郭瑞麗 朱科科 郭宗艷

卵巢癌(ovarian cancer,OC)是婦科惡性腫瘤之一，也是我國(guó)女性病死率最高的婦科腫瘤，近五年生存率19%～32%，由于該腫瘤起病部位隱匿且前期無(wú)典型癥狀，因此早期診出率低，根據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)：70%的患者初診時(shí)已為晚期[1-2]。目前其臨床診斷多為多普勒超聲診斷和標(biāo)志指標(biāo)CA125檢測(cè)診斷等方式，但靈敏度上仍存在局限，且存在誤診和漏診，因此靈敏度、特異度以及準(zhǔn)確性高的乳腺癌標(biāo)志物是提升該癌癥早期診出率以及總體生存率的主要前提[3-4]。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)是1種促血管生成劑，在正常組織中呈低表達(dá)狀態(tài)，在損傷部位及腫瘤浸潤(rùn)組織中被激活而發(fā)揮促血管生成作用[5]。層粘連蛋白(Laminin,LN)是基膜的主要糖蛋白成分，它是腫瘤細(xì)胞的重要屏障，腫瘤在轉(zhuǎn)移之前必須將其破壞，因此其與卵巢癌的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)[6]。本研究選擇2018年9月至2020年9于焦作市人民醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)治療的上皮性卵巢癌患者術(shù)后留存的腫瘤標(biāo)本為研究對(duì)象，檢測(cè)并分析bFGF和LN在上皮性卵巢癌組織中表達(dá)的臨床意義及與腫瘤血管生成的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

隨機(jī)選取2018年9月至2020年9于焦作市人民醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)治療的上皮性卵巢癌患者術(shù)后留存的腫瘤組織及癌旁組織石蠟標(biāo)本，并分別作為病理組(n=63)和癌旁組(n=63)。病理組中，所有患者均經(jīng)病理學(xué)確診，且術(shù)前未經(jīng)放、化療以及免疫治療；患者年齡30～70歲，平均年齡(51.76±5.22)歲；臨床分期(FIGO)：Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期36例；病理類型：漿液性囊腺癌34例、粘液性囊腺癌29例；病理分級(jí)：高中分化31例，低分化32例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例，非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑 兔抗人bFGF多克隆抗體(購(gòu)自上海玉博生物科技有限公司，貨號(hào)LS-C211338)、兔抗人LN單克隆抗體(購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，貨號(hào)：ab11575)、免疫組化(IHC)試劑盒和試劑(購(gòu)自欣博盛生物科技有限公司，貨號(hào)：ENS004.120)、鼠抗人CD34單克隆抗體(購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，貨號(hào)：ab185732)。

1.2.2 bFGF和LN陽(yáng)性表達(dá)率檢測(cè) 采用免疫組化(SP法)檢測(cè)上皮性卵巢癌組織及癌旁組織中bFGF和LN的表達(dá)，取組織石蠟標(biāo)本，常規(guī)脫蠟后，采用bFGF和LN抗體，根據(jù)免疫組化試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行染色，最后采用中性樹膠封面，鏡下觀察并拍照，采用Image Analysis System11.0獲取圖像中蛋白陽(yáng)性表達(dá)范圍占比，結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)見表1，以(-)和(+)作為陰性，(++)和(+++)為陽(yáng)性。

表1 免疫組化染色陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)[7]

1.2.3 微血管密度(microvessel density,MVD)檢測(cè)及計(jì)數(shù) 檢測(cè)方法及流程同上，采用CD34抗體。MVD計(jì)數(shù)：鏡下尋找血管密集區(qū)域，每個(gè)切片取3個(gè)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)求平均值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 2組bFGF和LN陽(yáng)性表達(dá)率以及MVD值比較

與癌旁組相比，病理組bFGF和LN陽(yáng)性表達(dá)率以及MVD值均顯著增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 2組bFGF和LN陽(yáng)性表達(dá)率以及MVD值比較

2.2 bFGF和LN在不同臨床特征上皮性卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率比較

不同臨床分期、病理分級(jí)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的上皮性卵巢癌組織中bFGF和LN陽(yáng)性表達(dá)率均具有顯著性差異(P<0.05)，而不同病理類型則無(wú)顯著差異(P>0.05)。Ⅲ～Ⅳ期患者bFGF和LN陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于Ⅰ～Ⅱ期，低分化患者bFGF和LN陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于高中分化，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者bFGF和LN陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，見表3。

表3 bFGF在不同臨床特征上皮性卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)比較/例

2.3 不同臨床特征上皮性卵巢癌組織中MVD計(jì)數(shù)比較

不同臨床分期、病理分級(jí)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況上皮性卵巢癌組織中MVD值均具有顯著性差異(P<0.05)，而病理類型則無(wú)顯著差異(P>0.05)。Ⅲ～Ⅳ期患者M(jìn)VD值顯著多于Ⅰ～Ⅱ期，低分化患者M(jìn)VD值顯著多于高中分化，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者M(jìn)VD值顯著多于非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，見表4。

表4 不同臨床特征上皮性卵巢癌組織中MVD值比較

2.4 bFGF和LN表達(dá)陽(yáng)性結(jié)果與MVD值相關(guān)性分析

相關(guān)性分析結(jié)果顯示：bFGF和LN高表達(dá)均與MVD值呈顯著正相關(guān)(γ=0.673、0.712，P=0.014、0.008)。

3 討論

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一，其死亡率居?jì)D科腫瘤首位，其早期發(fā)病隱匿且缺乏靈敏度和特異性較高的診斷方法，因此約70%的患者確診時(shí)已為晚期，錯(cuò)過了可進(jìn)行有效救治的最佳時(shí)期[8-9]。上皮性卵巢癌是卵巢腫瘤的一種，約占其50%～70%，是1種化療敏感性腫瘤，通常半數(shù)以上患者化療后可完全緩解，但其中仍有50%出現(xiàn)復(fù)發(fā)現(xiàn)象，因此其近五年生存率僅約20%[10-11]。目前醫(yī)學(xué)界仍致力于該腫瘤特異性、靈敏度、準(zhǔn)確度高的標(biāo)志物研究，從而使其早期診出率及治愈率得到提高。

bFGF是多功能細(xì)胞生長(zhǎng)因子，可刺激中胚層和神經(jīng)外胚層細(xì)胞以及成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)，研究顯示該生長(zhǎng)因子機(jī)器手體育癌基因之間存在密切關(guān)聯(lián)，如：葉麗平等研究顯示：bFGF可能部分通過CREB調(diào)節(jié)人卵巢癌CAOV3細(xì)胞Bcl-2的表達(dá),參與細(xì)胞的生存及增殖調(diào)控[12-13]。本研究具體探討了bFGF在上皮性卵巢癌組織中表達(dá)的臨床意義及與腫瘤血管生成的相關(guān)性，結(jié)果顯示：與癌旁組相比，病理組bFGF陽(yáng)性表達(dá)率以及MVD值均顯著增加(P<0.05)，Ⅲ～Ⅳ期患者bFGF陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于Ⅰ～Ⅱ期，低分化患者bFGF陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于高中分化，淋巴轉(zhuǎn)移患者bFGF陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于非淋巴轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，提示：bFGF的表達(dá)與上皮性卵巢癌患者的臨床分期、病理分級(jí)以及淋巴轉(zhuǎn)移等臨床特征密切相關(guān)，并參與上皮性卵巢癌的發(fā)生和進(jìn)展。

LN是細(xì)胞外基質(zhì)的粘附分子，可調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附、分化及遷移能力，目前該蛋白是部分腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)機(jī)制中的重點(diǎn)研究蛋白之一，病理學(xué)研究已證實(shí)其與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲有關(guān)[14-15]。本研究中，與癌旁組相比，病理組LN陽(yáng)性表達(dá)率以及MVD值均顯著增加(P<0.05)，Ⅲ～Ⅳ期患者LN陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于Ⅰ～Ⅱ期，低分化患者LN陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于高中分化，淋巴轉(zhuǎn)移患者LN陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于非淋巴轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，提示：LN的表達(dá)與上皮性卵巢癌患者的臨床分期、病理分級(jí)以及淋巴轉(zhuǎn)移等臨床特征密切相關(guān)，并通過促進(jìn)其腫瘤組織血管生成而參與其發(fā)生、進(jìn)展，在這一點(diǎn)上其臨床價(jià)值與bFGF類似。分析其原因在于：LN受體(67 LR)是1種來(lái)自37 kDa前體(37LR)的67kDa蛋白。37/67LR與包括乳腺癌，前列腺癌和結(jié)腸癌在內(nèi)的多種癌癥的進(jìn)展，攻擊性和化學(xué)療法復(fù)發(fā)密切相關(guān)。37/67LR轉(zhuǎn)換內(nèi)皮細(xì)胞中的理化和機(jī)械傳感信號(hào)并調(diào)節(jié)血管生成的能力進(jìn)一步提高了其促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲性的能力[16]。另外，本研究相關(guān)性分析結(jié)果顯示：bFGF和LN的高表達(dá)均與MVD值呈顯著正相關(guān)(γ均>0，P均<0.05)，表明：bFGF和LN的高表達(dá)則預(yù)示腫瘤組織血管生成能力增強(qiáng)，結(jié)合前文結(jié)果：bFGF和LN通過促進(jìn)上皮性卵巢癌組織血管生成而參與其發(fā)生和進(jìn)展。本研究不足之處在于——未將研究結(jié)果與患者預(yù)后調(diào)查結(jié)合進(jìn)行論述，后續(xù)將對(duì)本研究進(jìn)行完善。

綜上所述，bFGF和LN的表達(dá)與上皮性卵巢癌患者的臨床分期、病理分級(jí)以及淋巴轉(zhuǎn)移等臨床特征密切相關(guān)，并可能通過促進(jìn)上皮性卵巢癌組織血管生成而參與其發(fā)生和進(jìn)展。因此未來(lái)極有可能在上皮性卵巢癌的早期診斷及治療中作為靶標(biāo)分子。