黃 宇，陳 夢，李勝寶，周喜新，歐立軍

（1. 湖南農(nóng)業(yè)大學，湖南 長沙 410128；2. 寧鄉(xiāng)國國蔬菜種植專業(yè)合作社，湖南 寧鄉(xiāng) 410626）

低溫可以影響植物的生長發(fā)育、生存及分布，是限制作物地理分布、造成作物產(chǎn)量與質(zhì)量下降的主要因素之一[1]。辣椒原產(chǎn)中南美洲熱帶地區(qū)，是我國種植面積最大以及冬春設(shè)施栽培的主要蔬菜[2]，但辣椒是典型的喜溫好光蔬菜，冬春季節(jié)經(jīng)常出現(xiàn)的低溫嚴重影響辣椒的生長發(fā)育，導致生長緩慢、產(chǎn)量低、落花落果嚴重，這制約了設(shè)施辣椒反季節(jié)栽培效益的提高和栽培面積的擴大[3-5]。防止低溫傷害的主要措施有選用耐低溫品種[6-7]、噴施外源物[8-10]、采用性能比較好的設(shè)施加強保溫，必要時進行補溫等。辣椒反季節(jié)栽培時，遇到低溫傷害的現(xiàn)象十分普遍，如果不提前采取預(yù)防措施，將造成很大損失。為了解決辣椒栽培中常出現(xiàn)的低溫傷害問題，筆者配制了一種提高辣椒苗期抗寒性的組合物，并對噴施該組合物后辣椒幼苗的色素、凈光合速率、抗氧化系統(tǒng)酶活性等進行了測定分析，以期為探討辣椒耐低溫的機理、提高冬春辣椒耐低溫能力提供參考。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 組合物的組分和配制 提高辣椒苗期抗寒性組合物的主要組分為氯化鈣1～2 g/L、茉莉酸甲酯80～120 μmol/L、亞精胺0.03～0.06 mmol/L、亞硒酸鈉2～4 μmol/L、抗壞血酸1～3 mmol/L、硝酸銨200～250 mg/L、脯氨酸0.2～0.4 mmol/L。具體制備方法為：將亞精胺和亞硒酸鈉混合后溶于水中，得到試劑Ⅰ；將氯化鈣、抗壞血酸、硝酸銨和脯氨酸混合后溶于水中，得到試劑Ⅱ；將茉莉酸甲酯溶于無水乙醇中，得到試劑Ⅲ；將試劑Ⅰ、試劑Ⅱ和試劑Ⅲ混合，得到抗寒性組合物。

1.1.2 供試辣椒品種與育苗方法 供試品種為興蔬215，由湖南省蔬菜研究所提供。將種子播于含營養(yǎng)基質(zhì)的穴盤中，采用漂浮育苗法育苗。當幼苗有4片真葉時將幼苗移栽至7 cm×7 cm育苗缽中進行常規(guī)管理。6葉一心時選取生長一致的幼苗置于人工氣候箱（CU-41L4，Percival Scientific Inc. USA）中進行后續(xù)試驗。

1.2 試驗設(shè)計

選取生長一致的辣椒幼苗用小噴瓶均勻噴施上述組合物至辣椒葉片正反面有液體下滴為止，以噴施蒸餾水作對照（CK），每天噴施1次，連續(xù)噴施3 d后進行低溫處理3 d，溫度為 10℃。處理期間保持空氣相對濕度60%，光照強度100 μmol/（m2·s），光周期為12 h/12 h（晝/夜）。每個處理12株，設(shè)3次重復。

1.3 測定項目及方法

1.3.1 色素含量和凈光合速率 取幼苗心葉往下數(shù)第3片真葉0.2 g，采用Arnon[11]的方法測定色素含量。采用LI-6400便攜式光合作用系統(tǒng)（美國LI-COR公司生產(chǎn)），在9：00—11：00測定幼苗心葉往下數(shù)第3片真葉在光強1 000 μmol/（m2·s）下瞬時光合速率（PN），測量時的空氣溫度為（35±0.5）℃，葉面溫度為（36±0.5）℃，每個材料測量3～5個葉片，取其平均值。

1.3.2 滲透調(diào)節(jié)物、酶活性和氧化產(chǎn)物 脯氨酸（Pro）含量采用酸性茚三酮顯色法測定。可溶性糖含量采用蒽酮比色法測定。過氧化物酶（POD）、過氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽還原酶（GR）、羥自由基（·OH）和超氧陰離子均采用試劑盒法（南京建成生物工程研究所）測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 組合物對色素含量和凈光合速率的影響

由表1可知，噴施組合物后，辣椒葉片葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素均顯著高于CK，分別高出16.67%、19.72%和34.78%；凈光合速率比CK高38.60%，差異均達顯著水平。這表明組合物能緩解低溫脅迫對辣椒葉綠素含量的影響，從而顯著提高凈光合速率。

表1 噴施組合物對色素含量的影響

2.2 組合物對抗氧化系統(tǒng)酶活性的影響

植物在正常情況下維持著體內(nèi)活性氧產(chǎn)生與清除的平衡狀態(tài)，逆境脅迫會誘導植物產(chǎn)生過量的活性氧自由基，造成質(zhì)膜、細胞器膜上脂肪酸的膜脂過氧化，從而導致細胞衰老甚至死亡，而SOD、POD、CAT和GR作為植物體內(nèi)重要的抗氧化酶系統(tǒng)，其活性的高低能夠顯著影響活性氧的平衡。噴施組合物后辣椒葉片的SOD、POD、CAT和GR活性分別比CK高19.20%、37.89%、21.02%和21.26%，差異顯著（表2）。因此，噴施組合物可顯著提高辣椒的抗氧化酶活性，從而緩解低溫脅迫帶來的傷害。

表2 噴施組合物對抗氧化系統(tǒng)酶活性的影響

2.3 組合物對滲透物質(zhì)和氧化物質(zhì)的影響

植物在逆境脅迫下會通過積累可溶性糖和脯氨酸等滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)來維持細胞膨壓，減緩脅迫帶來的傷害。而羥自由基和超氧陰離子作為植物體內(nèi)重要的活性氧類傷害物質(zhì)，其含量直接決定了植物受傷害的程度。噴施組合物后辣椒葉片的可溶性糖和脯氨酸含量分別比CK高27.33%和14.55%，而羥自由基和超氧陰離子含量則分別比CK低23.10%和31.99%，差異均達顯著水平（表3）。這表明噴施組合物能夠顯著提高植物體內(nèi)的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量和顯著降低體內(nèi)活性氧類物質(zhì)含量。

表3 噴施組合物對滲透物質(zhì)及氧化物質(zhì)含量的影響

3 討 論

近年來，對于植物抗冷機制有了更加深入的研究，認為低溫下植物會產(chǎn)生一系列生理生化反應(yīng)。葉綠體對低溫的敏感性較強，是光合作用對低溫敏感的原因之一[12-14]。低溫下葉綠素含量下降一方面是由于原有的葉綠素受到破壞，另一方面是由于低溫限制了植物合成葉綠素[15-16]。該研究表明，辣椒幼苗噴施組合物后其葉綠素含量顯著高于CK，說明組合物在一定程度上可以保護葉綠體結(jié)構(gòu)或削弱低溫時葉綠素合成的影響，從而保證其凈光合速率高于CK。

低溫會導致植物體內(nèi)過量積累活性氧（ROS），產(chǎn)生H2O2和·O2-破壞磷脂膜[17-19]，導致脯氨酸和可溶性糖等兼容滲透劑在植物體內(nèi)大量積累以維持滲透平衡[20-21]，從而達到抵御低溫的目的。筆者的研究發(fā)現(xiàn)，組合物可以提高辣椒幼苗的SOD、POD、CAT和GR等抗氧化系統(tǒng)酶的活性及脯氨酸和可溶性糖的含量，降低羥自由基和超氧陰離子的含量。這表明噴施組合物后可以緩解低溫對幼苗帶來的傷害，提高幼苗耐低溫的能力。