劉 暢,陶曉峰,戴冰冰,李 然,遲 冰,劉佳麗

(1.大連市中心醫(yī)院 風(fēng)濕免疫科,遼寧 大連116033;2.大連市中心醫(yī)院 病理科;3.大連醫(yī)科大學(xué)碩士研究生在讀)

白細(xì)胞介素-9(IL-9)在多種自身免疫病中起著重要作用，近來(lái)國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)IL-9在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)中發(fā)揮重要致炎作用[1]。本研究擬通過(guò)檢測(cè)血清學(xué)陰性RA(SNRA)患者血清和關(guān)節(jié)液IL-9水平，為SNRA的早期診斷治療和預(yù)后判斷提供依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

選取大連市中心醫(yī)院風(fēng)濕免疫科2017年1月至2019年1月就診的初治SNRA患者50例，同時(shí)選取骨關(guān)節(jié)炎(OA)患者52例、健康對(duì)照47例，收集臨床資料，留取血清，每組入選20例觀察對(duì)象留取關(guān)節(jié)液。RA診斷符合1987年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)推薦的分類標(biāo)準(zhǔn)[2]或2010年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)/歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟(EULAR)制定的RA分類標(biāo)準(zhǔn)[3]。所有患者在試驗(yàn)前1個(gè)月內(nèi)未應(yīng)用過(guò)激素或免疫抑制劑治療。對(duì)初治SNRA患者分別進(jìn)行治療后3個(gè)月、6個(gè)月隨訪，留取血清，部分留取關(guān)節(jié)液，進(jìn)行不同時(shí)間點(diǎn)的IL-9水平檢測(cè)，同時(shí)收集患者不同時(shí)間點(diǎn)的臨床資料，包括關(guān)節(jié)腫痛數(shù)目、RF、C反應(yīng)蛋白(CRP)、血沉(ESR)、疾病活動(dòng)度評(píng)分(DAS28)、肌肉骨骼超聲等資料進(jìn)行相關(guān)性分析。

1.2 方法

血清和關(guān)節(jié)液IL-9水平應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)(R&D公司)，實(shí)驗(yàn)步驟按說(shuō)明書進(jìn)行。采用7關(guān)節(jié)超聲評(píng)分法[4]，對(duì)滑膜炎和骨侵蝕程度進(jìn)行超聲等級(jí)評(píng)分。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 臨床及實(shí)驗(yàn)室特征

入選的SNRA患者共有50例，其中男12例，女38例，男女之比約為1∶3，平均年齡為47.44±9.64歲，平均病程14.00±9.09月。SNRA組與OA組、健康對(duì)照組的性別、年齡無(wú)顯著性差異(P>0.05)，SNRA組的ESR、CRP水平較OA組和健康對(duì)照組顯著升高(P<0.01)(表1)。

表1 三組受試者臨床資料和實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)的比較

2.2SNRA患者治療前的血清、關(guān)節(jié)液IL-9水平顯著高于OA組和健康對(duì)照組(P<0.001)(表2)。

表2 三組受試者血清、關(guān)節(jié)液IL-9比較

2.3SNRA患者治療后3個(gè)月、6個(gè)月疾病活動(dòng)度DAS28和超聲滑膜血流評(píng)分明顯減低，血清和關(guān)節(jié)液IL-9水平也顯著下降(P<0.001)(表3)。

表3 SNRA組患者治療前后血清、關(guān)節(jié)液IL-9水平和疾病活動(dòng)度的比較

2.4SNRA組患者血清、關(guān)節(jié)液IL-9水平與骨侵蝕的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，SNRA組患者基線期的血清、關(guān)節(jié)液IL-9水平與基線期及治療后6個(gè)月的骨侵蝕評(píng)分均呈正相關(guān)(P<0.05)(表4)。

表4 SNRA組患者基線期血清、關(guān)節(jié)液IL-9水平與骨侵蝕評(píng)分的相關(guān)性分析

3 討論

IL-9由Th9細(xì)胞分泌產(chǎn)生，Th9細(xì)胞是一種促炎細(xì)胞，IL-9通過(guò)與其相應(yīng)受體IL-9R結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，參與多種自身免疫性疾病的病理過(guò)程[5]。研究證實(shí)，Th9細(xì)胞和IL-9在過(guò)敏性疾病、寄生蟲感染、自身免疫性腸炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等疾病中均發(fā)揮重要作用[6]。

本研究發(fā)現(xiàn)，SNRA患者血清和關(guān)節(jié)液的IL-9水平均顯著高于OA組和健康對(duì)照組，提示IL-9可能參與了RA的發(fā)病過(guò)程。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎小鼠(CIA)模型的IL-9水平升高，并且伴隨STAT3的持續(xù)活化、急性相延長(zhǎng)、免疫反應(yīng)增強(qiáng)和自身免疫性關(guān)節(jié)炎[7]。近年研究發(fā)現(xiàn)，RA患者外周血中Th9細(xì)胞及IL-9的表達(dá)水平明顯高于健康對(duì)照組[8]。Ciccia等[9]證實(shí)RA患者的滑膜組織中IL-9和IL-9R表達(dá)顯著增加，并與患者滑膜炎癥浸潤(rùn)程度和異位淋巴濾泡組織有關(guān)。關(guān)于RA中IL-9升高的機(jī)制尚不明確，Th9細(xì)胞發(fā)育需要來(lái)自不同細(xì)胞因子的信號(hào)，尤其是IL-4；RA中IL-9過(guò)表達(dá)的同時(shí)伴隨著IL-4的過(guò)表達(dá)，提示適應(yīng)性免疫參與調(diào)節(jié)Th9細(xì)胞的發(fā)育，并且提示RA中免疫系統(tǒng)失調(diào)的復(fù)雜性。

本研究還發(fā)現(xiàn)，SNRA患者治療后血清、關(guān)節(jié)液的IL-9水平下降，同時(shí)伴隨疾病活動(dòng)度和超聲下滑膜炎癥的明顯改善，提示IL-9持續(xù)參與RA的疾病發(fā)展過(guò)程，IL-9減低與治療后的病情好轉(zhuǎn)相關(guān)。同時(shí)SNRA患者治療前的血清、關(guān)節(jié)液的IL-9水平與治療前、后骨侵蝕評(píng)分均呈正相關(guān)，提示基線期的IL-9水平與遠(yuǎn)期骨侵蝕發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。Khan等[10]發(fā)現(xiàn)給RA患者應(yīng)用利妥昔單抗可以顯著下調(diào)IL-9的表達(dá)，減輕炎癥，緩解疾病進(jìn)展，提示IL-9與RA炎癥程度相關(guān)。用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)處理佐劑誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(AIA)模型，通過(guò)組織學(xué)評(píng)估評(píng)價(jià)關(guān)節(jié)炎癥和軟骨損傷，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MSCs治療可以減輕AIA的關(guān)節(jié)炎癥，同時(shí)降低了AIA中的IL-9表達(dá)[11]。研究發(fā)現(xiàn)，IL-9及IL-9R參與RA中成纖維樣滑膜細(xì)胞(FLS)的增殖、促炎因子的誘導(dǎo)和金屬蛋白酶3(MMP3)的上調(diào)，這些都是血管翳形成的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。因此，IL-9/IL-9R是RA細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中的重要促炎因子[12]。

本研究證實(shí)，SNRA患者的IL-9水平升高，且與疾病活動(dòng)度相關(guān)，提示IL-9可能參與了RA的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程。SNRA患者的基線期IL-9水平與遠(yuǎn)期發(fā)生骨侵蝕相關(guān)，提示IL-9有望成為SNRA早期診斷、治療效果評(píng)定、預(yù)測(cè)骨侵蝕發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)以及判斷預(yù)后的有益指標(biāo)，并可能為RA治療提供新的治療靶點(diǎn)。