烷酮含量，比較了麝鼠香、麝香兩者成分差異，為麝鼠香資源的合理利用提供了科學(xué)理論依據(jù)。