姜燕平 荀延萍 傅佳儀
超聲引導(dǎo)下進行細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢查(fine needle aspiration,F(xiàn)NA),為當(dāng)前鑒別甲狀腺結(jié)節(jié)最常用手段,具有準(zhǔn)確性高、微創(chuàng)以及易操作等優(yōu)點,但依然存在10%~40%的甲狀腺結(jié)節(jié)難以經(jīng)FNA 明確診斷[1]。BRAF V600E基因突變?yōu)槟壳皥蟮雷疃嗟囊环N甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)突變類型。以往研究指出,BRAF V600E基因突變檢測能夠輔助細(xì)胞學(xué)診斷[2]。本文以98 個甲狀腺結(jié)節(jié)FNA樣本為實驗對象,探討甲狀腺結(jié)節(jié)FNA樣本檢測BRAF V600E基因突變在良惡性定性診斷中的應(yīng)用價值,以期為提高甲狀腺結(jié)節(jié)診斷準(zhǔn)確性提供有效途徑應(yīng)用依據(jù)?,F(xiàn)報道如下。
1.1 一般資料 選取2015 年1 月—2020 年2 月浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬杭州市第一人民醫(yī)院接受FNC檢測的甲狀腺結(jié)節(jié)患者98 例,其中男29 例,女69例,年齡25~72(46.83±8.65)歲,結(jié)節(jié)直徑0.7~2.6(1.09±0.20)cm。
1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):(1)單個結(jié)節(jié);(2)有FNA 指征[3]:①經(jīng)過超聲檢查發(fā)現(xiàn)可疑惡性征象:病灶形態(tài)不規(guī)則,且其縱橫比值超過1,邊界顯示不清,中央型血流,呈現(xiàn)極低回聲以及微鈣化;②病灶最大徑超過0.5cm;③未合并全身器質(zhì)性疾病或者出血性疾病等;(3)資料完整;(4)對研究知情,簽署研究知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并精神疾??;(2)伴凝血功能障礙;(3)具有其他腫瘤病史;(4)合并嚴(yán)重冠心病、高血壓或者糖尿病等。
2.1 FNA 檢查方法 FNA 前采取常規(guī)超聲檢查方式確定目標(biāo);對于手術(shù)治療者,予以常規(guī)病理檢查。
超聲引導(dǎo)下FNA:指導(dǎo)患者處于仰臥位(穿刺體位),適當(dāng)墊高頸部,保持頭適當(dāng)后仰,充分暴露頸部,常規(guī)探查甲狀腺結(jié)節(jié)部位并定位于頸部體表,常規(guī)消毒、鋪巾后,采取常規(guī)超聲技術(shù)確定進針部位、具體角度與深度。手握探頭的同時,適當(dāng)固定加壓,且以另一手持針進針,注意穿刺路線與超聲探頭表面長軸之間30°~40°。順利進入目標(biāo)后,在超聲引導(dǎo)下用穿刺針分3 次穿入腫塊內(nèi),并做到快速拔針,取出血性液體少許,仔細(xì)把針內(nèi)容物推至相應(yīng)玻片上涂片,并將其快速固定好,肉眼觀察,判斷所取標(biāo)本是否足夠,確認(rèn)無誤后予以細(xì)胞學(xué)病理檢測。
細(xì)胞學(xué)病理診斷結(jié)果包括:(1)穿刺樣本量較少;(2)考慮屬于良性病變;(3)無法明確意義的病變;(4)診斷為嗜酸性腫瘤病變或濾泡性腫瘤病變;(5)可疑惡性腫瘤病變;(6)惡性腫瘤病變。其中(1)~(4)評估為細(xì)胞學(xué)陰性,(5)~(6)評估為細(xì)胞學(xué)陽性。BRAF V600E基因突變檢測:選擇福建廈門艾德人類BRAF基因V600E 突變檢測試劑盒,采用熒光聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)法。引物序列如下:正義引物序列為5'-TCATAATGCTTGCTCTGATAGGA-3';反義引物序列為5'-GGCCAAAAATTTAATCAGTGGA-3',引物序列的設(shè)計、合成由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司負(fù)責(zé)。DNA抽提采用福建廈門艾德核酸提取試劑盒(型號:FFPE DNA),進行PCR 擴增后,可以將檢測結(jié)果分為兩種:野生型(未發(fā)現(xiàn)擴增信號,見圖1)以及突變型(發(fā)現(xiàn)擴增信號,見圖2)。
圖1 野生型樣本擴增曲線圖
圖2 突變型樣本擴增曲線圖
2.2 觀察指標(biāo) 以明確細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果或常規(guī)病理診斷為“金標(biāo)準(zhǔn)”,觀察BRAF V600E基因突變檢測鑒別甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性敏感度、特異度及準(zhǔn)確性。敏感度=真陽性例數(shù)/(真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%;特異度=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù))×100%;準(zhǔn)確性=(真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù))/總例數(shù)×100%;陽性預(yù)測值=真陽性例數(shù)/檢出的總陽性例數(shù)×100%;陰性預(yù)測值=真陰性例數(shù)/檢出的總陰性例數(shù)×100%。觀察常規(guī)病理學(xué)診斷情況,分析BRAF V600E基因突變與PTC 臨床特征關(guān)系。
2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0 軟件進行數(shù)據(jù)分析,計數(shù)資料以(%)表示,使用χ2檢驗;計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t 檢驗,P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義;采用Kappa 檢驗法進行一致性分析,中等一致性:Kappa 值范圍為0.41~0.60,高度一致性:Kappa 值范圍為0.61~0.80,幾乎完全一致:Kappa值超過0.80。
3.1 細(xì)胞學(xué)檢查與常規(guī)病理結(jié)果 明確細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果或常規(guī)病理診斷顯示78 個PTC,20 個良性結(jié)節(jié)89.74%(70/78);PTC 顯示BRAF V600E基因突變型10.26%(8/78),顯示野生型。
3.2 BRAF V600E基因突變檢測與金標(biāo)準(zhǔn)對照結(jié)果BRAF V600E基因突變檢測診斷敏感度89.74%(70/78),特異度100.00%(20/20),準(zhǔn)確性91.84%(90/98),陽性預(yù)測值100.00%(70/70),陰性預(yù)測值71.43%(20/28),Kappa 值0.78。見表1。
表1 BRAF V600E基因突變檢測與金標(biāo)準(zhǔn)對照(例)
3.3 常規(guī)病理學(xué)診斷分析 細(xì)胞學(xué)病理檢查無法明確結(jié)節(jié)8 個,經(jīng)過手術(shù)常規(guī)病理檢查,證實為4 例PTC(其中1 例為野生型,3 例突變型)與4 例良性結(jié)節(jié)(均為野生型)。
3.4 BRAF V600E基因突變與PTC 臨床特征關(guān)系38 例PTC 予以手術(shù)治療,并行常規(guī)病理檢查(均顯示PTC),其中30 例為BRAF V600E基因突變型,8 例野生型。突變型與野生型PTC 患者性別、年齡、甲狀腺包膜侵犯率、中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率、橋本甲狀腺炎發(fā)生率、腫瘤最大徑比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。
表2 BRAF V600E基因突變與PTC 臨床特征關(guān)系
FNA 診斷范圍受到細(xì)胞學(xué)形態(tài)限制,無法全面了解病變類型,故其檢查結(jié)果依然存在一定不確定性。對于某些細(xì)胞學(xué)無法確診甲狀腺結(jié)節(jié),一般惡性可能性為5%~10%,甚至可達50%~75%[4]。
研究表明,甲狀腺癌BRAF基因相關(guān)突變位點里面,BRAF V600E 位點發(fā)生突變?yōu)楫?dāng)前最常見的一種變異表達形式,在各種BRAF 突變中,其比例高達95%[5]。BRAF V600E基因突變主要出現(xiàn)于經(jīng)典型PTC,在濾泡癌以及髓樣癌中較為罕見,且在甲狀腺良性結(jié)節(jié)檢測中未發(fā)現(xiàn)這種突變,故臨床普遍PTC最常見,具有較高特異性的一種基因異常為BRAF基因突變[6-7]。文獻報道,甲狀腺結(jié)節(jié)FNA樣本測定患者BRAF V600E基因突變情況,是術(shù)前PTC 特異性非常高的診斷手段[8]。本研究結(jié)果顯示,BRAF V600E基因突變檢測方式診斷甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性敏感度89.74%,特異度100.00%,準(zhǔn)確性91.84%,Kappa 值高達0.78,與上述報道觀點相符。說明BRAF V600E基因突變檢測具有較高診斷準(zhǔn)確性,與病理診斷幾乎完全一致。對于FNA 中病理意義不明確甲狀腺結(jié)節(jié),若經(jīng)BRAF V600E基因檢測顯示為突變型,則更益于PTC 診斷[9]。當(dāng)前,以BRAF V600E基因突變情況和PTC 侵襲性關(guān)系為主要研究內(nèi)容的報道結(jié)果爭議較大。相關(guān)研究表明,BRAF V600E基因突變可預(yù)測PTC 存在侵襲性,包括腫瘤更高分期、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及包膜侵犯等[10]。然而,亦有研究顯示,BRAF V600E基因突變的發(fā)生和PTC 侵襲性之間沒有顯著相關(guān)性[11]。相關(guān)研究指出,相較于BRAF V600E基因野生型PTC,突變型PTC 患者甲狀腺包膜侵犯出現(xiàn)率更高,但是在頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率方面不存在顯著差異[12]。本研究中,突變型與野生型PTC 患者甲狀腺包膜侵犯率、中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率以及橋本甲狀腺炎發(fā)生率比較無顯著差異,BRAF V600E基因突變檢測并不能預(yù)測PTC 患者甲狀腺包膜侵犯以及中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況,與上述報道結(jié)果并不完全一致。可能與本次研究樣本量較少,具有一定局限性有關(guān)。
綜上所述,F(xiàn)NA樣本檢測BRAF V600E基因突變對于診斷甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性具有重要價值,然而其不能預(yù)測PTC 甲狀腺包膜侵犯或者中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。