姬紅波 姚路靜 白瑞鋒

肝細(xì)胞癌(HCC)是世界范圍內(nèi)常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，腫瘤疾病相關(guān)死亡人數(shù)位列全球第四，且東亞地區(qū)死亡率最高[1]。肝硬化、病毒感染、黃曲霉素、酒精、吸煙等危險(xiǎn)因素與HCC的發(fā)病密切相關(guān)。隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，我國(guó)HCC 5年生存率從2005年的10.1%提升到2015年的12.1%，而45歲以上患者5年生存率仍然低于10%[2]。近年來(lái)許多針對(duì)腫瘤細(xì)胞免疫檢查點(diǎn)的分子成為抗腫瘤治療的熱門研究方向，如PD1/PD-L1抗體Tremeimumad[3]、Camrelizumab[4]，全人源性免疫球蛋白G4單克隆抗體Nivolumab[5]等在HCC治療中均表現(xiàn)出較好的抗腫瘤活性和較低的毒性，但臨床使用仍需進(jìn)一步驗(yàn)證。NF2(神經(jīng)纖維瘤病Ⅱ型)基因是一種抑瘤基因，可通過(guò)抑制絲氨酸/蘇氨酸激酶PAK1抑制Ras介導(dǎo)的細(xì)胞癌變，有研究表明缺乏NF2基因能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性生長(zhǎng)[6]。腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性對(duì)腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移能力非常重要，而NF2基因的編碼產(chǎn)物梅林(Merlin)蛋白在調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白和細(xì)胞骨架的運(yùn)動(dòng)中起重要作用，且Merlin蛋白的表達(dá)和缺失都會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞運(yùn)動(dòng)狀態(tài)的改變[7]。之前的研究表明，Merlin蛋白在肝癌細(xì)胞中的高表達(dá)能夠促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[8]，但目前該蛋白與肝癌易感性、化療敏感性及預(yù)后的關(guān)系尚不明確。因此，本研究以HCC患者為對(duì)象，檢測(cè)患者血清Merlin蛋白的表達(dá)水平，旨在研究其與HCC的發(fā)生發(fā)展、化療敏感性及患者預(yù)后之間的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選擇本院肝膽外科2014年2月至2017年2月收治的57例肝臟惡性腫瘤患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均通過(guò)組織活檢確診為HCC，臨床分期為CNLC Ⅲb期和Ⅳ期無(wú)法手術(shù)治療的患者[9]。②患者臨床資料完整，包括年齡、性別、病理分級(jí)、腫瘤直徑等。③患者臟器功能良好，無(wú)化療禁忌證。排除標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)診斷排除非HCC和非CNLC Ⅲb期、CNLC Ⅳ期HCC患者。②存在肝功能、腎功能、心功能衰竭的患者，血壓及血糖無(wú)法控制的患者，出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥的患者。③診斷后未在我院接受治療的患者。研究組男性31例，女性26例，年齡為47～73(63.1±7.1)歲，按照1∶1納入年齡、性別匹配體檢健康人作為對(duì)照。該研究納入對(duì)象均簽署對(duì)研究的知情同意書并經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2 化療效果及隨訪

所有患者均使用奧沙利鉑為主的FOLFOX4方案進(jìn)行化療，完成3～4個(gè)周期的化療后2周，對(duì)患者瘤體大小進(jìn)行測(cè)量并根據(jù)WHO實(shí)體瘤客觀療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)化療效果進(jìn)行評(píng)價(jià)：分為完全緩解(complete remission，CR)、部分緩解(partial remission，PR)、疾病穩(wěn)定(stable diserase，SD)和疾病進(jìn)展(progressive disease，PD)。以CP與PR之和為總有效率(total effective，ORR)，患者出現(xiàn)PD則判定為無(wú)效。所有患者均以出現(xiàn)CR、PR、SD判定為臨床獲益，表明治療預(yù)后良好，PD則表明治療預(yù)后不良，分析其預(yù)后相關(guān)因素，并繼續(xù)以此方案進(jìn)行化療?；颊呱嫦嚓P(guān)指標(biāo)采用疾病進(jìn)展時(shí)間(time to progressive，TTP)和患者總生存時(shí)間(overall survival，OS)。

1.3 檢測(cè)患者血清中Merlin蛋白表達(dá)水平

健康人體檢當(dāng)天、HCC患者進(jìn)行化療前、后采集血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中Merlin蛋白表達(dá)水平，試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物公司，均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書中規(guī)定步驟進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 血清中Merlin蛋白表達(dá)水平比較

HCC患者使用FOLFOX4方案化療前血清中Merlin蛋白表達(dá)平均水平為(79.63±12.35)ng/mL，顯著高于健康人的(41.34±7.48)ng/mL；HCC患者化療后平均水平為(58.97±10.54)ng/mL，與化療前相比顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.607，P<0.001)。

2.2 肝細(xì)胞癌患者血清中Merlin蛋白表達(dá)水平與臨床病理特征的相關(guān)性

HCC患者血清中Merlin表達(dá)水平與患者年齡、性別無(wú)關(guān)，與患者腫瘤大小、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度和外周血甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein，AFP)水平密切相關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 HCC患者血清中Merlin蛋白表達(dá)水平與臨床病理信息的相關(guān)性

2.3 肝細(xì)胞癌患者化療后不同效果組血清中Merlin蛋白表達(dá)水平的比較

57例HCC患者接受FOLFOX4方案化療后CR組、PR組、SD組、PD組人數(shù)分別為9人、15人、21人、12人，4組受試者血清中Merlin蛋白表達(dá)水平分別為(47.64±10.18)ng/mL、(58.63±11.03)ng/mL、(59.79±11.86)ng/mL、(70.43±12.30)ng/mL，整體比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.823，P<0.001)。

2.4 肝細(xì)胞癌患者預(yù)后不良影響因素的Logistic回歸分析

多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示腫瘤直徑、腫瘤分化程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、外周血AFP水平是否大于400 ng/ml、血清中Merlin蛋白水平與肝癌患者預(yù)后不良顯著相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 肝細(xì)胞癌患者預(yù)后影響因素的Logistic回歸分析

3 討論

近幾年的研究表明，世界每年因HCC死亡的人數(shù)約為78萬(wàn)，為死亡率第四的惡性腫瘤，東亞地區(qū)HCC死亡率最高，南美最低。我國(guó)HCC患者死亡率高，5年生存率低，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)常為中晚期，失去最佳手術(shù)機(jī)會(huì)，且易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[9]。晚期肝癌的主要治療手段仍為化療，現(xiàn)在以?shī)W沙利鉑為主的FOLFOX4方案被推薦為治療晚期HCC的一線治療手段[10]，多項(xiàng)研究表明奧沙利鉑化療聯(lián)合索拉菲尼能夠有效提高患者緩解率和無(wú)進(jìn)展生存期(Progress free survival，PFS)[11]。HCC患者對(duì)化療藥物的敏感性與其治療效果和預(yù)后密切相關(guān)，而腫瘤多藥耐藥性是當(dāng)今腫瘤化療的重大難題之一。

NF2基因是目前發(fā)現(xiàn)的唯一一個(gè)和神經(jīng)纖維瘤Ⅱ型相關(guān)的致病基因[12]，目前NF2基因突變超過(guò)200種，但任何突變都能夠使其編碼的Merlin蛋白失活，而NF2基因突變導(dǎo)致的Merlin蛋白失活均參與了乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌和肝細(xì)胞癌等惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展[13]。Merlin蛋白是一種NF2基因的編碼產(chǎn)物，被發(fā)現(xiàn)了具有抑制腫瘤生長(zhǎng)的功能[13]。Merlin蛋白可作為間接連接F-肌動(dòng)蛋白、跨膜受體和細(xì)胞內(nèi)效應(yīng)的支架蛋白，調(diào)節(jié)受體介導(dǎo)的信號(hào)通路，控制細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖[7]。有研究表明Merlin蛋白能夠定位并結(jié)合CD44，通過(guò)與透明質(zhì)酸競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合CD44抑制了腫瘤的生長(zhǎng)，而缺乏CD44結(jié)合域的Merlin蛋白突變體由于無(wú)法結(jié)合CD44而無(wú)法抑制腫瘤的生長(zhǎng)[14]。但有研究表明Merlin蛋白在惡性腫瘤中發(fā)揮抑癌和促癌的雙重作用[8]，在肺癌[15]、乳腺癌中[16]Merlin蛋白表達(dá)水平明顯下降，但在HCC中Merlin蛋白表達(dá)水平顯著上升，目前和此現(xiàn)象有關(guān)的文獻(xiàn)研究較少。

本研究使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)HCC患者血清中Merlin蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HCC患者血清中Merlin蛋白水平顯著增加，與之前的研究結(jié)果相吻合[8]；肝癌患者血清中Merlin蛋白水平與患者年齡、性別無(wú)關(guān)(P>0.05)，但與患者的腫瘤大小、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化的程度和外周血AFP水平密切相關(guān)(P<0.05)；HCC患者使用FOLFOX4方案化療后血清中Merlin蛋白表達(dá)水平與化療前相比顯著降低(P<0.001)；對(duì)化療后不同效果組的血清中Merlin蛋白表達(dá)水平檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Merlin蛋白表達(dá)水平隨化療效果的降低明顯升高。本研究還通過(guò)Logistic回歸分析顯示HCC腫瘤直徑、分化程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、外周血AFP水平是否大于400 ng/ml、血清Merlin蛋白水平與肝癌患者預(yù)后顯著相關(guān)(P<0.05)。

綜合本文的研究結(jié)果，Merlin蛋白在HCC患者血清中的表達(dá)水平明顯高于健康體檢者，且表達(dá)水平與HCC腫瘤大小、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化的程度和患者外周血AFP水平相關(guān)；化療前后血清中Merlin蛋白表達(dá)存在顯著差異，且化療效果越差的患者血清中Merlin蛋白表達(dá)水平越高。