舒 娟,石玉梅,徐曉芳,袁景祥
(1. 銅仁市檢驗檢測院,貴州 銅仁 554300 ;2. 銅仁市袁家寺骨科醫(yī)院,貴州 銅仁 554300)
復方豬油膏是袁氏家族的祖?zhèn)髅胤?,屬于我國地道的民族民間藥物。2003 年袁氏家族創(chuàng)建了銅仁袁家寺骨科醫(yī)院,并在院內新建了10 萬級層流凈化豬油膏制劑室。2014年2 月該院復方豬油膏的制作通過了省、市食品藥品監(jiān)督管理局的現(xiàn)場評審。復方豬油膏由冰片、自然銅、黃丹、麝香、龍骨、滑石粉、豬油七味中藥組成,可祛膿拔毒、生肌、鎮(zhèn)痛、促進骨痂的生長和組織細胞的修復、縮短骨折愈合的時間。用此藥治療跌打損傷、瘀血腫痛、痛風、關節(jié)腫痛、風濕熱痹的療效顯著,且對急慢性骨髓炎(骨蝕)也有一定的療效[1-2]。此藥的原質量控制標準過于簡單,不能有效地控制其質量。為了加強對復方豬油膏進行質量控制,應對此藥中藥物活性成分的含量進行有效的測定[3-5]。本文主要是探討用氣相色譜(gas chromatography,GC)法測定復方豬油膏中異龍腦含量的效果。
分析純?yōu)橐宜嵋阴ィㄓ商旖蚴懈挥罹毣び邢薰咎峁┖退畻钏峒柞ィㄓ商旖蚴泄鈴途毣ぱ芯克峁?,異龍腦(由111512-201904 中國食品藥品檢定研究院提供),16 個不同批次的復方豬油膏樣品(由銅仁袁家寺骨科醫(yī)院提供),復方豬油膏陰性對照品(由銅仁袁家寺骨科醫(yī)院提供)。
島津GC2014 氣相色譜儀,AOC20i 自動進樣裝置,METTLER TOLEDO-XPE56 百萬分之一天平,METTLER TOLEDO-XPE105 十萬分之一天平,KQ-500E 超聲波清洗器。
2.1.1 內標溶液的制備 精密量取水楊酸甲酯5 mL,置于1000 mL 的量瓶中,加入乙酸乙酯至刻度,搖勻,作為內標溶液。
2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取異龍腦對照品適量,加入內標溶液制成每l mL 含異龍腦1.26970 mg 的溶液(即對照品溶液)。吸取對照品溶液1 μL,注入氣相色譜儀內,計算校正因子。
2.1.3 供試品溶液的制備 精密稱取復方豬油膏1 g,置于具塞錐形瓶中,加入內標溶液10 mL,稱定重量。對溶液進行5 min 的超聲處理,放冷后再稱定重量,并用內標溶液補足減失的重量。將溶液搖勻后進行濾過處理,取續(xù)濾液過0.45 μm 的濾膜,即制得供試品溶液。
2.1.4 陰性對照溶液的制備 將復方豬油膏處方中的冰片去除,余藥按復方豬油膏的制備工藝進行制備,制成陰性對照品,按 2.1.3 項下的方法制備成陰性對照溶液。
色譜柱為以Rtx?-1701 為固定相的毛細管柱(柱長為30 m,內徑為0.32 mm,膜厚度為0.25 μm),柱溫為120℃,進樣口溫度為200℃,火焰離子檢測器(flame ionization detector,F(xiàn)ID)的溫度為200℃,進樣方式為分流式進樣,分流比為20:1。理論板數(shù)為水楊酸甲酯峰不低于2500。
精密稱取異龍腦對照品適量,加入內標溶液制成每l mL含異龍腦3.17425 mg 的溶液(即對照品溶液)。精密吸取對照品溶液0.8 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL,分別置于10 mL 的量瓶中,加入內標溶液稀釋至刻度。精密吸取各濃度對照品溶液1 μL,注入氣相色譜儀中進行檢測(色譜條件如上),以峰面積A 對濃度(mg/mL)進行線性回歸計算,得到線性回歸方程 y=719359x+267526,R2=0.999。這表明,異龍腦在0.25394 ~3.17425 mg/mL范圍內具有良好的線性關系。
精密吸取對照品溶液1 μL,重復進樣6 次,計算得到相對標準偏差(RSD)為0.87%。這表明,該檢測方法的精密度良好。
取復方豬油膏樣品(批號20190803),按照2.1.3 項下的方法制成供試品溶液,分別于0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h 進樣測定(色譜條件如上)異龍腦的峰面積并計算其平均含量。測定的結果顯示,異龍腦的RSD 為1.18%。這表明,供試品溶液在24 h 內的穩(wěn)定性良好。
取復方豬油膏樣品(批號20190803),按照2.1.3 項下的方法制成供試品溶液。將供試品溶液平均分成6 份,用GC 法并按照上述色譜條件對6 份供試品溶液進行測定,分別記錄其峰面積并計算其平均含量。結果顯示,異龍腦的RSD 為1.36%。這表明,該檢測方法的重復性良好。
采用加標回收法,精密稱取6 份已知含量的復方豬油膏樣品(批號為20190803,異龍腦的含量為16.80 mg/g),置于10 mL 的容量瓶中,精密加入異龍腦對照品溶液(濃度為1.2697 mg/mL)4 mL。采用2.1.1 項下的方法制成內標溶液,將溶液稀釋至刻度。按2.1.3 項下的方法制成供試品溶液,并采用GC 法按上述色譜條件對內標溶液進行測定。測定的結果顯示,異龍腦的平均回收率為94.43%,RSD 為0.70%(n=6)。詳見表1。這表明,該檢測方法具有良好的回收率。
表1 復方豬油膏加樣回收率試驗結果(n=6)
取16 批次復方豬油膏樣品,將其按照2.1.3 項下的方法制成供試品溶液。采用GC 法按上述色譜條件對供試品溶液進行測定,每批次樣品均測定3 次,16 批次樣品中異龍腦含量的測定結果見表2。
表2 復方豬油膏樣品的測定結果
按2.1.4 項下的方法制備陰性對照溶液。分別吸取陰性對照溶液、對照品溶液與供試品溶液各1 μL,采用GC法按上述色譜條件進行測定,記錄色譜圖。陰性對照溶液、對照品溶液與供試品溶液的色譜圖見圖1。
圖1 陰性對照溶液、對照品溶液與供試品溶液的色譜圖
復方豬油膏屬于我國地道的民族民間藥物。在100 余年的使用過程中,復方豬油膏被證實具有續(xù)筋接骨、活血化瘀、祛腐生肌的功效,同時對水、火燙傷也有一定的治療作用。本文建立了復方豬油膏的質量控制方法。復方豬油膏處方中的冰片(合成龍腦)為君藥,具有開竅醒神、清熱止痛之功效,其主要藥物活性成分為異龍腦[6-8]。GC法是一種以氣體為流動相的色譜分析方法,主要用于分離分析易揮發(fā)的物質。本研究在采用GC 法測定復方豬油膏中異龍腦的含量時,在上述色譜條件下陰性樣品在異龍腦吸收峰位置無干擾峰,這說明采用GC 法測定復方豬油膏中異龍腦含量的重現(xiàn)性良好,結果準確度高。
綜上所述,用GC 法測定復方豬油膏中異龍腦的含量具有精密性、重復性、穩(wěn)定性良好及加樣回收率高等優(yōu)點,可用于對復方豬油膏進行質量控制。