王元媛 李 瀟 蘇 佳

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤，目前常采用手術(shù)、放化療等方法，術(shù)前化療可減小病灶提高手術(shù)切除率和降低術(shù)中轉(zhuǎn)移機(jī)風(fēng)險[1-2]。由于大多數(shù)患者一旦確診就已處于宮頸浸潤癌階段，甚至嚴(yán)重轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致手術(shù)切除難度大，術(shù)后復(fù)發(fā)率較高等，從而降低術(shù)后治療效果。因此手術(shù)過程中對患者治療效果進(jìn)行評估，可有效指導(dǎo)醫(yī)師重點關(guān)注低治療效率患者，及時調(diào)整治療方案，從而改善生活質(zhì)量和加快預(yù)后[3-4]。超聲造影(Contrast-enhanced Ultra sonogra-phy，CEUS)可檢測腫瘤血管形態(tài)及血流動力學(xué)狀態(tài)，同時還能提供治療前后腫瘤病灶微循環(huán)變化情況，反應(yīng)疾病進(jìn)展[5]。人G補(bǔ)綴FHA域血管生成因子1(angiogenic factor with G and FHA domains 1,AGGF1)具有強(qiáng)烈的血管生成促進(jìn)功能，通過誘導(dǎo)持續(xù)性血管生成從而促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的生長、侵襲以及轉(zhuǎn)移，而hPygo2可由人乳頭瘤病毒誘導(dǎo)從而在組織中高表達(dá)，通過調(diào)控細(xì)胞周期的變化引起癌細(xì)胞異常增殖，進(jìn)而導(dǎo)致宮頸癌組織向周圍組織浸潤，兩種因子均在宮頸癌組織中高表達(dá)，協(xié)同調(diào)控腫瘤的生長、分化、侵襲、轉(zhuǎn)移，從而降低手術(shù)治療效果[6-7]。AGGF1與血管狀態(tài)密切關(guān)聯(lián)，而CEUS直接檢測腫瘤血管灌注狀態(tài)，故而推測兩者之間存在相關(guān)性。因此在手術(shù)治療過程中檢測宮頸癌組織中的表達(dá)情況至關(guān)重要，同時配合使用CEUS評估腫瘤血管狀態(tài)，可從分子學(xué)、影像學(xué)角度進(jìn)一步評估宮頸癌組織的分化、生長狀態(tài)，從而反應(yīng)術(shù)后效果，因此本文將通過實例進(jìn)一步探討。

1 資料與方法

1.1 基本資料

選取我院于2017年6月起至2019年12月126例行手術(shù)治療的老年宮頸癌患者作為研究對象，根據(jù)患者術(shù)后療效分為有效組(84例)和無效組(42例)，年齡56～71歲。所有患者均簽署知情同意書，本研究獲得我院倫理委員會批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)病理學(xué)、影像學(xué)檢測確診為宮頸癌，根據(jù)2006年修訂國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟 (FIGO) 臨床分期為ⅠB～Ⅱ期[8]；(2)均為初治患者，未接收化療、手術(shù)治療，預(yù)計生存期超過6個月。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)心、腎、肝等重要臟器功能障礙或造血系統(tǒng)疾病者；(2)存在其他原發(fā)性惡性腫瘤，或者腫瘤轉(zhuǎn)移者；(3)手術(shù)不耐受，應(yīng)從性較差。

1.2 方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)

所有患者術(shù)前1周采用CEUS檢查，首先用5 ml生理鹽水溶解聲諾維微泡造影劑干粉(Bracco SonoVue)，混勻即可，肘部靜脈注射2.4 ml造影劑后立即用5 ml生理鹽水沖洗管道。采用超聲儀(廠家：美國GE公司的volusonE8)行陰道超聲檢查，觀察宮頸癌患者病灶位置、大小、血流、回聲等情況。經(jīng)肘靜脈團(tuán)注造影劑2.4 ml，及時啟動計時器、動態(tài)存儲，觀察造影過程5 min，并連續(xù)記錄儲存所有圖像資料。

使用時間-強(qiáng)度分析軟件對病灶進(jìn)行定量分析，得到宮頸癌各區(qū)域的時間-強(qiáng)度曲線的量化參數(shù)，主要為造影劑到達(dá)時間 (arriving time,AT)、達(dá)峰時間 (time to peak,TTP)、峰值強(qiáng)度 (peak intensity,PI)，平行測量3次，取平均值。

收集手術(shù)切除的宮頸癌組織并進(jìn)行石蠟包埋。隨后依次連續(xù)切片、低溫烤干后保存于-20℃冰箱，采用辣根-過氧化酶連接二步法對頸癌組織中hPygo2、AGGF1表達(dá)水平進(jìn)行免疫組化法檢測。兔抗人Pygopus2單克隆抗體，購自美國Abcam公司，抗-AGGF1一抗購自美國Santa Cruz公司，免疫組化染色步驟按試劑盒說明書開展。采用雙盲法閱片，正置顯微鏡購自于日本Olympus公司，細(xì)胞中著色點位于細(xì)胞核，出現(xiàn)綠色熒光為AGGF1表達(dá)陽性細(xì)胞，若呈現(xiàn)棕黃色顆粒為hPygo2表達(dá)陽性細(xì)胞。

每張病理切片中選擇3～5個代表性的高倍視野采集圖像，根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)占比以及染色強(qiáng)度進(jìn)行判斷。陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度：強(qiáng)染色(3分)、中染色(2分)、弱染色(1分)、無染色(0分)。陽性細(xì)胞率：51%～100%(4分)、26%～50%(3分)、10%～25%(2分)、0～9%(1分)。

療效評定標(biāo)準(zhǔn)[9]：根據(jù)RECIST實體腫瘤化療療效評定標(biāo)準(zhǔn)并采用超聲造影檢查、婦科檢查結(jié)果進(jìn)行判定，若腫瘤治療后完全緩解、部分緩解則判定為有效，若病變進(jìn)展、病變穩(wěn)定則判定為無效。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料用表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，計數(shù)資料采用百分比表示，組間比較采用χ2檢驗；對術(shù)后療效影響因素進(jìn)行單因素分析，并采用非條件Logistic回歸進(jìn)行多因素分析，相關(guān)性評估采用Spearman相關(guān)性分析，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 造影結(jié)果

有效組患者術(shù)前AT、TTP顯著高于無效組，而PI顯著低于無效組 (P<0.05)，見表1。

表1 術(shù)前造影結(jié)果

2.2 組織hPygo2、AGGF1表達(dá)水平

有效組患者宮頸癌組織中的hPygo2、AGGF1表達(dá)水平顯著高于無效組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2、表3。

表2 宮頸癌組織中hPygo2表達(dá)水平

表3 宮頸癌組織中AGGF1表達(dá)水平

2.3 術(shù)后療效與臨床病理特征的關(guān)系

兩組患者年齡、吸煙史、癌癥類型、癌癥分期、高血壓、高血脂等一般資料差異無顯著性(P>0.05)，而有效組患者的腫瘤顯著小于無效組(P<0.05)，見表4。

表4 術(shù)后療效與臨床病理特征的關(guān)系

2.4 宮頸癌患者術(shù)后療效影響因素的Logistic回歸分析

經(jīng)對患者的腫瘤大小、組織hPygo2和AGGF1表達(dá)水平以及影像結(jié)果進(jìn)行回歸多因素分析，結(jié)果顯示均與術(shù)后療效存在密切相關(guān)性(P<0.05)，見表5。

表5 患者術(shù)后療效影響因素多因素分析結(jié)果

2.5 組織hPygo2和AGGF1表達(dá)水平以及影像參數(shù)的相關(guān)性

本次研究結(jié)果顯示：組織hPygo2和AGGF1表達(dá)水平、AT、TTP兩兩之間存在顯著正相關(guān)性，均與PI呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，見表6。

表6 組織hPygo2和AGGF1表達(dá)水平以及影像參數(shù)的相關(guān)性(γ，P)

3 討論

宮頸癌是婦科腫瘤中是僅次于乳腺癌的第二大腫瘤，早期癥狀不顯著，若診斷治療不及時，則易過渡到進(jìn)展期宮頸浸潤癌階段，使得術(shù)后仍然需要開展化療、放療，以增強(qiáng)療效[4]。目前手術(shù)治療是唯一可能治愈宮頸癌的方法，同時在治療圍術(shù)期配合使用化療、放療，可有效殺滅癌細(xì)胞[10]。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤的血流灌注變化可作為療效的重要參考指標(biāo)，采用CEUS技術(shù)評估患者宮頸癌組織血流動力學(xué)狀態(tài)和血管形態(tài)可反應(yīng)腫瘤的生長狀態(tài)，評估術(shù)后化療藥物灌注效率，從而評估治療效果。hPygo2作為癌細(xì)胞生長、發(fā)育的重要的核蛋白，其通過在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，從而調(diào)控染色質(zhì)重塑、轉(zhuǎn)錄激活等生物學(xué)功能，進(jìn)而促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖和腫瘤組織生長發(fā)育[11]。AGGF1則在腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中高表達(dá)，從而推動血管新生，可為惡性增殖的腫瘤細(xì)胞提供充足的營養(yǎng)和氧氣，促進(jìn)代謝廢物的排泄，與宮頸癌的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移等密切關(guān)聯(lián)[12]。因此hPygo2、AGGF1表達(dá)水平均有腫瘤宮頸病變程度和進(jìn)展密切關(guān)聯(lián)，配合超聲造影及時準(zhǔn)確地反映腫瘤血管血流狀態(tài)，從而可為臨床提供有效的療效評價依據(jù)。

本次研究結(jié)果顯示有效組患者的宮頸癌組織中的hPygo2、AGGF1表達(dá)水平顯著高于無效組(P<0.05)，分析認(rèn)為高h(yuǎn)Pygo2、AGGF1表達(dá)患者其疾病處于高度分化狀態(tài)，疾病處于更為嚴(yán)重程度的狀態(tài)，其中hPygo2可促進(jìn)細(xì)胞由G1期向S期轉(zhuǎn)化，加快細(xì)胞周期進(jìn)程，從而促進(jìn)癌細(xì)胞增殖[6]，而癌細(xì)胞的大量增殖需消耗大量的營養(yǎng)和產(chǎn)生大量的廢物，AGGF1則通過誘發(fā)腫瘤血管生成，改善局部缺血狀態(tài)，為腫瘤細(xì)胞的異常增殖提供良好的生長、侵襲條件[13]，故而兩種蛋白因子協(xié)同促進(jìn)腫瘤的生長，從而增加手術(shù)切除和術(shù)后放療難度，降低治療效果。有效組患者術(shù)前AT、TTP顯著高于無效組，而PI顯著低于無效組，分析認(rèn)為有效組患者腫瘤處于高度分化狀態(tài)，高表達(dá)的AGGF1導(dǎo)致大量新生血管的生成，而新生血管的大量交通支、動靜脈瘺使血流阻力降低，從而引起增加灌注速度和灌注量[14]，故而縮短病灶造影劑AT、TTP，以及增加病灶造影劑PI。同時通過對宮頸癌組織hPygo2、AGGF1表達(dá)水平、臨床病理特征以及超聲造影結(jié)果進(jìn)行進(jìn)行單因素、多因素分析發(fā)現(xiàn)結(jié)宮頸癌組織hPygo2、AGGF1表達(dá)水平、超聲造影結(jié)果與患者術(shù)后療效均有顯著相關(guān)性。即宮頸癌組織中高h(yuǎn)Pygo2、AGGF1表達(dá)水平、超聲造影結(jié)果顯示腫瘤血管狀態(tài)更佳，則手術(shù)治療效果越差。hPygo2促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長、增殖、分化，同時AGGF1通過增加血管密度和加快局部血流速度，從而為腫瘤細(xì)胞提供良好的生長環(huán)境，進(jìn)而使得宮頸癌組織進(jìn)一步擴(kuò)散，增加腫瘤大小和誘導(dǎo)腫瘤高度分化等，而超聲影像結(jié)果則是顯示腫瘤血管的實際新生狀態(tài)，可提供腫瘤內(nèi)微循環(huán)的變化情況，如治療無效組患者會因為新生血管持續(xù)、大量生成，從而導(dǎo)致灌注速度快，病灶造影劑PI高[15]，因此證實超聲造影、hPygo2和AGGF1水平檢測可有效評價老年宮頸癌患者術(shù)后療效。

宮頸癌的發(fā)生發(fā)展受到多因素的影響，且病情發(fā)展迅速、突變因素多，其中參與血管新生、細(xì)胞生長分化的因子是發(fā)病的誘發(fā)因素，超聲影像結(jié)果評估腫瘤生長狀態(tài)，反映治療難度，通過了解各指標(biāo)之間的相關(guān)性可為臨床治療提供思路。本次研究結(jié)果顯示組織hPygo2和AGGF1表達(dá)水平、AT、TTP兩兩之間存在顯著正相關(guān)性，均與PI呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，證實各個信號通路、影像參數(shù)之間對于療效的影響并不是孤立存在的，分子學(xué)水平的變化從內(nèi)在調(diào)控腫瘤的生長，影像學(xué)參數(shù)和圖像則更為直觀的反應(yīng)分子學(xué)水平引起的變化，從而有效評估術(shù)后療效，指導(dǎo)臨床治療，故而推測超聲造影聯(lián)合hPygo2和AGGF1水平檢測可有效評價老年宮頸癌患者術(shù)后療效。當(dāng)然，此次研究還存在一定局限性，本研究沒有進(jìn)行長期的隨訪觀察，因此未能長期關(guān)注宮頸癌患者治療后的hPygo2和AGGF1水平變化趨勢及規(guī)律，同時仍需要擴(kuò)大樣本量進(jìn)行綜合分析，從而為評估和預(yù)測宮頸癌的預(yù)后和長期生存率方面提供有價值的線索。

綜上所述，hPygo2、AGGF1在宮頸癌組織高表達(dá)水平，而超聲造影可有效反應(yīng)腫瘤血流灌注狀態(tài)。三者之間存在顯著相關(guān)性，聯(lián)合檢測可有效反應(yīng)術(shù)后療效。