劉志遠,安屹然,康利新,張婷菊,趙 娟,潘 健*

(1.中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院 檢驗科，北京100053；2.北京世青國際學校，北京100012)

金黃色葡萄球菌(S.aureus)是醫(yī)院感染的常見病原菌之一,可引起肺炎、菌血癥、心內膜炎、創(chuàng)口感染、泌尿系統(tǒng)感染等，嚴重時可危及患者生命，在老年患者、免疫力低下及長期住院患者中多見[1]。本研究回顧了2016-2020年中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院分離金黃色葡萄球菌的臨床標本情況、抗菌藥物耐藥情況，并觀察了木犀草素對甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌作用。

1 資料與方法

1.1 菌株收集2016-2020年期間中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院分離的非重復S.aureus 254株(將7天內同一病人同一標本來源的分離株視為同一株菌)。質控菌株：金黃色葡萄球菌ATCC29213、大腸埃希菌ATCC8739。

1.3 木犀草素最小抑菌濃度(MIC)、最小殺菌濃度(MBC)隨機選擇16株MRSA菌株觀察木犀草素的抗菌活性。將木犀草素以滅菌 M-H 肉湯倍比稀釋32、16、…0.25 mg/mL 8個濃度于96孔板中，加菌液至最終菌液濃度5×105CFU/mL，放置在微量震蕩儀震蕩3 min,35℃過夜培養(yǎng)。能抑制細菌生長的最低濃度為MIC;每孔取菌液，劃線法接種于血平板，無細菌生長的最小濃度即為藥物MBC。

1.4 聯(lián)合藥敏試驗將不同濃度的木犀草素和不同抗菌藥物(慶大霉素、左氧氟沙星、頭孢西丁)分別按棋盤法設計，兩兩組合加入 96 孔平板中，加菌液至最終菌液濃度5×105CFU/mL，35℃過夜培養(yǎng)，觀察結果。記錄單獨應用兩藥的最低抑菌濃度MIC A和MIC B，并選擇最佳組合效應時兩藥聯(lián)合時各自的 MIC A+B，計算部分抑菌濃度指數(shù)(FICI),FICI=MIC A藥聯(lián)用/MIC A藥單用+MIC B藥聯(lián)用/MIC B藥單用。FICI≤0.5，協(xié)同作用；0.52，拮抗作用。

2 結果

2.1 不同標本來源金黃色葡萄球菌分離情況近5年S.aureus主要分離自痰、膿液、傷口分泌物等標本，見表1。

表1 金黃色葡萄球菌樣本類型分布

2.2 2016-2020年金黃色葡萄球菌耐藥率2016-2019年MRSA陽性率呈上升趨勢，2020年則出現(xiàn)明顯下降。除紅霉素外，2020年其他抗菌藥物的耐藥率也有不同程度下降，見表2。

表2 2016-2020年金黃色葡萄球菌耐藥率

2.3 木犀草素微量稀釋法藥敏結果ATCC29213最小抑菌濃度為0.25 mg/mL，16株臨床分離S.aureus中，15株菌的木犀草素的最小抑菌濃度為0.25 mg/mL，1株為0.5 mg/mL。木犀草素對16株MRSA的最小殺菌濃度2株為0.5 mg/mL，6株為1 mg/mL,8株為2 mg/mL。

2.4 聯(lián)合藥敏試驗隨機選擇了3株MRSA菌株，進行木犀草素和左氧氟沙星、木犀草素和慶大霉素、木犀草素和頭孢西丁的聯(lián)合藥敏試驗，木犀草素和左氧氟沙星、慶大霉素為無關作用，木犀草素和頭孢西丁為相加作用(表3)。

表3 聯(lián)合藥敏試驗結果

3 討論

S.aureus是臨床常見的病原菌之一，可引起多種感染。由于傳統(tǒng)的微生物標本送檢習慣，痰標本仍然是送檢最多的標本，所以S.aureus以分離自痰標本居多[1-2]，本院情況類似，2016-2020年 S.aureus分離自痰液居多，其次是膿液、傷口分泌物。隨著院感防控意識、抗菌藥物規(guī)范使用意識的提高，標本送檢結構逐步改進，傷口分泌物中的S.aureus所占比重逐年提高，中國細菌耐藥監(jiān)測研究2017-2018年的數(shù)據(jù)中，分泌物標本已經(jīng)成為S.aureus的主要來源，其次是血液和痰液[3]。

隨著抗生素的大量使用，導致S.aureus的耐藥性升高，尤其是 MRSA 的出現(xiàn)，對臨床的抗感染治療帶來挑戰(zhàn)。但近年來我國抗菌藥物管理日益嚴格，臨床使用抗菌藥物趨于規(guī)范，MRSA陽性率出現(xiàn)了下降的趨勢[4]。我院MRSA分離情況2016-2019年呈上升趨勢，2019年達到最高34.8%，2020年下降到22.7%(表2)，與CHINET中國細菌耐藥監(jiān)測數(shù)據(jù)MRSA下降的趨勢一致。2020年S.aureus對其他抗生素如慶大霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、復方新諾明、克林霉素、四環(huán)素的耐藥率也明顯下降。

近幾年來，隨著細菌耐藥問題日益嚴峻，研究者開始探索可能替代或補充抗菌藥物的一些制劑或方法，如抗生物膜活性的制劑生物表面活劑、磁性納米顆粒、細菌素、組蛋白及一些天然藥物成分等[5-6]。木犀草素是野菊花的有效成分之一，具有抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗菌、抗氧化等多種藥理活性[7]。本研究通過微量肉湯稀釋法也觀察到木犀草素對臨床分離MRSA菌株具有良好的抗菌作用，16株MRSA除1株MIC為0.5 mg/mL外，其他15株MIC 均為0.25 mg/mL，最小殺菌濃度在0.5-2 mg/mL之間。同時本研究中聯(lián)合藥敏試驗結果提示木犀草素與慶大霉素、左氧氟沙星、頭孢西丁均沒有協(xié)同作用，其中與前兩者表現(xiàn)為無關作用，僅與頭孢西丁表現(xiàn)為相加作用。

綜上所述，隨著抗菌藥物管理、使用的規(guī)范，S.aureus耐藥率呈現(xiàn)下降趨勢，在耐藥性控制方面取得了一定的成效，提示加強細菌耐藥性監(jiān)測，結合醫(yī)院感染預防控制措施，對控制耐藥細菌的流行播散是行之有效的[4]。木犀草素對S.aureus的體外抗菌活性，直接證實了野菊花通過煎湯外洗或制膏外涂治療疔瘡癰腫的可行性、有效性。未來包括植物性藥物在內的抗菌藥物替代性療法在解決細菌耐藥問題上可能發(fā)揮重要作用。