郭洪偉， 劉一涵， 田云剛， 王建霞， 李思迪,2， 姚福宏， 魏 華,2*

(1.吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，湖南 吉首 416000；2.國(guó)家中藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心土家醫(yī)藥分中心，湖南 吉首 416000；3.湘西宏成制藥有限責(zé)任公司，湖南 吉首 416000)

復(fù)方桐葉燒傷油是湘西土家族姚氏家族所研制的秘方藥, 是國(guó)家中藥三類新藥[1]，有清熱解毒、消腫止痛、祛腐生肌之效，用于治療面積小于29%的Ⅱ度燒燙傷，能改善燒燙傷后出現(xiàn)的疼痛、腫脹、滲液等狀況，加快傷口愈合時(shí)間，降低傷口感染及其他并發(fā)癥的發(fā)生率，在臨床應(yīng)用中越來(lái)越廣泛。復(fù)方桐葉燒傷油的主要原料為白花泡桐葉和湘產(chǎn)芝麻油。

白花泡桐Paulowniafortunei(Seem.) Hemsl.為玄參科泡桐屬植物，別名泡桐、大果泡桐、華桐，主要分布于我國(guó)南方地區(qū)[2]。白花泡桐是我國(guó)重要綠化樹(shù)種之一[3]，同時(shí)還是湘西民間常用中藥。白花泡桐主要成分包括黃酮類、三萜類及精油類成分[4]。湘產(chǎn)芝麻油作為復(fù)方桐葉燒傷油的油狀基質(zhì)，具有保濕作用，可減少創(chuàng)面的滲液，降低創(chuàng)面感染的發(fā)生率。其含有木脂素類成分和維生素E等，具有殺菌抗炎、擴(kuò)張末梢血管，改善血液循環(huán)等功效[5]。目前復(fù)方桐葉燒傷油已有文章報(bào)道其臨床應(yīng)用[6-8]。對(duì)復(fù)方桐葉燒傷油及其原料的脂溶性成分進(jìn)行分析，比較復(fù)方桐葉燒傷油及其主要原料的成分，并考察不同提取方法對(duì)白花泡桐葉脂溶性成分提取的影響，以期為白花泡桐原料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)，并為復(fù)方桐葉燒傷油的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 試劑與藥物 白花泡桐葉、湘西產(chǎn)芝麻油、復(fù)方桐葉燒傷油(湘西宏成制藥有限責(zé)任公司)。正己烷、石油醚、甲醇(分析純，天津富宇精細(xì)化工有限公司)；無(wú)水硫酸鈉、濃硫酸(天津科密歐化工有限公司)；純凈水(華潤(rùn)怡寶飲料有限公司)。C7-C40正構(gòu)烷混合對(duì)照品(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)。

1.2 儀器 GCMS-QP2010(日本島津公司)；LE204E型電子分析天平(萬(wàn)分之一，瑞士梅特勒-托利多公司)；萬(wàn)家尋WJX-800A型多功能粉碎機(jī)(上海緣沃工貿(mào)有限公司)；R-210型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi公司)；佳祥KDM型調(diào)溫電熱套(山東鄄城華魯電熱儀器有限公司)；昆山KQ2200E型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；DZKW-D-6型電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司)。

2 方法

2.1 超聲輔助提取法 稱取桐葉20 g，粉碎，置于500 mL錐形瓶中，加入石油醚200 mL，置于超聲波提取器中，以功率6 kW、溫度50 ℃、頻率40 kHz提取40 min，結(jié)束后抽濾收集溶液，減壓濃縮，即得。

2.2 索氏提取法 稱取桐葉20 g，粉碎，用濾紙包好，置于索氏提取器的提取管中，提取管上端連接冷凝管，并用一團(tuán)脫脂棉輕輕塞入冷凝管上口，提取管下部連接抽提瓶，抽提瓶中加入200 mL石油醚，并置于恒溫水浴鍋中，在80～90 ℃下提取，使每小時(shí)虹吸6～8次，抽提時(shí)間為6 h，結(jié)束后收集溶液，減壓濃縮，即得。

2.3 甲酯化方法 取油樣100 mg于50 mL錐形瓶中，用適量正己烷將油樣溶解，加入10 mL 1%硫酸甲醇溶液,于70 ℃水浴加熱回流60 min后, 加入正己烷10 mL, 并加蒸餾水適量, 取上清液, 再用5 mL正己烷洗滌1次, 合并上清液, 加入無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，即得超聲提取樣品T1、索氏提取樣品T2、湘產(chǎn)芝麻油T3、復(fù)方桐葉燒傷油T4。

2.4 分析條件 SH-Rtx-5MS氣相色譜柱(30.0 m×0.25 mm, 0.25 μm)；載氣高純氦氣(純度>99.99%)；載氣體積流量1.0 mL/min；進(jìn)樣口溫度250 ℃，接口溫度250 ℃；初始溫度120 ℃，恒溫2 min，以8 ℃/min速率升至240 ℃，恒溫10 min，以10 ℃/min速率升溫至280 ℃，恒溫20 min；進(jìn)樣量1.0 μL。離子源為EI源；電離能為70 eV；質(zhì)量掃描范圍m/z50～550；離子源溫度230 ℃。

2.6 定性定量分析 各樣品經(jīng)GC-MS分析后，通過(guò)NIST14質(zhì)譜圖庫(kù)進(jìn)行自動(dòng)檢索，然后將測(cè)定的保留指數(shù)并與NIST官網(wǎng)(https://webbook.nist.gov/chemistry/name-ser/)保留指數(shù)進(jìn)行對(duì)比(誤差不超過(guò)3%)，最佳鑒定結(jié)果以質(zhì)譜相似度及保留指數(shù) RI 值接近度最高的化學(xué)結(jié)構(gòu)為準(zhǔn)。色譜峰面積歸一化法計(jì)算各成分的相對(duì)百分含有量。

3 結(jié)果與討論

GC-MS總離子流圖見(jiàn)圖1，其結(jié)果采用Nist14譜庫(kù)檢索后，與NIST官網(wǎng)(https://webbook.nist.gov/chemistry/name-ser/)中的保留指數(shù)進(jìn)行對(duì)比來(lái)加以定性,面積歸一化法計(jì)算各成分含量,結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1 各樣品總離子流圖

表1為超聲輔助提取法T1、索氏提取法T2、湘產(chǎn)芝麻油T3、復(fù)方桐葉燒傷油T4分析結(jié)果，從表中可知超聲提取法中共鑒定了28個(gè)組分，占總樣品的89.67%；索氏提取法中共鑒定44個(gè)組分占總樣品的98.22%；湘產(chǎn)芝麻油中共鑒定了12個(gè)組分，占總樣品的99.34%；復(fù)方桐葉燒傷油中鑒定了24個(gè)組分，占總樣品的98.91%。白花泡桐葉脂溶性成分含量從高到低依次為亞麻酸(兩種方法平均含量為18.4%)、棕櫚酸(13.2%)、亞油酸(8.84%)、角烯鯊(7.6%)、三十三烷(5.8%)、α-生育酚(4.8%)、2-甲基三十烷(4.73%)、硬脂酸(2.41%)等。在2種提取脂溶性成分方法中，索氏提取法提取的成分更多，更全面。在酸類、醇類和其他類的相對(duì)含量中T2>T1，而烷烴類、烯烴類和酚類的相對(duì)含量中T1>T2。新植二烯、十六烯、十二烷基四氫吡喃醚等5種成分只在超聲提取法中檢測(cè)得到，鄰苯二甲酸二丁酯、二十烷、植物醇等22種組分只在索氏提取法中檢測(cè)得到。在同時(shí)檢測(cè)得到的物質(zhì)中索氏提取法所提取的百分含量略大于超聲提取法，這可能是提取時(shí)間長(zhǎng)的原因。

表1 復(fù)方桐葉燒傷油及其原料中揮發(fā)性、脂溶性成分

湘產(chǎn)芝麻油作為復(fù)方桐葉燒傷油的藥物基質(zhì)，可以使傷口保持一定的油性環(huán)境，有利于壞死細(xì)胞的脫落和新細(xì)胞的生長(zhǎng)，從而促進(jìn)傷口的快速愈合；能抑制感染屬性菌的生長(zhǎng)，降低傷口感染及并發(fā)癥的發(fā)生率[1]。根據(jù)GC-MS的分析結(jié)果可知，芝麻油中主要成分為亞油酸、油酸、棕櫚酸、硬脂酸、β-谷甾醇、芝麻素。亞油酸據(jù)報(bào)道對(duì)維持表皮動(dòng)態(tài)平衡和角質(zhì)層滲透屏障起著重要作用[9]，此外外用富含亞油酸-神經(jīng)酰胺的保濕劑可以減輕卡泊三醇誘導(dǎo)的特應(yīng)性皮炎小鼠模型皮膚炎癥，修護(hù)皮膚屏障[10]。因此，亞油酸在復(fù)方桐葉燒傷油治療燒傷過(guò)程中有著修復(fù)皮膚的作用。何曉梅等[11]運(yùn)用濾紙片-抑菌圈法測(cè)定芝麻素的抗菌活性，發(fā)現(xiàn)芝麻素對(duì)蠟狀芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌均有不同程度的抑制作用。通過(guò)GC-MS對(duì)復(fù)方桐葉燒傷油脂溶性成分分析，顯示其主要含有亞油酸、油酸、棕櫚酸、β-谷甾醇、芝麻素、α-生育酚、角烯鯊等活性成分。對(duì)比復(fù)方桐葉燒傷油及其原料成分可以得知，主要成分基本來(lái)自于原料成分，α-生育酚、角鯊烯來(lái)自于白花泡桐葉，β-谷甾醇、油酸、芝麻素來(lái)自于芝麻油。α-生育酚是公認(rèn)的抗氧化劑，可提高人體內(nèi)超氧化物歧化酶 (SOD) 的活性, 促進(jìn)受損組織細(xì)胞的修復(fù)和創(chuàng)面愈合[12]，而且在燒傷、凍傷、毛細(xì)血管出血、美容等方面也有著良好的效果[13]。β-谷甾醇在抗氧化、抗血脂、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等方面表現(xiàn)出良好的藥理作用[14]。角鯊烯能幫助皮膚抵抗由于紫外照射和其它氧化反應(yīng)導(dǎo)致的損傷除此之外還有潤(rùn)膚、保濕等功效[15]。由此可知，在復(fù)方桐葉燒傷油中，來(lái)自芝麻油的油酸、芝麻素、β-谷甾醇與來(lái)自白花泡桐葉的角鯊烯、α-生育酚等成分存在使得創(chuàng)面能去腐生肌并快速愈合。

4 結(jié)論

在本實(shí)驗(yàn)中，采用GC-MS結(jié)合保留指數(shù)對(duì)復(fù)方桐葉燒傷油及其原料脂溶性成分分析，并用面積歸一法計(jì)算各組分相對(duì)含量，確定了復(fù)方桐葉燒傷油的主要成分為亞油酸、油酸、棕櫚酸、β-谷甾醇、芝麻素、α-生育酚、角鯊烯等所代表的組分，其中油酸、β-谷甾醇、芝麻素來(lái)自芝麻油，α-生育酚、角鯊烯來(lái)自與白花泡桐葉。在不同方法提取白花泡桐葉脂溶性成分中，索氏提取法所提取的組分更全面，本研究結(jié)果可為白花泡桐原料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)，并為復(fù)方桐葉燒傷油的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供一定的理論依據(jù)。

續(xù)表1