李漢穎，李漢宇，李增祥

阿爾茨海默病(Alzheimer′s disease，AD)是一種神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，為全球范圍內(nèi)繼心臟病、腫瘤、腦卒中后第4位死亡原因，輕度認(rèn)知功能障礙(MCI)是介于正常老化和早期老年癡呆之間的一種臨床癥候群，調(diào)查顯示，每年10%～15%的MCI進(jìn)展為AD[1-3]。因此，控制MCI轉(zhuǎn)化為AD，盡早檢出AD并給予早期干預(yù)成為臨床研究的重點(diǎn)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，分揀蛋白受體1(SORL1)基因多態(tài)位點(diǎn)rs1133174與中國漢族遺忘型輕度認(rèn)知損傷風(fēng)險(xiǎn)關(guān)系密切，而遺忘型輕度認(rèn)知損傷被認(rèn)為是AD的前期病變[4-5]。此外，AD病因復(fù)雜多樣，有研究指出CD14信號傳導(dǎo)通路及其基因多態(tài)性與AD的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[6-7]?；诖?，本研究綜合分析CD14mRNA、SORL1 mRNA在AD病人中的表達(dá)及與認(rèn)知功能的關(guān)系，旨在為臨床診治AD提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取南陽市中醫(yī)院2017年8月—2019年8月AD病人62例作為AD組，MCI病人60例作為MCI組，所有入選病例均經(jīng)我院倫理委員會(huì)審批通過。兩組合并癥、性別、文化程度、空腹血糖、年齡、總膽固醇、體重、吸煙史及飲酒史比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；AD組病人病程明顯長于MCI組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 臨床前AD診斷標(biāo)準(zhǔn)：主要以生物標(biāo)記物標(biāo)準(zhǔn)為框架分為3個(gè)階段，階段1為癥狀腦淀粉樣變性，階段2為淀粉樣蛋白陽性+突出功能失調(diào)和或早期神經(jīng)變性的證據(jù)，階段3為淀粉樣蛋白陽性+神經(jīng)元退化證據(jù)+輕微認(rèn)知功能下降。AD所致輕度認(rèn)知損害診斷標(biāo)準(zhǔn)：通過詢問病人病史及知情人確認(rèn)，或醫(yī)生臨床觀察獲得認(rèn)知功能下降信息；通過測評發(fā)現(xiàn)病人認(rèn)知功能不在自身年齡及文化水平正常范圍內(nèi)，但未達(dá)到癡呆水平；臨床醫(yī)生判定記憶功能或空間、語言等其他認(rèn)知功能存在損害。AD所致癡呆診斷標(biāo)準(zhǔn)：主要通過醫(yī)生詢問病人病史及知情人確認(rèn)，以及神經(jīng)心理測驗(yàn)判斷是否存在癡呆，同時(shí)配合淀粉樣蛋白等生物標(biāo)志物進(jìn)行診斷，但生物標(biāo)志物并非必需[8]。MCI診斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)簡易智能精神狀態(tài)檢查量表(MMSE)評分，并結(jié)合病史及體格檢查由神經(jīng)內(nèi)科專業(yè)醫(yī)師進(jìn)行診斷，MMSE評定包括定向力(10分)、即刻記憶力(3分)、注意力和計(jì)算力(5分)、短時(shí)回憶力(3分)、語言和視空間結(jié)構(gòu)能力(9分)，總分0～30分，其中文盲者≤17分、小學(xué)文化者≤19分、初中以上者≤26分，即可診斷MCI，且MMSE總分越低認(rèn)知功能越差[9-10]。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) ①AD組病人符合2011年美國國家衰老研究所和阿爾茨海默病協(xié)會(huì)(NIA-AA)提出的AD診斷標(biāo)準(zhǔn)，包括AD所致癡呆標(biāo)準(zhǔn)、AD所致輕度認(rèn)知損害標(biāo)準(zhǔn)及臨床前AD標(biāo)準(zhǔn)；②MCI組符合MCI診斷標(biāo)準(zhǔn)；③無嚴(yán)重聽力、視力障礙；④影像學(xué)檢查無腦血管病變病灶；⑤病人及家屬知曉本研究并簽署知情同意書。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) ①合并血液系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤、自身免疫性疾病、傳染性疾病、急慢性感染性疾病者；②長期服用抗精神病藥物者；③重要臟器功能嚴(yán)重障礙者；④血管性癡呆、帕金森、有腦外傷史、腦出血者等。

1.5 試驗(yàn)方法及觀察指標(biāo)

1.5.1 試驗(yàn)方法 采集兩組病人入組當(dāng)天外周血，由專業(yè)檢測師采用葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法分離外周靜脈血得到單個(gè)核細(xì)胞，應(yīng)用RNA提取試劑盒(購自美國Applied Biosystem公司)提取單個(gè)核細(xì)胞RNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)測定CD14mRNA、SORL1 mRNA表達(dá)量，均嚴(yán)格按照儀器說明書操作。采用公式2-△△ct計(jì)算CD14mRNA、SORL1 mRNA相對表達(dá)量。

1.5.2 觀察指標(biāo) ①兩組外周血單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)CD14mRNA、SORL1 mRNA表達(dá)量；②分析CD14mRNA、SORL1 mRNA鑒別診斷MCI與AD的價(jià)值；③分析CD14mRNA、SORL1 mRNA與認(rèn)知功能的關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.1 兩組CD14mRNA、SORL1 mRNA比較 AD組CD14mRNA表達(dá)量較MCI組高，SORL1 mRNA表達(dá)量較MCI組低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 兩組CD14 mRNA、SORL1 mRNA比較(±s)

2.2 AD和MCI鑒別診斷影響因素的Logistic回歸分析 以AD和MCI診斷為因變量，一般資料(病程、合并高血壓、合并糖尿病)及CD14mRNA、SORL1 mRNA為自變量進(jìn)行Logistic逐步回歸分析，結(jié)果顯示，CD14mRNA、SORL1 mRNA是AD和MCI鑒別診斷的獨(dú)立影響因素。詳見表3。

表3 AD和MCI鑒別診斷影響因素的Logistic回歸分析

2.3 CD14mRNA、SORL1 mRNA對MCI與AD的鑒別診斷價(jià)值 ROC曲線分析顯示，SORL1 mRNA鑒別診斷MCI與AD的ROC曲線下面積(AUC)為0.807，大于CD14mRNA，當(dāng)截?cái)嘀禐?.30時(shí)，敏感度為87.10%，特異度為60.00%。二者聯(lián)合鑒別診斷的AUC為0.889，敏感度為75.81%，特異度為90.00%。詳見表4、圖1、圖2。

圖1 CD14 mRNA、SORL1 mRNA鑒別診斷價(jià)值的ROC曲線

圖2 CD14 mRNA聯(lián)合SORL1 mRNA鑒別診斷價(jià)值的ROC曲線

表4 CD14 mRNA、SORL1 mRNA對MCI與AD的鑒別診斷價(jià)值

2.4 兩組MMSE評分比較 AD組定向力、即刻記憶力、注意力和計(jì)算力、短時(shí)回憶力、語言和視空間結(jié)構(gòu)能力評分及MMSE總分較MCI組低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表5。

表5 兩組MMSE評分比較(±s) 單位：分

2.5 CD14mRNA與MMSE評分的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)性分析顯示，CD14mRNA與定向力、即刻記憶力、注意力和計(jì)算力、短時(shí)回憶能力評分及MMSE總分呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。詳見表6。

表6 CD14 mRNA與MMSE評分的相關(guān)性分析

2.6 SORL1 mRNA與MMSE評分的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)性分析，SORL1 mRNA與即刻記憶力、注意力和計(jì)算力、短時(shí)回憶能力、定向力評分及MMSE總分呈正相關(guān)(P<0.05)。詳見表7。

表7 SORL1 mRNA與認(rèn)知功能的相關(guān)性分析

3 討 論

AD為常見癡呆類型，發(fā)病率占全部癡呆病人的60%～80%，且隨世界人口老齡化趨勢加快逐漸增加，嚴(yán)重影響老年人身心健康和生活質(zhì)量[11-12]。AD具有發(fā)病隱匿的特點(diǎn)，早期診斷缺乏特異性指標(biāo)[13-14]。若能找到一種診斷效能較高的指標(biāo)，對病人的早期治療及預(yù)后改善具有重要意義。

AD的病因和發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前尚未明確。近年來，CD14信號傳導(dǎo)通路及其基因多態(tài)性成為AD研究熱點(diǎn)之一[15-16]。病理研究表明，CD14的表達(dá)局限于大腦皮質(zhì)的老年斑周圍，老年斑附近總是有CD14陽性小膠質(zhì)細(xì)胞存在，且疏水區(qū)域CD14陽性細(xì)胞比致密核心斑塊周圍數(shù)量更多[17-18]。王玲玲[19]針對帕金森病人開展的一項(xiàng)研究指出，帕金森病病人外周血單核細(xì)胞CD14mRNA的表達(dá)顯著增加，且與反映帕金森疾病嚴(yán)重程度的H-Y分期呈正相關(guān)，可能參與帕金森病非運(yùn)動(dòng)癥狀的發(fā)生發(fā)展過程。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AD組CD14mRNA表達(dá)量顯著高于MCI組，與銀建軍等[20]研究結(jié)果一致，且發(fā)現(xiàn)其是AD和MCI鑒別診斷的獨(dú)立影響因素，進(jìn)一步證實(shí)CD14的基因表達(dá)參與AD的發(fā)生發(fā)展，其機(jī)制可能為AD病人激活小膠質(zhì)細(xì)胞表面的CD14可促進(jìn)細(xì)胞對β淀粉樣蛋白的攝取，同時(shí)能通過調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答改變腦內(nèi)炎癥環(huán)境，從而增加AD發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，促進(jìn)AD病理進(jìn)程。SORL1為低密度脂蛋白家族成員，基因表達(dá)產(chǎn)物可與淀粉樣前體蛋白(APP)互相作用，參與APP裂解的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，有報(bào)道顯示，SORL1基因突變是AD發(fā)生的危險(xiǎn)因素，且能調(diào)節(jié)病人腦脊液中β淀粉樣蛋白42的水平變化，從而調(diào)節(jié)其誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥，影響病人神經(jīng)功能[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，AD病人SORL1 mRNA表達(dá)明顯低于MCI病人，SORL1 mRNA是對AD和MCI病人進(jìn)行鑒別診斷的獨(dú)立影響因素，表明其表達(dá)參與AD的發(fā)生發(fā)展。SORL1基因表達(dá)降低，可導(dǎo)致APP降解和β淀粉樣蛋白的產(chǎn)生增加，β淀粉樣蛋白為AD主要致病因素，從而提高AD發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，促進(jìn)AD病情進(jìn)展[22-23]。

本研究進(jìn)一步采用ROC曲線分析CD14mRNA、SORL1 mRNA鑒別診斷MCI與AD的價(jià)值，發(fā)現(xiàn)二者聯(lián)合的AUC高達(dá)0.889，高于二者單獨(dú)鑒別診斷，敏感度為75.81%，特異度為90.00%，有助于提高AD的早期診斷效能?；谏鲜鼋Y(jié)論，認(rèn)為通過抑制CD14mRNA表達(dá)、促進(jìn)SORL1 mRNA表達(dá)，可能有助于預(yù)防老年MCI病人轉(zhuǎn)化為AD，或延緩AD病人病情進(jìn)展。此外，本研究通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，AD病人定向力、即刻記憶力、注意力和計(jì)算力、短時(shí)回憶能力、MMSE總分與CD14mRNA呈負(fù)相關(guān)，與SORL1 mRNA呈正相關(guān)，通過檢測CD14及SORL1基因表達(dá)情況，有助于臨床評估AD病人病情程度，指導(dǎo)治療方案的制定。

綜上所述，CD14及SORL1基因表達(dá)異常參與AD的發(fā)生發(fā)展，可作為鑒別診斷MCI與AD的重要標(biāo)志物，同時(shí)與病人認(rèn)知功能關(guān)系密切，有助于評估病人病情，指導(dǎo)針對性治療方案的制定，利于改善病人預(yù)后。