孫 楨 馬耀先 劉 鑫 申小燕 方曉瑞 駱許靜

肺癌是較為常見(jiàn)的呼吸道腫瘤疾病之一[1]，據(jù)流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)[2]，非小細(xì)胞肺癌(non-squamous non-small cell lung cancer，NSCLC)已經(jīng)達(dá)到肺癌發(fā)病率的85.00%，其發(fā)病率居于所有肺癌的首位，隨著工業(yè)化進(jìn)程的加劇，NSCLC呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)[3]。乳腺癌易感基因(BRCA1)與NSCLC腫瘤細(xì)胞DNA修復(fù)、胚胎生長(zhǎng)以及轉(zhuǎn)錄調(diào)控有關(guān)[4]；ALK 基因的重排(EML4-ALK)對(duì)于肺癌具有促進(jìn)作用[5]。本研究通過(guò)探討B(tài)RCA1、EML4-ALK基因多態(tài)性與非小細(xì)胞肺癌風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性，為臨床診斷和預(yù)防NSCLC提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 基本資料

選取我院2014年5月至2017年12月期間收治的85例非小細(xì)胞肺癌患者作為疾病組，其中男性患者37例，女性患者48例，年齡在45～65歲之間，平均年齡為(57.51±7.37)歲，體重在45～70 kg之間，平均體重為(61.40±2.37)kg，BMI指數(shù)平均為(25.56±1.29)kg/m2，平均病程為(2.39±0.89)年。另選取本院健康體檢者85例作為對(duì)照組。2組患者的性別、年齡、體重及體重指數(shù)之間的差異不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

疾病組患者納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合非小細(xì)胞肺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；②預(yù)計(jì)生存時(shí)間在6個(gè)月以上；③KPS評(píng)分[7]均≥70分；④患者知情且同意本研究方案。排除標(biāo)準(zhǔn)：①心、肝、腎功能嚴(yán)重不全者；②存在交流障礙的患者；③血常規(guī)異?；颊?；④不配合本研究治療方案患者。

1.2 研究方法

入組后，抽取2組患者空腹血液4 ml，使用DNA試劑盒分別對(duì)血液中的DNA進(jìn)行提取，隨后使用taqman探針對(duì)研究對(duì)象的BRCA1、EML4-ALK基因型別進(jìn)行分析，具體操作過(guò)程：將相應(yīng)的引物和探針各取0.5 μL，取DNA提取液2.0 μL，超純水6.0 μL，在熒光PCR檢測(cè)儀中，預(yù)變性(95 ℃，15 s)后，分別再次進(jìn)行變性1(95 ℃，15 s)和變性2(65 ℃，15 s)30個(gè)循環(huán)，最終得到BRCA1、EML4-ALK多樣化數(shù)據(jù)。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)2組人群基因型對(duì)比。分別對(duì)2組人群BRCA1、EML4-ALK基因?qū)Ρ扔^察。(2)2組最小等位基因頻率對(duì)比。使用溫伯格平衡理論，對(duì)2組的最小等位基因頻率進(jìn)行對(duì)比觀察。(3)不同基因遺傳模型下非小細(xì)胞肺癌的風(fēng)險(xiǎn)分析。使用顯性模型、隱性模型、加性模型進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，對(duì)不同基因型別的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行對(duì)比觀察。(4)不同基因型患者的相關(guān)性分析。分別使用spearman相關(guān)性對(duì)患者的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行對(duì)比觀察。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)均采用spss20.0軟件進(jìn)行匯總分析。2組患者的基因型差異采用卡方檢驗(yàn)，其中計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組人群基因型對(duì)比

本研究中，共發(fā)現(xiàn)BRCA1基因類型分別為SER/SER、SER/GLY、GLY /GLY，發(fā)現(xiàn)EML4-ALK基因類型分別為V1、V2、V3，通過(guò)疾病組與健康組的研究發(fā)現(xiàn)，2組人群的基因表達(dá)之間的差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 2組人群基因型對(duì)比(例，%)

2.2 2組最小等位基因頻率對(duì)比

進(jìn)入本研究的所有基因均符合溫伯格平衡，通過(guò)對(duì)2組人群的最小等位基因進(jìn)行對(duì)比觀察，BRCA1基因類型中的SER/GLY以及EML4-ALK基因類型中的V1具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 2組最小等位基因頻率對(duì)比

2.3 不同基因遺傳模型下非小細(xì)胞肺癌的風(fēng)險(xiǎn)分析

通過(guò)對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者的顯性模型、隱性模型、加性模型進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，在3個(gè)模型中，患者的BRCA1基因類型中的SER/GLY以及EML4-ALK基因類型中的V1差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 不同基因遺傳模型下非小細(xì)胞肺癌的風(fēng)險(xiǎn)分析

2.4 不同基因型患者的相關(guān)性分析

通過(guò)對(duì)不同基因型患者的相關(guān)性分析，患者的BRCA1基因類型中的SER/GLY以及EML4-ALK基因類型中的V1與非小細(xì)胞肺癌患者風(fēng)險(xiǎn)呈現(xiàn)正相關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，詳見(jiàn)表4。

表4 不同基因型患者的相關(guān)性分析

3 討論

BRCA1主要位于患者的17q12.21染色體位置[8]，以常染色體顯性遺傳方式進(jìn)行遺傳，在疾病的進(jìn)展過(guò)程中，屬于重要的抑癌基因，該基因具有24個(gè)外顯子，其中22個(gè)外顯子具有編碼功能，而其他2個(gè)均無(wú)編碼功能[9]。通過(guò)基因的編碼功能，共計(jì)可產(chǎn)生1863種蛋白質(zhì)，其相對(duì)分子量在220000左右[10]，在早期，該基因主要在乳腺癌患者中顯性表達(dá)，對(duì)于乳腺癌的發(fā)生發(fā)展具有積極的意義[11]，隨著研究的進(jìn)展，該基因?qū)τ诨颊叩膿p傷修復(fù)、胚胎繁殖以及調(diào)控轉(zhuǎn)錄作用具有重要意義，而在眾多功能中，該基因的損傷修復(fù)功能最為重要。在眾多研究中，BRCA1基因類型中的SER/GLY基因突變對(duì)于患者的基因具有顯著的守護(hù)作用，是公認(rèn)的基因組看護(hù)組。EML4-ALK基因的卷曲螺旋區(qū)域是患者的重要突變基因區(qū)域，該基因與ALK形成二聚體后，進(jìn)而激活患者的EML4-ALK基因的卷曲螺旋區(qū)域，造成患者的基因突變。目前的研究發(fā)現(xiàn)[12]，患者的EML4-ALK基因的突變主要發(fā)生在外顯子2、6、13～15、18、20，而患者的ALK基因的外顯子主要發(fā)生在20，所以該區(qū)域的突變對(duì)于非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展具有積極的意義。

本研究中，通過(guò)對(duì)疾病組和健康組患者的不同基因型進(jìn)行對(duì)比觀察，2組人群的基因型之間的差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而在對(duì)2組人群不同的最小等位基因的頻率進(jìn)行對(duì)比觀察，BRCA1基因類型中的SER/GLY以及EML4-ALK基因類型中的V1，相比其他基因型別，其差異顯著。同時(shí)，通過(guò)對(duì)不同基因型別的顯性模型、隱性模型、加性模型進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，患者的BRCA1基因類型中的SER/GLY以及EML4-ALK基因類型中的V1中差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，分析認(rèn)為，BRCA1基因類型中的SER/GLY在基因修復(fù)中扮演重要角色，對(duì)于核苷酸的剪切修復(fù)具有重要意義，同時(shí)對(duì)于同源性重組修復(fù)具有重要意義。在非小細(xì)胞癌肺癌患者的治療中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，隨著核苷酸修復(fù)能力的升高[13]，患者對(duì)于化療藥物的耐藥作用相對(duì)較強(qiáng)，患者的耐藥程度升高。而在本研究中，BRCA1基因類型中的SER/GLY是在患者眾多肺癌基因中使患者的癌基因發(fā)生變化的重要原因，本研究結(jié)果與上述理論研究相互印證。

EML4-ALK基因也是核酸檢測(cè)中最為常見(jiàn)的突變基因，而在早期研究中，非小細(xì)胞肺癌表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)基因?yàn)橹匾脑┗颍?0%的癌癥患者的核酸檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其均可呈現(xiàn)顯著的EGFR過(guò)度表達(dá)[14]，而EGFR基因的過(guò)度表達(dá)中，選擇性使患者的EML4-ALK基因中的堿基發(fā)生替換，使患者的EML4-ALK基因出現(xiàn)顯著的抑癌基因，而在本研究中，EML4-ALK基因類型中的V1呈現(xiàn)高度表達(dá)，提示，EML4-ALK基因類型中的V1在肺小細(xì)胞癌的疾病進(jìn)展中具有積極的意義。潘麗霞等[15]對(duì)浙江省非小細(xì)胞肺癌患者的基因型進(jìn)行分析，患者的EGFR與EML4-ALK基因?qū)τ诨颊叩募膊∵M(jìn)展中具有協(xié)同作用，共同促進(jìn)患者的疾病進(jìn)展，與本研究相互印證。

綜上所述，患者的BRCA1基因類型中的SER/GLY以及EML4-ALK基因類型中的V1與非小細(xì)胞肺癌患者風(fēng)險(xiǎn)呈現(xiàn)正相關(guān)，在疾病的進(jìn)展以及早期發(fā)現(xiàn)中具有積極意義。