【摘要】目的：探討人乳頭病毒病毒基因（23）型檢測PCR反應(yīng)反向點雜交法。方法：回顧性分析我院2018年8月～2020年12月期間進(jìn)行HPV檢測的適齡女性246例，對其使用人乳頭病毒病毒基因（23）型檢測PCR反應(yīng)反向點雜交法來進(jìn)行檢測，并與其病理學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行對比，分析臨床檢測的準(zhǔn)確性。結(jié)果：分型檢測的準(zhǔn)確性與病理學(xué)結(jié)果保持一致，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：在臨床醫(yī)學(xué)中，早期應(yīng)用人乳頭病毒病毒基因（23）型檢測PCR反應(yīng)反向點雜交法來對宮頸癌初篩進(jìn)行檢測，有著較高的準(zhǔn)確性，避免發(fā)展為宮頸癌，降低我市女性宮頸癌發(fā)病率有實際意義，值得臨床廣泛推廣和應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】人乳頭病毒;病毒基因;PCR反向點雜交法

【中圖分類號】R737.33 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【DOI】

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，發(fā)病率在女性惡性腫瘤中居第二位，僅次于乳腺癌。根據(jù)WHO統(tǒng)計，2018約有57萬的宮頸癌新發(fā)病例，其中80%的病例發(fā)生在發(fā)展中國家。我國癌癥中心數(shù)據(jù)顯示2018年宮頸癌新發(fā)病例11萬人，死亡約5萬，宮頸癌依然是威脅女性健康的重要問題[1]。提早預(yù)防、診斷和治療子宮頸癌就成為了維護(hù)婦女健康的首要問題。幾乎所有宮頸癌患者的病理樣本中均能找到HPV病毒，從而印證了HPV是宮頸癌的主要病因，也使宮頸癌成為目前人類所有癌癥病變中唯一病因明確的癌癥[2]。宮頸癌有一系列的癌前病變，臨床研究表明，從HPV感染到宮頸癌前病變到最終發(fā)展為宮頸癌大約需要5-10年的時間，而且子宮頸具有有利的解剖學(xué)基礎(chǔ)，易于暴露，便于觀察、觸診和取材。如在癌前病變被確診，即可進(jìn)行進(jìn)一步的治療與監(jiān)測[3]。因此，通過篩查可以達(dá)到早診早治，降低子宮頸浸潤癌的發(fā)病率和死亡率。我院為了提高醫(yī)院對于宮頸癌的診療水平，為方便診斷，擬使用人乳頭瘤病毒基因分型（23型）檢測試劑盒（PCR-反向點雜交法）來進(jìn)行相應(yīng)的研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

回顧性分析我院2018年8月～2020年12月期間進(jìn)行HPV檢測的適齡女性246例，對其使用人乳頭病毒病毒基因（23）型檢測PCR反應(yīng)反向點雜交法來進(jìn)行檢測。

適應(yīng)癥：（1）三年以上性行為或21歲以上有性行為的女性普遍篩查。（2）高危婦女人群：有多個性伴侶、性生活過早、免疫功能低下、衛(wèi)生條件差、性保健知識缺乏的女性。（3）決定妊娠的婦女，在妊娠前應(yīng)進(jìn)行HPV檢測。（4）宮頸病變及宮頸癌患者治療后的隨訪。（5）尖銳濕疣患者。（6）欲接種HPV疫苗者。

禁忌癥：（1）檢測應(yīng)在非月經(jīng)期進(jìn)行。（2）檢測前3天不要使用陰道內(nèi)藥物，不沖洗陰道。（3） 檢測前24小時不應(yīng)有性行為。

1.2 方法

PCR-反向點雜交法技術(shù)根據(jù)HPV不同基因型之間的序列差異，按照堿基互補配對原則，設(shè)計特異性識別某種HPV基因型序列的寡核苷酸探針。探針5’端用氨基標(biāo)記，通過化學(xué)鍵作用固定在尼龍膜的特定位置上，制成包含探針陣列的膜條。將帶有生物素標(biāo)記的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與膜條上的探針在一定的溫度和鹽離子濃度條件下進(jìn)行分子雜交，再通過生物素與鏈霉親和素耦聯(lián)的過氧化物酶結(jié)合，在H2O2的催化下使TMB發(fā)生顯色反應(yīng)。通過膜條特定位置顯色（藍(lán)色）與否來判斷該探針是否與待測DNA片段雜交，從而鑒定HPV基因型。

1.3 評價標(biāo)準(zhǔn)

測定準(zhǔn)確性：對23個基因型進(jìn)行準(zhǔn)確性分析，對其他常見7種性病病原體（沙眼衣原體，人型支原體，白色念球菌，陰道毛滴蟲，梅毒螺旋體，化膿性鏈球菌及單純皰疹病毒Ⅱ型）感染的標(biāo)本進(jìn)行準(zhǔn)確性分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件對患者數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計數(shù)資料使用例數(shù)n和%進(jìn)行表示，使用X 2檢驗;計量資料使用（x±s）進(jìn)行表示，使用t進(jìn)行檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 準(zhǔn)確性

分型檢測的準(zhǔn)確性[19例（7.72%）]與病理學(xué)結(jié)果[20例（8.13%）]基本保持一致，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

3 討論

隨著社會經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，人們的物質(zhì)生活水平有了較大的進(jìn)步，使得人們更加重視健康問題，而對于女性來說，早期宮頸癌病變作為常見的惡性腫瘤之一，及時的診斷和進(jìn)行早期的治療能夠有效的降低該種病癥的發(fā)病率。目前的流行病學(xué)和生物學(xué)資料已經(jīng)證明HPV感染是宮頸癌及其癌前病變的主要病因，因而加強防治和監(jiān)控HPV的感染狀態(tài)已成為預(yù)防和診治宮頸癌及癌前病變的主要手段。2005年，世界衛(wèi)生組織/國際癌癥研究所（WHO/IARC）提出：“有充足的證據(jù)表明：HPV檢測可作為子宮頸癌的初篩手段，并可以降低子宮頸癌的發(fā)病率和死亡率”。經(jīng)過大量文獻(xiàn)證明，HPV檢測的靈敏度顯著高于細(xì)胞學(xué)檢查，而且陰性預(yù)測值在99%以上。與細(xì)胞學(xué)篩查相比，HPV檢測可以延長篩查周期，減少病人的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。在臨床上，HPV檢測可用于宮頸癌的篩查、細(xì)胞學(xué)ASCUS分流、宮頸病變治療后的隨訪等，臨床應(yīng)用效果明顯，其可以作為宮頸癌的初篩手段。

本研究結(jié)果顯示：分型檢測的準(zhǔn)確性與病理學(xué)結(jié)果保持一致，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。該方法從樣本到結(jié)果只需6個小時左右，能準(zhǔn)確鑒定國內(nèi)常見的23種HPV基因型，其中高危型包括HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73，82;低危型包括HPV6，11，42，43，81，83。因此，開展HPV分型檢測的有助于對我市適齡女性進(jìn)行宮頸癌早期篩查，及早的發(fā)現(xiàn)并治療癌前病變。

綜上所述，在臨床醫(yī)學(xué)中，早期應(yīng)用人乳頭病毒病毒基因（23）型檢測PCR反應(yīng)反向點雜交法來對宮頸癌初篩進(jìn)行檢測，有著較高的準(zhǔn)確性，避免發(fā)展為宮頸癌，降低我市女性宮頸癌發(fā)病率有實際意義，值得臨床廣泛推廣和應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

[1]余娟平，魏琦，王倩倩，等.安徽地區(qū)17160例健康體檢女性人乳頭瘤病毒感染狀況及基因分型[J].中華實驗和臨床感染病雜志（電子版），2019，13（5）：389-395.

[2]韓曉靜，林牧，龔亞東，等.熒光定量PCR法聯(lián)合反向點雜交法鑒定分枝桿菌菌種類型的效果[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2019，035（021）：3345-3346.

[3]高麗敏，鄭義，徐曉涵，等.第二代雜交捕獲法與PCR反向點雜交法在人乳頭瘤病毒檢測中的應(yīng)用比較[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2019，v.19（81）：187-188.

作者簡介：陳紅（1984.01-），女，侗族，貴州萬山人，本科學(xué)歷，主管檢驗技師，主要從事臨床檢驗工作。