石莉娜 婁中文 劉軍銘

摘要：隨著犯罪嫌疑人的反偵查意識及能力增強(qiáng)，接觸性檢材在現(xiàn)場提取檢材中所占比重增大，現(xiàn)場接觸性檢材DNA在案件偵破過程中發(fā)揮的作用也日漸明顯。本文闡述接觸性檢材的處理方法和DNA檢驗(yàn)的常見方法，探討影響接觸性檢材檢驗(yàn)結(jié)果的因素，意在表述接觸性檢材DNA檢驗(yàn)的價(jià)值。

近年，隨著媒體對公安工作的宣傳，刑事案件的偵查手段已經(jīng)不是秘密，犯罪分子的反偵查手段的日益狡猾，明顯的生物物證常常被有意識的銷毀和破壞，而來自人體代謝脫落細(xì)胞由于微小痕量，常被忽略。對于這些潛在的微量生物物證，一旦成功地獲得了關(guān)鍵物證的DNA分型，往往就能夠成為案件偵破的關(guān)鍵線索，并為案件定性及法庭量刑提供科學(xué)證據(jù)。

如何發(fā)現(xiàn)和采集現(xiàn)場微量檢材，準(zhǔn)確及時(shí)提取到關(guān)鍵物證，選擇合理的檢驗(yàn)方法，得到有效的STR分型，對節(jié)省警力，有效節(jié)約破案成本，為偵查部門提供強(qiáng)有力的線索有重要意義。

一、接觸類檢材的處理方法

（一）脫落細(xì)胞粘取器

1.對于金屬、塑料、橡膠效果較好。

2.不適合玻璃、木質(zhì)、大理石、磚頭等，建議采用棉簽等擦拭。

3.不適合塵土較多、油污、潮濕的接觸性檢材。

優(yōu)點(diǎn)：采集效率高、釋放效率高，對極微量的接觸類檢材提取效果好;

缺點(diǎn)：適用范圍相對有局限

（二）棉簽標(biāo)準(zhǔn)兩步法擦拭

1.適用于大多數(shù)接觸性檢材，特備是凹凸不平、灰塵較多、載體表面潮濕以及位置面積較大的接觸性檢材。

2.對于塑料、漆面等基底的樣本采集效率低于粘取器，在對現(xiàn)場載體轉(zhuǎn)移時(shí)要用半干棉簽反復(fù)擦拭。

3.直接剪取。

（1）樣本較集中的衣領(lǐng)、口罩等針織檢材，剪取的載體應(yīng)盡量小。

（2）滲透性的紙張。如紙張能看到明顯指（掌） 紋印，或用茚三酮熏顯。

（三）脫落細(xì)胞提取儀

適用于樣本分布面積較大的軟質(zhì)載體或表層疏松檢材，如衣物、棉帽、床單等，脫落細(xì)胞提取儀可以有效的對細(xì)胞進(jìn)行富集，提高檢材檢出率。

二、接觸性生物物證DNA檢驗(yàn)常見方法

1.磁珠純化法：通過細(xì)胞裂解液的使用，對細(xì)胞實(shí)施裂解，使其內(nèi)部DNA得以釋放，再添加適量磁性顆粒，將細(xì)胞內(nèi)游離態(tài)DNA分子予以吸附，而細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、血紅蛋白等雜質(zhì)無法被磁性顆粒所吸附，從而余留于細(xì)胞裂解液內(nèi)。隨后，磁場條件下，可實(shí)現(xiàn)液體、磁性顆粒間有效分離，通過對磁性顆粒的回收，加之純水、TE液的作用完成DNA洗脫和收集工作。利用磁珠純化法，具有操作簡易、回收率高、模板純凈、自動化收集的優(yōu)勢，當(dāng)前行業(yè)領(lǐng)域商品化磁珠DNA試劑提取盒和減少繁瑣手工操作的純化儀已存在，但因耗時(shí)長和成本高、耗材貴等缺陷，使之磁珠純化法應(yīng)用范圍受到局限。

2.過濾柱法：利用硅膠旋轉(zhuǎn)柱對磁性顆粒實(shí)施替換，即選擇超濾膜對其DNA分子予以截取，對其他雜質(zhì)實(shí)施過濾。目前該類型商品化試劑提取盒也存在，其操作簡便、回收率高，但其大分子污染物殘留、DNA檢出率低、過濾柱成本較高，促使法醫(yī)在針對接觸性生物物證DNA檢驗(yàn)中，應(yīng)充分結(jié)合檢材條件與資金成本，對DNA檢測法進(jìn)行合理選擇。

三、接觸性檢材法醫(yī)DNA檢驗(yàn)影響因素

1.提取時(shí)間：因表皮細(xì)胞離體后機(jī)體功能、溶酶體均會受到影響，如機(jī)體功能活性降低、溶酶體大量釋出，溶酶體通過對高分子物質(zhì)、復(fù)合物實(shí)施逐層降解，該過程屬于表皮細(xì)胞自溶現(xiàn)象。而在表皮細(xì)胞出現(xiàn)自溶后，核染色體呈現(xiàn)固縮或碎裂，使DNA得以溶解。DNA自溶、降解具有一定的規(guī)律，一般在72 小時(shí)內(nèi)自溶和降解速率影響因素較小，而超過該期限則會加快溶解速率。

2.提取環(huán)境：

（1）外界環(huán)境。接觸性檢材DNA檢驗(yàn)需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，若選擇自然環(huán)境作為DNA提取空間，則會受到光源和潮濕、高溫與灰塵、昆蟲以及細(xì)菌等因素的影響。

（2）載體環(huán)境。表面粗糙、密度低載體空間，如石塊、木塊、針織品等載體，其表皮細(xì)胞脫落DNA檢出率較高;而表層光滑、密度高載體空間，如橡膠或金屬等，DNA檢出率明顯有所降低。此外，載體污染程度也是影響DNA降解速率的主要因素。

（3）人源性污染。對于接觸性檢材而言，其DNA含量普遍偏低，若被常量DNA載體所覆蓋，如血跡或唾液等，結(jié)合STR檢驗(yàn)可有效實(shí)現(xiàn)DNA模量擴(kuò)增的目的，但會對接觸性DNA檢出率產(chǎn)生影響;若接觸性檢材多樣，則會有交叉污染問題，從而使DNA檢出分型呈混合型模式。不利于后期的認(rèn)定工作。

接觸類檢材由于接觸面積廣、DNA 含量少、易被污染，發(fā)現(xiàn)及提取難度大，為提取到有效的脫落細(xì)胞，檢驗(yàn)接觸類檢材DNA就要注意以下問題：

（一）了解案情，準(zhǔn)確分析提取接觸類檢材的重點(diǎn)部位。檢驗(yàn)前了解案情，了解物證所處案件現(xiàn)場的環(huán)境及各個(gè)物證之間的關(guān)系，分析接觸類檢材接觸部位，采取相應(yīng)的提取方法。

（二）控污染，由于接觸性檢材的DNA 含量很少，極易被污染，任何污染都有可能造成檢驗(yàn)的失敗，現(xiàn)勘人員應(yīng)第一時(shí)間保護(hù)現(xiàn)場，在采集檢材時(shí)做好自身防護(hù)。采集時(shí)使用無污染的采集產(chǎn)品，反復(fù)使用的器械在使用后要嚴(yán)格的清洗消毒，一次提取一件檢材，并注意保護(hù)采集的樣本，避免樣本間的交叉污染。

對現(xiàn)場物證接觸性DNA及時(shí)提取并在短時(shí)間內(nèi)完成送檢工作;最大限度上提高脫落細(xì)胞接觸性DNA模量;選擇個(gè)人防護(hù)或單獨(dú)包裝的形式，避免接觸性DNA發(fā)生污染;通過對接觸性DNA載體清潔度的控制，對其提取方法進(jìn)行合理選擇。

【參考文獻(xiàn)】

[1]張廣峰，陳松，凃政等。接觸DNA檢驗(yàn)成功率的影響因素探討[J]刑事技術(shù)，2013，（3）：9-13.

[2]陳松，胡蘭.低拷貝模板STR分型及其存在的問題[J].中國法醫(yī)學(xué)雜志，2003，18（5）：314-316.

[3]邵武，姜先華，李秋陽，等.衣物載體上人體脫落細(xì)胞的負(fù)壓吸附采集法[J]中國法醫(yī)學(xué)雜志，2009，24（4）：272-274.

[4]劉海渤，馮保強(qiáng)，黃穎，等.3種提取接觸性檢材脫落表皮細(xì)胞DNA方法的實(shí)驗(yàn)研究[J]昆明醫(yī)學(xué)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，（12）：36-40.

作者簡介：

石莉娜，女，1983年8月出生，碩士研究生，中級。

婁中文，男，1990年8月，大學(xué)本科，中級。

劉軍銘，男，1988年5月，碩士研究生，中級。