黃宇翔

1981年，默沙東公司研發(fā)的一代乙肝疫苗Heptavax-B通過(guò)美國(guó)食品藥品管理局（FDA）審批上市。同一時(shí)期的中國(guó)，乙肝泛濫的情況要嚴(yán)峻許多。

北京醫(yī)科大學(xué)陶其敏醫(yī)生順著Heptavax-B的思路，于1975年7月1日研制出中國(guó)第一支血源性乙肝疫苗（這一疫苗根據(jù)誕生日期被命名為“7571”）。由于經(jīng)費(fèi)短缺無(wú)法支持在黑猩猩中開(kāi)展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，1975年8月29日，陶其敏醫(yī)生挺身而出，勇敢地在自己身上注射“7571”疫苗——“7571”疫苗最終大獲成功。

但血源性疫苗價(jià)格昂貴，同時(shí)仍然有潛在的安全隱患。隨著重組蛋白革命的風(fēng)潮在20世紀(jì)70年代末興起，乙肝疫苗研究者開(kāi)始將希望寄托于分子生物學(xué)技術(shù)。與此同時(shí)，加州大學(xué)伯克利分校的蘭迪?謝克曼（Randy Schekman）教授發(fā)現(xiàn)蛋白分泌通路在單細(xì)胞生物面包酵母中高度保守。于是，在利用重組DNA技術(shù)開(kāi)發(fā)新型HBV疫苗的跑道上，默沙東公司、百健公司和法國(guó)巴斯德研究所三個(gè)團(tuán)隊(duì)展開(kāi)了激烈的角逐，最終由默沙東公司拔得頭籌，開(kāi)發(fā)的酵母重組蛋白疫苗Recombivax于1986年獲批上市。這便是第二代乙肝疫苗。

二代乙肝疫苗安全性更高，生產(chǎn)成本低廉，顯著加快了在乙肝疫苗人群中的普及速度。時(shí)任默沙東公司總裁的羅伊?瓦杰洛斯（Roy Vagelos）博士于1989年做出了一個(gè)偉大的決定，將默沙東公司的二代乙肝疫苗生產(chǎn)線(xiàn)以低廉的價(jià)格贈(zèng)送給深受乙肝折磨的中國(guó)。

在疫苗強(qiáng)大力量的加持下，從20世紀(jì)90年代開(kāi)始乙肝病毒的母嬰傳播被顯著阻斷：在短短20年的時(shí)間里，中國(guó)由母嬰傳播導(dǎo)致的乙肝病例下降了97%。

1989年9月11日，默沙東公司、中國(guó)技術(shù)進(jìn)出口公司、北京生物制品研究所和深圳康泰生物制品公司簽訂了合同

但是抗擊乙肝的戰(zhàn)役還遠(yuǎn)遠(yuǎn)沒(méi)有結(jié)束，到了2015年中國(guó)依然有8 000萬(wàn)左右的乙肝病毒感染者，其中包含2 280萬(wàn)的育齡婦女。因此，盡管乙肝疫苗非常有效，中國(guó)在2015年左右依然每年有5萬(wàn)名左右的嬰兒一出生就不幸感染了乙肝病毒。

這就促使南方醫(yī)科大學(xué)的侯金林醫(yī)生發(fā)起了“小貝殼”項(xiàng)目（Shield Project）。根據(jù)侯金林醫(yī)生的設(shè)想，通過(guò)“小貝殼”移動(dòng)應(yīng)用程序，全國(guó)的醫(yī)生可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)乙肝病毒攜帶者在懷孕期間的病毒活躍水平，從而指導(dǎo)高傳染性媽媽們?cè)趹言衅陂g服用抗病毒藥物，并且在寶寶剛出生時(shí)一邊通過(guò)被動(dòng)免疫的方式注射抗體抵御乙肝病毒，另一方面及時(shí)注射疫苗幫助寶寶盡快建立起抵御乙肝病毒的“免疫軍隊(duì)”。截至2019年2月，全中國(guó)已經(jīng)有124家醫(yī)院加入了“小貝殼”項(xiàng)目，對(duì)阻斷乙肝病毒母嬰傳播的保護(hù)率高達(dá)99.1%。

但對(duì)于目前全球范圍內(nèi)約2.6億的乙肝感染者來(lái)說(shuō)，打疫苗已為時(shí)過(guò)晚。乙肝病毒并不會(huì)立刻殺死自己的宿主細(xì)胞，但在慢性感染的狀態(tài)下，肝細(xì)胞一面承擔(dān)著高強(qiáng)度的代謝任務(wù)，一面承受著病毒寄生施加的壓力。在這種長(zhǎng)期“內(nèi)卷”的狀態(tài)下，肝功能的衰退在所難免進(jìn)而引發(fā)肝病；而在這種“養(yǎng)蠱”環(huán)境下少數(shù)發(fā)生癌變的細(xì)胞由于更加適應(yīng)惡劣的生存條件，最終的“蠱王”有可能促使肝癌發(fā)生。

幸運(yùn)的是，經(jīng)過(guò)幾代科學(xué)家的努力，盡管乙肝目前還很難被“治愈”，但在很大程度上可以得到有效控制。說(shuō)到乙肝的治療，就不得不提抗病毒治療的“絕代雙驕”—— 干擾素和核苷類(lèi)似物。

乙肝治療的絕代雙驕

在20世紀(jì)五六十年代，糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物曾被應(yīng)用于治療肝炎，但人們逐漸意識(shí)到激素類(lèi)藥物雖然在治療甲型肝炎中有一定作用，但在抗擊乙型肝炎的戰(zhàn)場(chǎng)上不僅毫無(wú)用武之地，反而對(duì)于病情有害。1981年，香港科學(xué)家林鉅津、黎青龍與法國(guó)合作者經(jīng)過(guò)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)呐R床試驗(yàn)，正式為乙肝激素療法蓋棺定論。

1957年，病毒學(xué)家亞歷克?艾薩克斯（Alick Isaacs）和林登曼（Jean Lindenmann）發(fā)現(xiàn)了一種具有抗病毒效應(yīng)的新型細(xì)胞因子，將其命名為“干擾素”。干擾素很快被視作“抗病毒的青霉素”，被人們寄予厚望。

1976年，美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院的哈利?格林伯格（Harry Greenberg）等人首次在三名病情嚴(yán)重的慢性乙肝病人中嘗試腹腔注射從人血中純化出的干擾素。持續(xù)數(shù)月的干擾素治療取得了奇效：三位患者體內(nèi)的乙肝病毒擴(kuò)增都得到了抑制，三人血清中乙肝表面抗原HBsAg水平都顯著下降，其中有兩人更是呈現(xiàn)出從“大三陽(yáng)”到“小三陽(yáng)”的血清型轉(zhuǎn)換?？上в捎诟蓴_素難以被批量生產(chǎn)，相關(guān)的臨床試驗(yàn)被暫時(shí)擱置。

20世紀(jì)80年代中期，隨著干擾素基因被克隆，將干擾素應(yīng)用于乙肝治療的興趣再次被點(diǎn)燃。

盡管?chē)?yán)重的副作用（尤其是精神類(lèi)疾病方面）始終伴隨著干擾素的使用，為期一年的干擾素注射治療能夠?qū)?0%~30%的慢性乙肝病人體內(nèi)乙肝病毒形成有效打擊。盡管由于cccDNA的存在，干擾素治療并不能完全清除體內(nèi)寄生的乙肝病毒，但經(jīng)此一劫患者體內(nèi)殘余的乙肝病毒也仿佛是被“嚇破了膽”，面對(duì)免疫系統(tǒng)的圍剿從此“杯弓蛇影”，不再能對(duì)肝器官形成實(shí)質(zhì)性的威脅。1986年6月，F(xiàn)DA批準(zhǔn)將干擾素α-2b應(yīng)用于乙肝治療。

20世紀(jì)90年代，羅氏公司的科學(xué)家通過(guò)在重組干擾素蛋白上添加聚乙二醇修飾，極大地增加了重組干擾素在體內(nèi)的穩(wěn)定性，使得干擾素注射的頻率由原先的每天一次降低到每周一次，所需的療程也由52周縮減到了24周。但由于其較強(qiáng)的副作用，干擾素療法并不適用于所有人，尤其是處在圍產(chǎn)期的孕婦。那么在上文提到的“小貝殼”項(xiàng)目中，推薦乙肝感染孕婦口服的“抗病毒藥物”究竟是什么呢？

1989年，加拿大一家名為BioChem的生物技術(shù)公司吸引了埃默里大學(xué)化學(xué)家雷蒙德?斯辛納齊（Raymond Schinazi）的注意力。

埃默里大學(xué)化學(xué)家斯辛納齊

BioChem的科學(xué)家研發(fā)了一種用于抗擊HIV病毒的新型核苷類(lèi)似物。斯辛納齊注意到BioChem這一新型的合成產(chǎn)物是包含了“左旋”分子和“右旋”分子的混合物。出于化學(xué)家的直覺(jué)，斯辛納齊猜測(cè)如果把這組對(duì)映異構(gòu)體分離開(kāi)，可能會(huì)得到更具生物學(xué)活性的化合物。他立刻與同事丹尼斯?利奧塔（Dennis Liotta）開(kāi)展合作，嘗試分別純化出BioChem公司合成的混合物中的“左旋”分子和“右旋”分子。

對(duì)于核苷類(lèi)似物，斯辛納齊心中有著深深的執(zhí)念：在尋找新型癌癥化療藥物的探索過(guò)程中，他的博后導(dǎo)師威廉?普魯索夫（William Prusoff）合成了一種名為“碘苷”（Idoxuridine，IDU）的胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物。不久之后，美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院的眼科醫(yī)生赫伯特?考夫曼（Herbert Kaufman）意外地發(fā)現(xiàn)這種失敗的抗癌藥物在治療由病毒感染導(dǎo)致的皰疹性角膜病變中效果驚人，從此核苷類(lèi)似物正式登上了抗病毒治療的舞臺(tái)。

普魯索夫的博后弟子鄭永齊（Yung-Chi Cheng）在探究核苷類(lèi)藥物抑制病毒機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，以“碘苷”為代表的胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物大顯神威的關(guān)鍵，是它們可以被病毒的胸腺嘧啶激酶誤認(rèn)作胸腺嘧啶，進(jìn)而可以作為“搗亂分子”嵌入剛剛復(fù)制一半的病毒DNA，導(dǎo)致病毒DNA復(fù)制的意外中斷。

因此，當(dāng)艾滋病在80年代 暴發(fā)之際，在研發(fā)抗擊HIV藥物的過(guò)程中，胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物被寄予厚望——這其中自然少不了斯辛納齊活躍的身影。

斯辛納齊驚喜地發(fā)現(xiàn)一種名為齊多夫定（Zidovudine，AZT）的胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物能有效抑制HIV病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶活性，但在人體中毒性較大。當(dāng)斯辛納齊還在謹(jǐn)慎地探索AZT的毒副作用時(shí)，競(jìng)爭(zhēng)者大衛(wèi)?巴里（David Barry）捷足先登，關(guān)于AZT作為抗艾藥物的申請(qǐng)于1987年3月得到FDA批準(zhǔn)，從而奪走了“第一款艾滋藥物研發(fā)者”的榮光。

斯辛納齊很不甘心，立志要臥薪嘗膽研發(fā)出比AZT更加安全有效的抗艾新藥。而被他寄予厚望的新目標(biāo)，并不是胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物，而是四種常見(jiàn)含氮堿基之外的異類(lèi)：硫代胞苷類(lèi)似物（簡(jiǎn)稱(chēng)3TC，又被稱(chēng)為拉米夫定，Lamivudine）。斯辛納齊驚喜地發(fā)現(xiàn)拉米夫定優(yōu)秀的抑制HIV病毒表現(xiàn)，最終如愿以?xún)數(shù)卦?995年將拉米夫定推向抗艾市場(chǎng)。

但與此同時(shí)，斯辛納齊的師兄鄭永齊還發(fā)現(xiàn)拉米夫定在細(xì)胞系中對(duì)于乙肝病毒的增殖也具有抑制效果，很快被推進(jìn)到臨床——拉米夫定可以口服，副作用明顯低于干擾素注射，超過(guò)50%的病人在服用后病情得到緩解。最終，拉米夫定于1998年獲得FDA批準(zhǔn)被用于慢性乙肝感染的治療。

但拉米夫定卻存在兩個(gè)巨大的缺陷：首先是耐藥性，在拉米夫定巨大的選擇壓力下，那些DNA聚合酶不會(huì)結(jié)合拉米夫定的乙肝病毒在患者體內(nèi)迅速獲得巨大的生存優(yōu)勢(shì)，進(jìn)而導(dǎo)致耐藥性的產(chǎn)生——超過(guò)半數(shù)的乙肝患者在服藥三年內(nèi)都會(huì)產(chǎn)生耐藥性；其次，拉米夫定只能抑制病毒的復(fù)制，而不能從根源上將乙肝病毒斬草除根。因此一旦停藥，蟄伏已久的乙肝病毒就會(huì)迅速卷土重來(lái)——終生的服藥需求為患者帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

一位病毒學(xué)家、一位化學(xué)家和一位創(chuàng)業(yè)者組成的“黃金鐵三角”默契配合，聯(lián)手為克服第一個(gè)問(wèn)題找到了近乎完美的解決方案。

病毒學(xué)家埃里克?德克勒克

在德國(guó)合作者弗里茨?愛(ài)克斯坦（Fritz Eckstein）的邀請(qǐng)下，比利時(shí)魯汶大學(xué)的病毒學(xué)家埃里克?德克勒克（Erik De Clercq）在1976年來(lái)到德國(guó)哥廷根參加一小群核酸化學(xué)家組織的會(huì)議。

德克勒克本來(lái)只想成為一名醫(yī)生，對(duì)于做研究并不感興趣。但就讀醫(yī)學(xué)院期間，在極富感染力的免疫學(xué)家皮特?德桑莫（Piet De Somer）再三建議下開(kāi)始嘗試科研。德桑莫在研制脊髓灰質(zhì)炎疫苗的過(guò)程中一戰(zhàn)成名，并且在干擾素被發(fā)現(xiàn)后迅速跟進(jìn)，從而將德克勒克帶入了干擾素和抗病毒的領(lǐng)域。受到關(guān)于“核酸激發(fā)干擾素分泌”發(fā)現(xiàn)的影響，默沙東公司莫里斯?希勒曼（Maurice Hilleman）在斯坦福大學(xué)托馬斯?梅里根（Thomas Merigan）實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展博后研究期間，系統(tǒng)性地研究不同類(lèi)型的寡聚核酸分子（由德國(guó)化學(xué)家弗里茨?愛(ài)克斯坦提供）刺激干擾素分泌的效果。

安東尼恩?霍利

會(huì)議中一位特殊的演講者吸引了德克勒克：來(lái)自捷克斯洛伐克有機(jī)化學(xué)和生物化學(xué)研究所的安東尼恩?霍利（Anthonin Holy）癡迷于核酸化學(xué)，但工作的重要性并沒(méi)有得到單位同事們的注意。受困于窘迫的經(jīng)費(fèi)狀況，霍利買(mǎi)不到足夠用于研究核酸成分的酶——為此他在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)毒蛇，從而能從蛇毒中純化實(shí)驗(yàn)材料。

德克勒克主動(dòng)找到霍利，為他慷慨提供所需的試劑?；衾餐短覉?bào)李，定期將自己新合成的核苷類(lèi)似物寄給德克勒克進(jìn)行抗病毒活性的測(cè)量。

不到一年的時(shí)間，兩人的合作就結(jié)出了豐碩的果實(shí)：他們發(fā)現(xiàn)核苷類(lèi)似物DHPA是一種廣譜的抗病毒化合物，從此開(kāi)啟了他們長(zhǎng)達(dá)數(shù)十年的科學(xué)合作。

隨著艾滋病的 暴發(fā)在80年代成為環(huán)球同此涼熱的公共衛(wèi)生問(wèn)題，德克勒克和霍利也加入了抗艾藥物研發(fā)的大軍。1986年，他們?cè)谙佘盏慕Y(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上合成了具有抑制HIV病毒復(fù)制功效的化合物PMEA。

可是，將一個(gè)藥物通過(guò)臨床試驗(yàn)最終推向市場(chǎng)造福大眾，是一個(gè)需要大量人力物力投入的漫長(zhǎng)過(guò)程。德克勒克和霍利都沒(méi)有這個(gè)能力。

企業(yè)家約翰?馬?。↗ohn Martin）的加入至關(guān)重要。馬丁是化學(xué)科研出身，此時(shí)在百時(shí)美施貴寶公司領(lǐng)導(dǎo)抗病毒藥物的開(kāi)發(fā)。馬丁很看好PMEA用于艾滋病治療的前景，主動(dòng)聯(lián)系了德克勒克和霍利——三人相談甚歡，大有相見(jiàn)恨晚的感覺(jué)。當(dāng)馬丁于1990年開(kāi)始掌舵初創(chuàng)的生物技術(shù)公司吉利德時(shí)，也將這項(xiàng)合作帶到了新東家。

在后續(xù)的研究中，三人所領(lǐng)導(dǎo)的團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)PMEA較強(qiáng)的腎毒性令其在抗艾藥物開(kāi)發(fā)的途中遺憾出局。但PMEA能在相對(duì)較低的劑量有效抑制乙肝病毒，使得三人組的注意力轉(zhuǎn)移到了乙肝藥物的開(kāi)發(fā)上。

1992年，霍利發(fā)現(xiàn)只需要在PMEA的支鏈上額外添加一個(gè)甲基，所得的PMPA分子也能有效抑制乙肝病毒擴(kuò)增。而PMPA還有更廣為人知的另一個(gè)名字：替諾福韋（Tenofovir）。

替諾福韋的水溶性較差，吉利德的科學(xué)家在它的側(cè)鏈添加了兩個(gè)富馬酸分子，得到水溶性更好的富馬酸替諾福韋酯（TDF）。

臨床3期結(jié)果表明，76%的“大三陽(yáng)”感染者在服用TDF后病毒復(fù)制被抑制，93%的“小三陽(yáng)”感染者服用TDF后有響應(yīng)，同時(shí)三年內(nèi)沒(méi)有觀(guān)察到一例耐藥性的產(chǎn)生。

2008年，用于慢性乙肝治療的TDF正式獲批，商品名“韋瑞德”（Viread）。

在TDF的基礎(chǔ)上，吉利德的科學(xué)家進(jìn)一步優(yōu)化了替諾福韋側(cè)鏈上的基團(tuán)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)把富馬酸替換為艾拉酰胺時(shí)，整個(gè)分子不僅在血液中更加穩(wěn)定了，而且還能被肝細(xì)胞主動(dòng)吸收，從而極大降低了需要口服的劑量——這一分子學(xué)名叫做“替諾福韋艾拉酚胺”（TAF）。

2016年，TAF的臨床3期結(jié)果公布，藥效與TDF相似，但低劑量用藥為患者們帶來(lái)了一個(gè)福音：腎毒性顯著降低了——2016年底，TAF正式獲批上市，商品名“韋立德”（Vemlidy）。

除此之外，百時(shí)美施貴寶開(kāi)發(fā)的恩替卡韋（Entecavir）、Idenix制藥公司（2014年被默沙東公司收購(gòu)）開(kāi)發(fā)的替比夫定（Telbivudine）作為可以抑制乙肝病毒逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程的核苷類(lèi)藥物紛紛加入了抗擊乙肝的戰(zhàn)斗中。

遺憾的是，盡管抗擊乙肝的武器庫(kù)中有這么多琳瑯滿(mǎn)目的藥物，我們目前還只能做到阻止乙肝病毒的復(fù)制，無(wú)法將其完全清除。絕大多數(shù)的患者肝細(xì)胞表面依然可以檢測(cè)到乙肝表明抗原HBsAg。進(jìn)一步開(kāi)發(fā)新型藥物，還需要對(duì)于乙肝病毒的特性取得更加深刻的認(rèn)識(shí)。

值得注意的是，相比于歐美國(guó)家，中國(guó)的乙肝患者數(shù)目更多，更加急切地盼望能根治乙肝病毒的新藥。隨著中國(guó)生命科學(xué)基礎(chǔ)科研水平的飛速增長(zhǎng)，中國(guó)的乙肝研究也開(kāi)始騰飛。近些年來(lái)，中國(guó)科學(xué)家在乙肝基礎(chǔ)研究領(lǐng)域做出了兩項(xiàng)創(chuàng)新性研究。

揭曉乙肝病毒侵染肝細(xì)胞的謎題

乙肝病毒是如何感染宿主細(xì)胞的？人體中有各種各樣的細(xì)胞類(lèi)型，為什么乙肝病毒偏偏選擇把感染擴(kuò)增的“基地”選擇在肝細(xì)胞？在乙肝病毒被鑒定后的將近50年時(shí)間里，這個(gè)問(wèn)題始終是一個(gè)乙肝研究的黑洞。

人們推測(cè)乙肝病毒侵染的細(xì)胞特異性來(lái)源于乙肝病毒表面抗原與人體肝細(xì)胞表面特定的“受體蛋白”的結(jié)合，但這個(gè)假想的“受體蛋白”究竟是什么卻一直是一個(gè)謎團(tuán)。這背后的一大原因在于，乙肝病毒體外研究在技術(shù)上是非常困難的。

在鑒定出“澳抗”后不久，巴魯克?布隆伯格（Baruch Blumberg）團(tuán)隊(duì)的斯科特?馬祖爾（Scott Mazzur）就試圖在體外擴(kuò)增乙肝病毒，但屢次嘗試都以失敗告終。

原來(lái)，乙肝病毒雖然在體內(nèi)詭計(jì)多端，橫行霸道，可一旦被安置在體外環(huán)境下培養(yǎng)就立刻變得非常嬌貴，只能侵染剛剛被分離出的原代肝細(xì)胞——而且同一批肝細(xì)胞分裂幾次，細(xì)胞膜表面的“受體蛋白”仿佛就神秘消失了。缺少了這個(gè)“里應(yīng)外合”的關(guān)鍵幫手，乙肝病毒面對(duì)自己欺負(fù)慣了的肝細(xì)胞一下子便無(wú)可奈何。

乙肝病毒在體外的拉胯表現(xiàn)可苦了希望深入了解乙肝病毒侵染機(jī)制的研究者們。1987年，紐約大學(xué)的喬治?阿奇（George Acs）團(tuán)隊(duì)費(fèi)盡氣力終于研制出了一種能夠讓乙肝病毒實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增的細(xì)胞系：既然乙肝病毒無(wú)法自己攻克傳代肝細(xì)胞系細(xì)胞膜構(gòu)成的“堡壘”，研究者干脆將乙肝病毒DNA轉(zhuǎn)入HepG2肝癌細(xì)胞系中。一旦進(jìn)了細(xì)胞內(nèi)部，乙肝病毒DNA就能迅速占領(lǐng)細(xì)胞核，合成出成千上萬(wàn)的病毒顆粒。鄭永齊與斯辛納齊有關(guān)拉米夫定對(duì)乙肝病毒增殖效果的研究，就是借助了阿奇團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)的這一細(xì)胞系。但這一系統(tǒng)的原理決定了它并不能幫助研究者尋找肝細(xì)胞特有的乙肝病毒受體蛋白。

北京生命科學(xué)研究所研究員李文輝

2007年，在北京生命科學(xué)研究所（NIBS）建立起獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室的李文輝，向這一科學(xué)難題發(fā)起了挑戰(zhàn)。

要想找到乙肝病毒受體，首先得有個(gè)乙肝病毒能侵染的細(xì)胞模型。2002年法國(guó)科學(xué)家通過(guò)對(duì)一份肝癌病人的凍存細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化，獲得了能被乙肝病毒穩(wěn)定侵染的肝細(xì)胞系HepaRG。因此，如果李文輝能培養(yǎng)出大量的HepaRG細(xì)胞系，就有可能從中純化出神秘的“乙肝病毒受體”?？墒牵琀epaRG細(xì)胞系的誘導(dǎo)分化過(guò)程比較麻煩，所需要的時(shí)間也比較長(zhǎng)，使用起來(lái)遠(yuǎn)不如常用的細(xì)胞系方便。那有沒(méi)有可能從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肝細(xì)胞中找到合適的模型呢？

奇怪的是，乙肝病毒仿佛就是為人體細(xì)胞“量身定制”似的，除了黑猩猩以外在其他靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中都無(wú)法引發(fā)肝炎癥狀，對(duì)于小鼠這樣的小型動(dòng)物更是鞭長(zhǎng)莫及。

中國(guó)科學(xué)家在20世紀(jì)80年代發(fā)現(xiàn)一種與靈長(zhǎng)類(lèi)親緣關(guān)系較近的小型動(dòng)物樹(shù)鼩（Tupaiabelangeri）的肝細(xì)胞能被乙肝病毒感染。盡管只會(huì)引起輕微的肝炎癥狀，但這說(shuō)明樹(shù)鼩的肝細(xì)胞表面存在乙肝病毒受體。1996年，德國(guó)的研究者在此基礎(chǔ)上更進(jìn)一步，發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的樹(shù)鼩肝細(xì)胞不會(huì)像人類(lèi)肝細(xì)胞一樣輕易失去乙肝病毒受體，能夠穩(wěn)定地被乙肝病毒侵染。因此，李文輝將希望寄托在了樹(shù)鼩肝細(xì)胞上。

同時(shí)，基于一段已知會(huì)與肝細(xì)胞表面結(jié)合的乙肝表明抗原片段，李文輝團(tuán)隊(duì)通過(guò)把其中的兩個(gè)氨基酸替換為亮氨酸類(lèi)似物（L-Photo-Leucine）將這一抗原片段改造為一個(gè)分子探針。當(dāng)受到紫外光線(xiàn)照射時(shí)，這一分子探針上的亮氨酸類(lèi)似物能與附近的蛋白質(zhì)形成共價(jià)鍵連接。李文輝團(tuán)隊(duì)將探針從樹(shù)鼩肝細(xì)胞中純化出來(lái)，通過(guò)質(zhì)譜學(xué)方法檢測(cè)探針上連接的蛋白質(zhì)，最終鑒定出了肝細(xì)胞表面被乙肝病毒“買(mǎi)通”的內(nèi)應(yīng)——鈉離子-牛磺膽酸共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（NTCP）。

在體外細(xì)胞中異源表達(dá)NTCP蛋白，就為乙肝病毒的侵染打開(kāi)了大門(mén)——從此研究者們?cè)僖膊挥脼槿鄙僖腋尾《靖腥灸Ｐ桶l(fā)愁了。

同時(shí)，研究者也將NTCP蛋白作為靶點(diǎn)，設(shè)計(jì)能抑制乙肝病毒侵染肝細(xì)胞的新型乙肝藥物。目前，由德國(guó)生物技術(shù)公司MYR（于2020年12月被吉利德以11.5億歐元的價(jià)格收購(gòu)）開(kāi)發(fā)的NTCP抑制劑Hepcludex已經(jīng)于2020年7月在歐洲被批準(zhǔn)上市，進(jìn)一步豐富了人類(lèi)抗擊乙肝的武器庫(kù)。

憑借鑒定乙肝受體蛋白NTCP的貢獻(xiàn)，李文輝博士榮獲2021年度乙肝研究領(lǐng)域的最高獎(jiǎng)項(xiàng)——巴魯克?布隆伯格獎(jiǎng)。李文輝團(tuán)隊(duì)也在積極推進(jìn)NTCP抑制劑的臨床試驗(yàn)，未來(lái)我們也許將會(huì)看到國(guó)產(chǎn)NTCP抑制劑的問(wèn)世。

外泌體：乙肝病毒侵染的秘密武器

免疫系統(tǒng)與乙肝病毒的斗爭(zhēng)是一場(chǎng)持久戰(zhàn)。在慢性乙肝病毒感染長(zhǎng)期的消耗過(guò)程中，人體的天然免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)都會(huì)陷入疲勞，無(wú)力對(duì)抗聲勢(shì)浩大的乙肝病毒。

而干擾素治療之所以有效，我們可以想象成是為人體免疫系統(tǒng)空降了一群生力軍，它們不僅能立刻投入戰(zhàn)斗，還可以動(dòng)員已經(jīng)偃旗息鼓的免疫軍隊(duì)重新振作起來(lái)。但干擾素治療并不總是所向披靡，只能給一部分病人帶來(lái)病癥上的緩解。這主要是由于乙肝病毒能夠千方百計(jì)地阻撓免疫系統(tǒng)抵抗病毒的作戰(zhàn)能力。比如復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院的袁正宏團(tuán)隊(duì)就發(fā)現(xiàn)，血液中的乙肝病毒在被巨噬細(xì)胞吞食之后，能憑借表面抗原HBsAg干擾巨噬細(xì)胞的JNK信號(hào)通路，摧毀巨噬細(xì)胞的持續(xù)作戰(zhàn)能力。再比如說(shuō)，袁正宏團(tuán)隊(duì)還發(fā)現(xiàn)，乙肝病毒的DNA聚合酶可以抑制肝細(xì)胞感受外源DNA物質(zhì)入侵的cGAS-STING通路，阻斷受感染的肝細(xì)胞向免疫系統(tǒng)發(fā)出求救信號(hào)。

復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院袁正宏教授

不過(guò)，在正面戰(zhàn)場(chǎng)受到乙肝病毒壓制的不利情況下，在肝器官的“病毒占領(lǐng)區(qū)”，還有一群令人意想不到的“敵后武裝力量”，默默地支持著對(duì)抗乙肝感染的艱苦斗爭(zhēng)，從而換來(lái)了干擾素治療30%~40%的響應(yīng)率。

袁正宏團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)，在人體的肝器官中，有1/3的細(xì)胞屬于肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞（LNPC）。LNPC沒(méi)有承擔(dān)繁重的代謝任務(wù)，表面也不表達(dá)NTCP蛋白，因此不會(huì)受到乙肝病毒猛烈進(jìn)攻。但身處病毒感染陰云籠罩的肝器官，LNPC并沒(méi)有置身事外——在干擾素的刺激下，LNPC的細(xì)胞工廠(chǎng)被動(dòng)員起來(lái)，大量合成抗病毒分子，再通過(guò)一種被稱(chēng)作“外泌體”（exosome）的囊泡將寶貴的“抗病毒補(bǔ)給物資”輸送到水深火熱的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞中。這一發(fā)現(xiàn)豐富了人們對(duì)干擾素作用機(jī)制的認(rèn)識(shí)：原來(lái)干擾素不僅能在正面戰(zhàn)場(chǎng)抗擊乙肝，還能夠深入敵后，通過(guò)將抗病毒分子包裝在外泌體中支持肝細(xì)胞的抗病毒斗爭(zhēng)。