羅暉明，聶平，丁野，程雪清，余彬彬

1.湖南省藥品檢驗(yàn)研究院（湖南藥用輔料檢驗(yàn)檢測中心），湖南 長沙 410001；2.湖南省藥品質(zhì)量評價工程技術(shù)研究中心，湖南 長沙 410001；3.天地恒一制藥股份有限公司，湖南 長沙 410331

炎可寧丸處方由黃柏、黃連、黃芩、大黃、板藍(lán)根五味組成，可清熱瀉火，消炎止痢，常用于急性扁桃體炎、急性尿道感染等［1］。炎可寧丸上市后因療效顯著，被廣大醫(yī)務(wù)工作者和病人認(rèn)可，產(chǎn)品銷售規(guī)模逐年提高?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)YBZ1229592005-2009Z［1］包括大黃的顯微特征鑒別，黃連、黃柏的化學(xué)反應(yīng)鑒別，大黃的薄層色譜鑒別，以及黃芩苷的含量測定。對于薄層色譜鑒別，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)工作手冊（第四版）明確要求，盡可能采取一個供試液多項(xiàng)多維鑒別使用［2］，以達(dá)到保護(hù)環(huán)境、節(jié)約資源、簡便實(shí)用的目的。本研究重點(diǎn)針對這一要求，盡量共用供試液制備方法，對炎可寧丸處方各味藥進(jìn)行TLC法鑒別研究，助力該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑

分析天平（瑞士METTLER，AE240型）；烘箱（德國BINDER，F(xiàn)ED 240型）；超聲儀（寧波新芝，SB-12DTD型，600 W，40 KHz）；硅膠G板（德國Merck，10 cm×20 cm）；試劑均為分析純（南京化學(xué)試劑股份有限公司）；純化水。

1.2 材料

炎可寧丸（某企業(yè)，批號170501，180703，190102，規(guī)格：每袋裝3 g）；陰性樣品分別按炎可寧丸處方自行制備；對照品：鹽酸黃柏堿（批號111895-201805，純度94.9%）、鹽酸小檗堿（批號110713-202015，純度85.9%）、鹽酸巴馬汀（批號110732-201913，純度85.7%）、大黃酸（批號110757-201607，純度99.3%）、黃芩苷（批號110715-201821，純度94.2%）、靛玉紅（批號110717-201805，純度99.6%）；對照藥材：黃連（批號121752-201801）、大黃（批號120902-201912）、黃芩（批號120955-201810），以上對照物質(zhì)全部購于中國食品藥品檢定研究院。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃柏的TLC鑒別［3-6］

取4.5 g炎可寧丸，研細(xì)，加甲醇20 mL，超聲30 min，濾過，取濾液10 mL濃縮至1 mL（留下其余濾液備用），作為供試品溶液。按處方稱取除黃柏外的其他味藥，按制備工藝處理后，同供試品溶液制備法制備陰性對照溶液。另取鹽酸黃柏堿對照品，用甲醇為溶劑制成1 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照TLC法試驗(yàn)，取5 μL供試品溶液、2 μL對照品溶液，分別點(diǎn)在同一塊硅膠G板上，將薄層板放在用氨飽和的展開缸里，用三氯甲烷-甲醇-水（30∶15∶4）的下層液上行展開后，噴以稀碘化鉍鉀試液。在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品色譜顯相同顏色的斑點(diǎn)。缺黃柏的陰性對照沒有產(chǎn)生干擾，見圖1。

圖1 黃柏薄層色譜圖

2.2 黃連的TLC鑒別［3,7］

取“2.1”項(xiàng)下的備用濾液1 mL，加在干法裝柱的中性氧化鋁柱（100～200目，5 g，內(nèi)徑1.5 cm）上，用50 mL無水乙醇洗脫，洗脫液蒸干后的殘渣用1 mL無水乙醇溶解，作為供試品溶液。按處方稱取除黃連、黃柏外的其他味藥，按制備工藝處理后，同供試品溶液制備法制備陰性對照溶液。取0.1 g黃連對照藥材，加20 mL甲醇浸泡5 min后，超聲30 min，過濾，將濾液作為對照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀對照品，分別用甲醇為溶劑，制成0.2 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照TLC法試驗(yàn)，以上四種溶液各取5 μL，分別點(diǎn)在同一塊硅膠G板上，將薄層板放在用濃氨試液預(yù)飽和20 min的展開缸里，用甲苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液（6∶3∶2∶2∶1）上行展開后，365 nm下檢視。在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，供試品顯四個以上相同顏色的熒光斑點(diǎn)；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。缺黃連、黃柏的陰性對照沒有產(chǎn)生干擾，詳見圖2。

圖2 黃連薄層色譜圖

2.3 大黃的薄層色譜鑒別［3,8］

取“2.1”項(xiàng)下的備用濾液作為供試品溶液。按處方稱取除大黃外的其他味藥，按制備工藝處理后，同供試品溶液制備法制備陰性對照溶液。取0.1 g大黃對照藥材，加20 mL甲醇浸泡5 min后，同法處理成對照藥材溶液。再取大黃酸對照品，用三氯甲烷為溶劑制成l mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照TLC法試驗(yàn)，吸取5～10 μL供試品溶液、5 μL對照藥材溶液、5 μL對照品溶液，分別點(diǎn)在同一塊硅膠G板上，將薄層板放在展開缸里，用石油醚（30～60 ℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液上行展開后，365 nm下檢視。在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，供試品顯相同的橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；氨熏，日光下顯相同的紅色斑點(diǎn)。缺大黃的陰性對照沒有產(chǎn)生干擾。詳見圖3。

圖3 大黃薄層色譜圖：A.365 nm；B.日光

2.4 黃芩的薄層色譜鑒別［3］

取“2.1”項(xiàng)下的備用濾液作為供試品溶液。按處方稱取除黃芩外的其他味藥，按制備工藝處理后，同供試品溶液制備法制備陰性對照溶液。另取1 g黃芩對照藥材，加20 mL甲醇浸泡5 min后，同法處理成對照藥材溶液。再取黃芩苷對照品，用甲醇為溶劑，制成0.5 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照TLC法試驗(yàn)，以上三種溶液各取5 μL，分別點(diǎn)在同一塊硅膠G板上，將薄層板放在展開缸里，用乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）上行展開后，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液。在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品顯相同顏色的斑點(diǎn)。缺黃芩的陰性對照沒有產(chǎn)生干擾。詳見圖4。

圖4 黃芩薄層色譜圖

2.5 板藍(lán)根的薄層色譜鑒別［3,9-11］

取10 g炎可寧丸，研細(xì)，加水40 mL，水浴加熱回流10 min，立即冷卻，離心5 min（轉(zhuǎn)速5 000 r/min），取上清液加熱近沸，加入吲哚醌0.05 g，加熱回流20 min后，加入18%鹽酸溶液5 mL，再加熱回流40 min，立即冷卻，離心5 min（轉(zhuǎn)速5 000 r/min），棄去上清液，殘渣加三氯甲烷40 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液加1%氫氧化鈉溶液洗滌2次，20 mL/min，棄去氫氧化鈉液，三氯甲烷濃縮液至1 mL，作為供試品溶液。按處方稱取除板藍(lán)根外的其他味藥，按制備工藝處理后，同供試品溶液制備法制備陰性對照溶液。另取靛玉紅對照品，用三氯甲烷為溶劑，制成50 μg/mL的溶液，作為對照品溶液。照TLC法試驗(yàn)，吸取20 μL供試品溶液、5 μL對照品溶液，分別點(diǎn)在同一塊硅膠G板上，將薄層板放在展開缸里，用甲苯-乙酸乙酯-丙酮（5∶4∶1）上行展開。在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品顯相同顏色的斑點(diǎn)。缺板藍(lán)根的陰性對照沒有產(chǎn)生干擾。詳見圖5。

3 討論

藥品的療效源自藥品的質(zhì)量，藥品的質(zhì)量又源自生產(chǎn)工藝和原材料。炎可寧丸的制備工藝比較復(fù)雜，處方中雖然只有五味藥材，但卻包含了大黃、黃連生粉入藥、板藍(lán)根、黃芩水提取后入藥、黃柏水提醇沉后入藥三條路線。目前執(zhí)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅僅只收載了黃柏、黃連的化學(xué)鑒別、大黃的薄層色譜鑒別，難以全面控制炎可寧丸的產(chǎn)品質(zhì)量。

中藥的質(zhì)量控制研究具有階段性和漸進(jìn)性［11］。隨著中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，中藥的生產(chǎn)和質(zhì)量以及檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)存在的問題越來越引起人們的關(guān)注。炎可寧丸處方中各味藥材的研究日趨深入，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升提供了充分條件。本研究基于供試液多維使用的考慮，僅僅只取樣一次，共用部分供試液即可以實(shí)現(xiàn)黃柏、黃連、黃芩、大黃的鑒別，大大簡化了操作，提升了效率，減少了樣品的消耗。

板藍(lán)根中含有制劑中其他四味藥材沒有的靛玉紅成分，但由于其中含量太少，而且炎可寧丸中該味藥經(jīng)水煎煮提取工藝致使靛玉紅的提取率較低，直接利用其作為指標(biāo)成分進(jìn)行質(zhì)量控制難度較大。但板藍(lán)根藥材中含有大量的靛苷成分，其適合水提工藝，靛苷水解后會生成氧化吲哚，而在特定條件下氧化吲哚能與吲哚醌生成靛玉紅［12］，利用此線路生成的靛玉紅與板藍(lán)根自身含有的靛玉紅可以在鑒別中作為指標(biāo)成分對板藍(lán)根進(jìn)行控制。