劉 艷， 孫逢恬， 姜海冰， 潘 娟， 管 偉， 楊炳友*， 匡海學(xué)*

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150040；2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院天然藥物生物活性物質(zhì)與功能重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100050)

假酸漿果是茄科植物假酸漿屬假酸漿Nicandraphysaloides(L.) Gaertn.的干燥果實(shí)?！吨兴幵~典》中記載，我國南方和北方地區(qū)都將假酸漿全株(包括果實(shí)和種子部分)作為藥用，其性甘、酸，味微苦、平，具有祛痰、鎮(zhèn)靜、清熱解毒等功效，常用于治療風(fēng)濕痛、狂犬病、精神病、癲癇、鼻淵、感冒、尿道感染以及瘡癤等。現(xiàn)代研究表明，假酸漿具有殺蟲、抗腫瘤、抗氧化、抗菌、利尿、降糖等藥理作用，對(duì)假酸果化學(xué)成分的研究主要包括甾體、類黃酮、生物堿和脂肪酸[1]。為了豐富對(duì)假酸漿果化學(xué)成分的認(rèn)知，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探索了其化學(xué)成分，最終得到了27個(gè)化合物，均為首次從該植物中分離得到，并采用LPS誘導(dǎo)RAW264.7炎癥細(xì)胞模型評(píng)價(jià)其抗炎活性。

1 材料

Waters 2695-2996型分析HPLC、Delta 600-2487型制備HPLC、Acquity Ultra Performance液質(zhì)儀(美國Waters公司)；Bruker-400超導(dǎo)核磁共振光譜儀(瑞士Bruker公司)；SunFire分析型色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm，美國Waters公司)；SunFire半制備型色譜柱(10 mm×250 mm，5 μm；美國Waters公司)；SunFire制備型色譜柱(19 mm×250 mm，10 μm，美國Waters公司)；硅膠(80～100、200～300目，青島海洋化工廠)；ODS-7515-12A柱色譜用反相ODS(日本YMC公司)；AB-8大孔吸附樹脂(滄州寶恩吸附樹脂科技有限公司)。

ELx 800酶標(biāo)儀(美國BioTek公司)；BT25S型電子分析天平(德國Sartorius公司)；150i型二氧化碳培養(yǎng)箱(美國Thermo公司)；Vert-A1型熒光倒置顯微鏡(德國Carl Zeiss公司)；TDL-4型低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。RAW264.7細(xì)胞系(武漢大學(xué)細(xì)胞保藏中心)。胎牛血清(杭州四季青天杭生物科技有限公司)；DMEM(美國Corning公司)；10 000 U/mL青霉素/鏈霉素(美國Corning公司)；胰蛋白酶細(xì)胞消化液(英國Leagene公司)；DMSO(德國Vetec公司)；Lipopolsaccharide(Biosharp公司)；甲基四唑藍(lán)(MTT，Biotopped公司)；無水對(duì)氨基苯磺酸(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)；N-α-萘乙二胺(天津市傲然精細(xì)化工研究所)；85%濃磷酸(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；醋酸地塞米松(天津天藥藥業(yè)股份有限公司)。96孔板(美國Corning公司)。

假酸漿果采收自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物園，于通風(fēng)處放置陰干，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥用植物教研室樊銳鋒鑒定為茄科假酸漿屬植物假酸漿NicandraPhysaloides(L.) Gaertn.的果實(shí)，標(biāo)本(編號(hào)2014007)保存于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)教研室。

2 提取與分離

干燥粉碎的去籽假酸漿果(20 kg)用70%乙醇回流提取3次，每次2 h，減壓回收溶劑，得提取物2.34 kg。將提取物與水混懸均勻，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱處理，依次用10%、30%、95%乙醇洗脫，收集各組分洗脫液，回收溶劑，得10%乙醇洗脫組分914.0 g、30%乙醇洗脫組分452.6 g、70%乙醇洗脫組分306.7 g。

95%乙醇組分(150 g)通過硅膠柱，用二氯甲烷-甲醇(100∶1～0∶1行梯度洗脫，所得到的洗脫液反復(fù)經(jīng)過TLC分析鑒別后合并，最終得到Fr.1～9共9個(gè)流分。Fr.1經(jīng)過硅膠二氯甲烷-甲醇(8∶2～0∶1)、Sephadex LH-20分離得化合物20(10 mg)、23(5 mg)；Fr.2經(jīng)過硅膠二氯甲烷-甲醇(8∶2～0∶1)、Sephadex LH-20分離得化合物1(8 mg)、15(7 mg)、16(5 mg)、18(7 mg)、27(6 mg)；Fr.3經(jīng)過硅膠二氯甲烷-甲醇(7∶3～0∶1)，Sephadex LH-20分離得化合物2(13 mg)、3(10 mg)、17(9 mg)、22(7 mg)、26(6 mg)；Fr.5經(jīng)過ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制備型HPLC分離得化合物25(6 mg)；Fr.6經(jīng)過ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制備型HPLC分離得化合物6(11 mg)；Fr.7經(jīng)過ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制備型HPLC分離得化合物5(10 mg)；Fr.8經(jīng)過ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制備型HPLC分離得化合物4(11 mg)。

30%乙醇組分(100 g)經(jīng)反相ODS柱，水-甲醇(1∶9～0∶1)系統(tǒng)梯度洗脫，所得到的洗脫液反復(fù)經(jīng)過TLC分析鑒別后合并，最終得到Fr.1～5共5個(gè)流分。Fr.1經(jīng)過ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制備型HPLC分離得化合物7(15 mg)、11(12 mg)；Fr.2經(jīng)過ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制備型HPLC分離得化合物8(9 mg)、13(19 mg)；Fr.3經(jīng)過ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制備型HPLC分離得化合物9(10 mg)、10(14 mg)、14(13 mg)；Fr.4經(jīng)過ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制備型HPLC分離得化合物12(13 mg)、24(4 mg)。

10%乙醇組分(100 g)經(jīng)反相ODS柱，水-甲醇(1∶0～0∶1)梯度洗脫，所得到的洗脫液反復(fù)經(jīng)過TLC分析鑒別后合并，最終得到Fr.1～6共6個(gè)流分。Fr.1經(jīng)過ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制備型HPLC分離得化合物21(4 mg)；Fr.5經(jīng)過ODS柱水-甲醇(2∶8～0∶1)和制備型HPLC分離得化合物19(7 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：不定形粉末(甲醇)，分子式C10H10O4，ESI-MSm/z：195.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：3.75(3H，s，COOCH3)，6.25(1H，d，J=15.9 Hz，H-7)，6.77(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，6.94(1H，dd，J=2.0，8.2 Hz，H-6)，7.04(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，7.54(1H，d，J=15.9 Hz，H-8)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：127.7(C-1)，115.1(C-2)，147.0(C-3)，149.6(C-4)，116.5(C-5)，122.9(C-6)，147.0(C-7)，114.9(C-8)，52.0(-OCH3)，169.8(-COOH)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[2]報(bào)道基本一致，故鑒定為咖啡酸甲酯。

化合物2：不定形粉末(甲醇)，分子式C20H20O7，ESI-MSm/z：373.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.98(1H，d，J=1.9 Hz，H-3′)，6.94(1H，d，J=1.9 Hz，H-3)，6.87(1H，dd，J=8.0，1.9 Hz，H-5′)，6.85(1H，dd，J=8.0，1.9 Hz，H-5)，6.82(1H，d，J=8.0 Hz，H-6′)，6.80(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，5.38(1H，d，J=3.9 Hz，H-7′)，5.22(1H，d，J=3.9 Hz，H-7)，4.30(1H，m，H-9α)，4.03(1H，m，H-9β)，3.87(3H，s，2′-OCH3)，3.86(3H，s，2-OCH3)，3.67(1H，m，H-8′)，3.36(1H，d，J=3.9 Hz，H-8)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：147.5(C-1)，149.2(C-2)，110.6(C-3)，132.4(C-4)，119.5(C-5)，116.2(C-6)，85.1(C-7)，51.0(C-8)，179.7(C-9)，148.2(C-1′)，149.4(C-2′)，110.7(C-3′)，133.2(C-4′)，119.8(C-5′)，116.4(C-6′)，87.2(C-7′)，54.5(C-8′)，73.8(C-9′)，56.4(2-OCH3)，56.5(2′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報(bào)道基本一致，故鑒定為巴拉諾酚B。

化合物3：不定形粉末(甲醇)，分子式C18H22O9，ESI-MSm/z：383.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.69(1H，d，J=15.9 Hz，H-3′)，7.20(1H，s，H-5′)，7.04(1H，d，J=8.2 Hz，H-9′)，6.76(1H，d，J=8.2 Hz，H-8′)，6.45(1H，d，J=15.9 Hz，H-2′)，4.82(1H，dd，J=3.1，2.5 Hz，H-4)，4.22～4.31(2H，m，H-3，5)，3.86(3H，s，6′-OCH3)，3.74(3H，s，7-OCH3)，2.00～2.23(4H，m，H-2，6)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：78.6(C-1)，38.4(C-2)，65.8(C-3)，76.4(C-4)，69.0(C-5)，42.2(C-6)，175.7(C-7)，168.9(C-1′)，111.8(C-2′)，147.1(C-3′)，127.9(C-4′)，115.7(C-5′)，150.6(C-6′)，149.4(C-7′)，116.5(C-8′)，124.1(C-9′)，52.9(-OCH3-7)，56.5(-OCH3-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道基本一致，故鑒定為4-O-阿魏酸-奎尼酸甲酯。

化合物4：不定形粉末(甲醇)，分子式C32H42O14，ESI-MSm/z：651.3[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.61(1H，d，J=15.9 Hz，H-7?)，7.14(1H，d，J=1.6 Hz，H-2?)，7.00(1H，dd，J=8.2，1.6 Hz，H-6?)，6.79(1H，d，J=8.2 Hz，H-5?)，6.76(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，6.68(1H，d，J=1.6 Hz，H-2)，6.61(1H，dd，J=8.2，1.6 Hz，H-6)，6.38(1H，d，J=15.9 Hz，H-8?)，5.17(1H，d，J=1.9 Hz，H-1″)，4.50(1H，dd，J=11.9，2.3 Hz，H-6′)，4.33(1H，d，J=7.9 Hz，H-1′)，4.00(1H，dd，J=9.1，2.8 Hz，H-5″)，3.91(1H，dd，J=3.5，1.8 Hz，H-2″)，3.85(3H，s，3?-OCH3)，3.78(1H，m，H-7)，3.74(3H，s，4-OCH3)，3.71(1H，d，J=3.3 Hz，H-3″)，3.70(1H，d，J=3.4 Hz，H-5′)，2.79(2H，t，J=7.5 Hz，H-8)，1.24(3H，d，J=6.2 Hz，H-6″)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：132.7(C-1)，112.8(C-2)，147.5(C-3)，147.1(C-4)，117.0(C-5)，121.2(C-6)，72.3(C-α)，36.7(C-β)，56.5(-OMe)，104.4(C-1′)，75.4(C-2′)，84.1(C-3′)，70.6(C-4′)，75.7(C-5′)，64.7(C-6′)，102.8(C-1″)，72.4(C-2″)，72.4(C-3″)，74.0(C-4″)，70.1(C-5″)，17.9(C-6″)，127.7(C-1?)，111.7(C-2?)，149.4(C-3?)，150.6(C-4?)，116.5(C-5?)，124.3(C-6?)，115.3(C-α′)，147.3(C-β′)，169.1(C-γ′)，56.4(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道基本一致，故鑒定為異地黃苷。

化合物5：不定形粉末(甲醇)，分子式C27H36O13，ESI-MSm/z：569.2[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.08(1H，d，J=1.8 Hz，H-2)，7.11(1H，d，J=8.9 Hz，H-5)，6.91(1H，dd，J=8.9，1.8 Hz，H-6)，4.94(1H，d，J=5.3 Hz，H-7)，4.23(1H，m，H-8)，3.55(1H，dd，J=12.0，3.0 Hz，Ha-9)，3.89(1H，m，Hb-9)，6.72(2H，s，H-2′，6′)，6.55(1H，d，J=15.9 Hz，H-7′)，6.31(1H，dt，J=11.6，5.6 Hz，H-8′)，4.85(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，4.22(2H，dd，J=5.6，1.4 Hz，H-9′)，3.84(3H，s，3-OCH3)，3.81(6H，s，3′，5′-OCH3)，3.88(1H，m，Ha-6″)，3.68(1H，m，Hb-6″)，3.45～3.51(4H，m，H-2″，3″，4″，5″)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：137.6(C-1)，112.5(C-2)，150.5(C-3)，147.3(C-4)，117.7(C-5)，120.8(C-6)，73.8(C-7)，87.3(C-8)，62.5(C-9)，134.8(C-1′)，105.0(C-2′)，154.6(C-3′)，136.4(C-4′)，154.6(C-5′)，105.0(C-6′)，131.4(C-7′)，129.9(C-8′)，63.6(C-9′)，56.7(-OCH3-3)，56.7(-OCH3-3′)，56.7(-OCH3-5′)，103.0(C-1″)，74.8(C-2″)，78.4(C-3″)，71.4(C-4″)，77.9(C-5″)，63.6(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道基本一致，故鑒定為7α-柑橘B。

化合物6：不定形粉末(甲醇)，分子式C27H36O13，ESI-MSm/z：569.2[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.07(1H，d，J=1.9 Hz，H-2)，7.12(1H，d，J=8.9 Hz，H-5)，6.92(1H，dd，J=8.9，1.9 Hz，H-6)，4.94(1H，d，J=5.3 Hz，H-7)，4.23(1H，m，H-8)，3.56(1H，dd，J=12.0，3.5 Hz，Ha-9)，3.89(1H，m，Hb-9)，6.72(2H，s，H-2′，6′)，6.53(1H，d，J=15.8 Hz，H-7′)，6.31(1H，dt，J=11.0，5.0 Hz，H-8′)，4.86(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，4.22(2H，dd，J=5.7，1.2 Hz，H-9′)，3.84(3H，s，3-OCH3)，3.78(6H，s，3′，5′-OCH3)，3.88(1H，m，Ha-6″)，3.68(1H，m，Hb-6″)，3.43～3.52(4H，m，H-2″，3″，4″，5″)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：137.6(C-1)，112.5(C-2)，150.5(C-3)，147.2(C-4)，117.7(C-5)，120.8(C-6)，74.9(C-7)，87.3(C-8)，61.5(C-9)，134.8(C-1′)，105.0(C-2′)，154.6(C-3′)，136.4(C-4′)，154.6(C-5′)，105.0(C-6′)，131.4(C-7′)，129.9(C-8′)，63.6(C-9′)，56.7(3-OCH3)，56.7(3′-OCH3)，56.7(5′-OCH3)，103.0(C-1″)，74.8(C-2″)，78.2(C-3″)，71.4(C-4″)，77.8(C-5″)，62.5(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道基本一致，故鑒定為7β-柑橘B。

化合物7：不定形粉末(甲醇)，分子式C26H28O13，ESI-MSm/z：549.2[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：8.12(1H，s，H-2)，7.38(2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，6′)，6.84(2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′)，6.76(1H，d，J=1.9 Hz，H-8)，6.58(1H，d，J=1.9 Hz，H-6)，3.89(1H，d，J=2.4 Hz，Api-H-2)，3.56(1H，s，Api-H-5)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：154.7(C-2)，124.5(C-3)，182.6(C-4)，163.4(C-5)，101.8(C-6)，164.7(C-7)，96.1(C-8)，158.6(C-9)，108.3(C-10)，123.2(C-1′)，131.4(C-2′)，116.3(C-3′)，158.9(C-4′)，116.3(C-5′)，131.4(C-6′)，102.3(C-1″)，74.8(C-2″)，78.0(C-3″)，71.7(C-4″)，77.2(C-5″)，69.0(C-6″)，111.1(C-1?)，78.2(C-2?)，80.5(C-3?)，75.0(C-4?)，65.6(C-5?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致，故鑒定為金雀異黃素7-O-β-D-阿哌呋喃磺酰基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物10：不定形粉末(甲醇)，分子式C21H20O12，ESI-MSm/z：465.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.20(1H，d，J=1.5 Hz，H-6)，6.39(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，7.86(1H，d，J=1.4 Hz，H-2′)，6.87(1H，d，J=8.1 Hz，H-5′)，7.55(1H，dd，J=1.5，8.1 Hz，H-6′)，5.21(1H，d，J=8.1 Hz，H-1″)；13C-NMR(100 MHz, CD3OD)δ：158.3(C-2)，135.7(C-3)，179.4(C-4)，162.8(C-5)，100.0(C-6)，165.9(C-7)，94.9(C-8)，159.0(C-9)，105.7(C-10)，123.3(C-1′)，116.2(C-2′)，145.8(C-3′)，149.8(C-4′)，117.8(C-5′)，123.0(C-6′)，104.6(C-1″)，75.8(C-2″)，78.1(C-3″)，71.2(C-4″)，78.3(C-5″)，62.6(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，故鑒定為異槲皮素。

化合物11：不定形粉末(甲醇)，分子式C27H30O16，ESI-MSm/z：611.2[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.87(1H，d，J=2. 1 Hz，H-2′)，7.60(1H，dd，J=8.5，2.1 Hz，H-6′)，6.98(1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，6.41(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.10(1H，d，J=7.6 Hz，Glc-H-1)，4.52(1H，d，J=1.2 Hz，Rha-H-1)，1.19(3H，d，J=6.2 Hz，Rha-H-6)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：158.5(C-2)，135.9(C-3)，179.5(C-4)，162.9(C-5)，100.0(C-6)，166.2(C-7)，94.9(C-8)，158.9(C-9)，105.6(C-10)，123.1(C-1′)，117.7(C-2′)，145.8(C-3′)，149.8(C-4′)，116.1(C-5′)，123.6(C-6′)，106.0(C-1″)，73.1(C-2″)，75.1(C-3″)，70.2(C-4″)，75.7(C-5″)，67.3(C-6″)，101.9(C-1?)，72.1(C-2?)，72.3(C-3?)，73.9(C-4?)，69.7(C-5?)，18.0(C-6?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，故鑒定為槲皮素3-O-(6″-O-α-鼠李糖-β-半乳吡喃糖苷)。

化合物12：不定形粉末(甲醇)，分子式C21H20O10，ESI-MSm/z：433.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：4.90(1H，d，J=9.6 Hz，Glc-H-1″)，6.45(1H，s，H-8)，6.50(1H，s，H-3)，6.88(1H，d，J=8.7 Hz，H-5′)，7.33(2H，m，H-6′，H-2′)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：166.2(C-2)，105.2(C-3)，184.0(C-4)，162.0(C-5)，109.1(C-6)，164.9(C-7)，95.3(C-8)，158.7(C-9)，103.9(C-10)，123.5(C-1′)，117.0(C-2′)，147.0(C-3′)，151.0(C-4′)，114.2(C-5′)，120.4(C-6′)，75.3(C-1″)，71.8(C-2″)，80.1(C-3″)，72.6(C-4″)，82.6(C-5″)，62.9(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，故鑒定為異葒草苷。

化合物13：不定形粉末(甲醇)，分子式C21H20O11，ESI-MSm/z：449.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.54(1H，s，H-3)，6.49(1H，s，H-6)，7.39(1H，brs，H-2′)，6.89(1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，7.37(1H，d，J=8.0 Hz，H-6′)，4.90(1H，d，J=10.1 Hz，H-1″)，4.15(1H，t-like，J=8.0 Hz，H-2″)，3.48(1H，t-like，J=8.8 Hz，H-3″)，3.50(1H，t-like，J=8. 8 Hz，H-4″)，3.42(1H，d，J=4.4 Hz，H-5″)，3.89(1H，d，J=8.0 Hz，H-6″)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：166.3(C-2)，103.9(C-3)，184.0(C-4)，158.8(C-5)，95.3(C-6)，165.3(C-7)，109.3(C-8)，162.0(C-9)，105.1(C-10)，123.6(C-1′)，114.2(C-2′)，147.1(C-3′)，151.1(C-4′)，116.8(C-5′)，120.3(C-6′)，75.3(C-1″)，72.6(C-2″)，80.2(C-3″)，71.8(C-4″)，82.6(C-5″)，62.8(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，故鑒定為5,7,3′,4′-四羥基-8-C-β-D-葡萄糖黃酮碳苷。

化合物14：不定形粉末(甲醇)，分子式C23H24O10，ESI-MSm/z：461.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.38(1H，d，J=8.6 Hz，H-5)，6.62(1H，dd，J=8.6，1.9 Hz，H-6)，6.73(1H，d，J=1.9 Hz，H-8)，5.1(1H，d，J=7.4 Hz，H-1″)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：168.6(C-2)，114.0(C-3)，176.3(C-4)，132.4(C-5)，111.4(C-6)，158.2(C-7)，102.6(C-8)，163.5(C-9)，112.7(C-10)，86.2(C-11)，39.2(C-12)，127.9(C-1′)，131.9(C-2′)，115.8(C-3′)，157.3(C-4′)，115.8(C-5′)，131.9(C-6′)，102.2(C-1″)，74.7(C-2″)，78.7(C-3″)，71.5(C-4″)，78.4(C-5″)，62.7(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道基本一致，故鑒定為小茴香素葡萄糖。

化合物15：不定形粉末(甲醇)，分子式C9H8N2O3，ESI-MSm/z：193.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.76(1H，s，H-2)，7.10(1H，s，H-5)，6.19(1H，d，J=9.4 Hz，H-7)，7.85(1H，d，J=9.4 Hz，H-8)，3.90(3H，s，3-OCH3)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：104.0(C-2)，147.3(C-3)，109.9(C-5)，164.2(C-6)，112.3(C-7)，146.2(C-8)，151.6(C-9)，153.6(C-10)，56.8(3-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致，故鑒定為木黃酮。

化合物16：不定形粉末(甲醇)，分子式C13H14N2O2，ESI-MSm/z：231.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：4.72(1H，d，J=6.2 Hz，H-1)，4.01(1H，dd，J=4.5，12.0 Hz，H-3)，3.04(1H，m，H-4)，7.48(1H，d，J=7.7 Hz，H-5)，7.05(1H，t，J=7.2 Hz，H-6)，7.14(1H，t，J=7.2 Hz，H-7)，7.34(1H，d，J=7.7 Hz，H-8)，3.45(1H，dd，J=4.5，15.9 Hz，H-4a)，1.75(3H，d，J=6.2 Hz，10-CH3)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：51.2(C-1)，59.5(C-3)，24.3(C-4)，107.7(C-4a)，127.5(C-4b)，119.2(C-5)，120.6(C-6)，123.4(C-7)，112.3(C-8)，138.6(C-8a)，131.3(C-9a)，17.2(C-10)，173.5(C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，故鑒定為1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸。

化合物17：不定形粉末(甲醇)，分子式C20H27NO11，ESI-MSm/z：458.2[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：5.88(1H，s，H-2)，7．44(3H，m，H-5，6，7)，7．60(2H，m，H-4，8)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：135.1(C-1)，129.3(C-2)，130.1(C-3)，131.0(C-4)，130.1(C-5)，129.3(C-6)，70.3(C-7)，118.8(C-8)，103.0(C-1′)，74.8(C-2′)，78.0(C-3′)，71.7(C-4′)，77.9(C-5′)，70.0(C-6′)，105.0(C-1″)，75.3(C-2″)，77.8(C-3″)，71.5(C-4″)，77.7(C-5″)，62.8(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道基本一致，故鑒定為苦杏仁苷。

化合物18：不定形粉末(甲醇)，分子式C14H16N2O3，ESI-MSm/z：261.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.06(1H，s，H-2)，7.09(1H，dd，J=8.1，1.0 Hz，H-6)，7.3(1H，d，J=8.1 Hz，H-7)，4.71(1H，dd，J=7.8，5.9 Hz，H-11)，3.27(1H，dd，J=14.6，3.7 Hz，H-10a)，3.14(1H，dd，J=14.6，7.8 Hz，H-10b)，3.64(3H，s，H-CH3O)，1.90(3H，s，H-AC)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：124.4(C-2)，110.8(C-3)，119.1(C-4)，119.8(C-5)，122.5(C-6)，112.3(C-7)，128.8(C-8)，138.1(C-9)，28.5(C-10)，55.0(C-11)，174.1(C-12)，52.7(C-OCH3)，173.2(C-Ac-1)，22.4(C-Ac-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道基本一致，故鑒定為N-乙酰色氨酸甲酯。

化合物19：不定形粉末(甲醇)，分子式C14H14N2O2，ESI-MSm/z：243.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.79(1H，brd，J=8.6 Hz，H-11)，7.12(1H，d，J=8.6 Hz，H-12)，6.79(1H，brs，H-9)，4.97(1H，t-like，J=7.4 Hz，H-3)，3.02～3.10(1H，m，H-5a)，4.37～4.42(1H，m，H-5b)，2.71～2.80(2H，m，H-6)，2.62～2.66(1H，m，H-15b)，2.57～2.60(1H，m，H-14b)，2.40～2.46(1H，m，H-15a)，1.87～1.93(1H，m，H-14a)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：135.6(C-2)，56.4(C-3)，38.9(C-5)，22.0(C-6)，107.0(C-7)，128.8(C-8)，103.4(C-9)，151.5(C-10)，112.2(C-11)，112.5(C-12)，133.0(C-13)，26.8(C-14)，32.6(C-15)，176.0(C-16)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道基本一致，故鑒定為沙棘酰胺。

化合物20：不定形粉末(甲醇)，分子式C15H22O3，ESI-MSm/z：251.2[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.97(1H，d，J=9.8 Hz，H-1)，6.20(1H，d，J=9.8 Hz，H-2)，3.01(1H，d，J=14.4 Hz，H-6α)，2.54(1H，d，J=14.4 Hz，H-6β)，2.09(1H，ddd，J=14.0，14.0，4.7 Hz，H-8β)，1.90(3H，s，H-15)，1.73(1H，m，H-9)，1.66(1H，m，H-8)，1.64(1H，m，H-9)，1.29(6H，s，H-12，H-13)，1.24(3H，s，H-14)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：159.7(C-1)，126.5(C-2)，188.5(C-3)，132.4(C-4)，162.7(C-5)，34.2(C-6)，75.9(C-7)，26.9(C-8)，34.4(C-9)，41.6(C-10)，80.0(C-11)，24.8(C-12)，25.0(C-13)，23.5(C-14)，10.8(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報(bào)道基本一致，故鑒定為canusesnol A。

化合物21：不定形粉末(甲醇)，分子式C12H22O12，ESI-MSm/z：359.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：5.10(1H，d，J=3.7 Hz，H-1)，4.47(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：94.0(C-1)，73.0(C-2)，76.3(C-3)，78.0(C-4)，78.1(C-5)，62.9(C-6)，98.2(C-1′)，73.9(C-2′)，74.9(C-3′)，71.8(C-4′)，71.9(C-5′)，62.8(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報(bào)道基本一致，故鑒定為麥芽糖。

化合物22：不定形粉末(甲醇)，分子式C10H16O6，ESI-MSm/z：233.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：4.21(2H，d，J=7.1 Hz，H-2′)，3.65(6H，s，H-6，7)，2.94(2H，d，J=15.3 Hz，H-2a，4a)，2.79(2H，d，J=15.3 Hz，H-2b，4b)，1.27(3H，d，J=7.1 Hz，H-3′)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：171.8(C-1)，44.3(C-2)，74.6(C-3)，44.3(C-4)，171.8(C-5)，52.4(C-6)，52.4(C-7)，174.6(C-1′)，63.0(C-2′)，14.4(C-3′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]報(bào)道基本一致，故鑒定為3-羧乙基-3-羥基戊二酸1,5-二甲酯。

化合物23：不定形粉末(甲醇)，分子式C29H38O6，ESI-MSm/z：505.3[M+Na]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：5.79(1H，dd，J=10.2，2.4 Hz，H-2)，6.68(1H，J=10.2，5.0，2.4 Hz，H-3)，3.22(1H，d，J=3.9 Hz，H-6)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：205.9(C-1)，129.3(C-2)，142.7(C-3)，38.2(C-4)，74.5(C-5)，57.8(C-6)，55.9(C-7)，40.1(C-8)，33.2(C-9)，53.2(C-10)，25.6(C-11)，30.6(C-12)，138.0(C-13)，137.3(C-14)，125.5(C-15)，126.8(C-16)，143.1(C-17)，129.6(C-18)，14.7(C-19)，45.3(C-20)，18.3(C-21)，72.2(C-22)，40.4(C-23)，74.4(C-24)，77.9(C-25)，97.9(C-26)，21.7(C-27)，24.4(C-28)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]報(bào)道基本一致，故鑒定為withahisolide G。

化合物24：不定形粉末(甲醇)，分子式C34H48O10，ESI-MSm/z：639.3[M+Na]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：5.84(1H，dd，J=10.0，2.0 Hz，H-2)，6.92(1H，ddd，J=2.1，4.8，10.0 Hz，H-3)，5.77(1H，d，J=5.0 Hz，H-6)，4.62(1H，d，J=11.2 Hz，H-27a)，4.50(1H，dt，J=3.3，13.2 Hz，H-22)，4.45(1H，d，J=11.2 Hz，H-27b)，4.32(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.80(1H，dd，J=5.8，8.4 Hz，H-7)，3.36(1H，m，H-4)，2.92(1H，dd，J=4.6，21.6 Hz，H-4)，2.56(1H，m，H-23)，2.20(1H，dd，J=3.3，18.3 Hz，H-23)，2.12(3H，s，H-28)，1.22(3H，s，H-19)，1.04(1H，d，J=6.6 Hz，H-21)，0.77(3H，s，H-18)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：205.7(C-1)，127.6(C-2)，147.7(C-3)，34.4(C-4)，141.6(C-5)，128.4(C-6)，64.8(C-7)，36.4(C-8)，40.5(C-9)，51.0(C-10)，24.6(C-11)，40.8(C-12)，43.6(C-13)，53.2(C-14)，25.0(C-15)，28.2(C-16)，52.2(C-17)，12.3(C-18)，18.8(C-19)，39.5(C-20)，13.8(C-21)，80.2(C-22)，30.8(C-23)，160.4(C-24)，123.6(C-25)，168.6(C-26)，63.6(C-27)，20.8(C-28)，104.0(C-1′)，75.0(C-2′)，78.0(C-3′)，71.6(C-4′)，78.0(C-5′)，62.8(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]報(bào)道基本一致，故鑒定為daturataturin A。

化合物25：不定形粉末(甲醇)，分子式C28H38O7，ESI-MSm/z：509.3[M+Na]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：5.73(1H，dd，J=10.2，2.4 Hz，H-2)，6.63(1H，ddd，J=10.2，5.1，2.4 Hz，H-3)，3.01(1H，d，J=3.8 Hz，H-6)，3.95(1H，brs，H-12)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：206.0(C-1)，129.5(C-2)，142.4(C-3)，38.0(C-4)，74.9(C-5)，57.3(C-6)，57.1(C-7)，37.4(C-8)，29.9(C-9)，52.2(C-10)，30.6(C-11)，73.8(C-12)，48.1(C-13)，45.0(C-14)，24.1(C-15)，28.0(C-16)，44.9(C-17)，12.9(C-18)，15.2(C-19)，40.7(C-20)，12.2(C-21)，80.2(C-22)，30.6(C-23)，160.0(C-24)，126.5(C-25)，168.6(C-26)，57.1(C-27)，20.1(C-28)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]報(bào)道基本一致，故鑒定為withastramonolide。

化合物26：不定形粉末(甲醇)，分子式C18H19NO4，ESI-MSm/z：314.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：2.73(2H，t，J=7.4 Hz，H-2)，6.72(2H，d，J=8.2 Hz，H-5，H-7)，6.78(1H，d，J=8.2 Hz，H-8′)，6.98(1H，d，J=l.5 Hz，H-5′)，6.99(1H，dd，J=8.2，1.5 Hz，H-9′)，7.03(2H，d，J=8.4 Hz，H-4，H-8)，7.43(1H，d，J=15.6 Hz，H-3′)，7.43(1H，d，J=15.6 Hz，H-2′)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：42.6(C-1)，35.8(C-2)，131.4(C-3)，130.8(C-4)，116.4(C-5)，157.0(C-6)，116.3(C-7)，130.8(C-8)，169.2(C-1′)，118.2(C-2′)，142.0(C-3′)，128.3(C-4′)，111.6(C-5′)，149.3(C-6′)，149.8(C-7′)，116.5(C-8′)， 123.3(C-9′)，56.4(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]報(bào)道基本一致，故鑒定為阿魏酰酪胺。

化合物27：不定形粉末(甲醇)，分子式C17H17NO3，ESI-MSm/z：284.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.05(1H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，6.71(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)，2.74(2H，t，J=7.5 Hz，H-7)，3.45(2H，t，J=7.5 Hz，H-8)，7.39(2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，6′)，6.78(2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′)，7.44(1H，d，J=15.7 Hz，H-7′)，6.38(1H，d，J=15.7 Hz，H-8′)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：131.4(C-1)，130.8(C-2)，116.3(C-3)，157.0(C-4)，116.3(C-5)，130.8(C-6)，35.9(C-7)，42.6(C-8)，127.8(C-1′)，130.6(C-2′)，116.8(C-3′)，160.6(C-4′)，116.8(C-5′)，130.6(C-6′)，141.8(C-7′)，118.6(C-8′)，169.3(C-9′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25]報(bào)道基本一致，故鑒定為N-(E)-p-coumaroyltyramine。

4 抗炎活性評(píng)價(jià)

參照文獻(xiàn)[26]，檢測化合物1～27對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7炎癥細(xì)胞NO生成的影響。除空白組外，其余各組加入100 μL含2 μg/mL LPS的DMEM培養(yǎng)基，37 ℃、5%CO2孵育24 h后，空白組和LPS模型組加入100 μL DMEM培養(yǎng)基，其他各組加入100 μL含不同質(zhì)量濃度(5、25、50、100、200 μg/mL)藥物的DMEM培養(yǎng)基，地塞米松(Dexamethasone，DXM)作為陽性藥，37 ℃、5%CO2孵育2 h。培養(yǎng)結(jié)束后，取上清100 μL轉(zhuǎn)至干凈96孔板中，加入Griess試劑A液、B液各50 μL，避光顯色30 min，用酶標(biāo)儀測各孔540 nm波長處光密度(OD)值，重復(fù)3次，計(jì)算IC50值，見表1。結(jié)果表明，化合物1、3～4、6～11、13～15、18、20、22～27對(duì)NO的抑制作用較明顯。

表1 各化合物對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7炎癥細(xì)胞中NO生成的影響

5 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)假酸漿果乙醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行研究，并利用LPS誘導(dǎo)的RAW264.7炎癥細(xì)胞模型評(píng)價(jià)各化合物的抗炎活性，以上結(jié)果豐富了對(duì)假酸漿果化學(xué)成分的認(rèn)知，可為其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)闡明及藥用開發(fā)與資源利用提供依據(jù)。