王 雷 劉 暉 竇宏強(qiáng) 程調(diào)娟 袁 斌

（天水眾興菌業(yè)科技股份有限公司，甘肅 天水 741000）

金針菇（Flammulina filiformis）又名構(gòu)菌、冬菇、毛柄金錢菌，隸屬于泡頭菌科（Physalacriaceae），冬菇屬（Flammulina）[1-2]，是我國(guó)栽培的主要食用菌之一，也是工廠化栽培數(shù)量較大的品種。目前工廠化栽培的金針菇主要為白色品種。為了選育出較優(yōu)的工廠化白色金針菇品種，我們對(duì)收集到的10個(gè)菌株進(jìn)行了比較試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

10個(gè)供試菌株均為白色金針菇，其中，白色13來自河南，白色Q1、白色Q2、白色5號(hào)來自山東，J08來自江蘇，白色428來自上海，07-3、07-5、07-A、07-11為天水眾興菌業(yè)保藏菌種。

1.2 供試培養(yǎng)基

母種培養(yǎng)基：使用日本寒天培養(yǎng)基制作母種試管和平板培養(yǎng)基。液體搖瓶培養(yǎng)基配方：豆粕粉2.11 g，白砂糖12.8 g，KH2PO40.42 g，MgSO40.42 g，水600 mL，pH 6.3～7.3。

栽培料配方：玉米芯37%，米糠30.5%，麩皮10%，棉籽殼6%，大豆皮5.5%，啤酒糟6.5%，甜菜渣2%，貝殼粉2%，碳酸鈣0.5%，含水量67%。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 供試菌株菌絲生長(zhǎng)特性測(cè)試

從母種試管中挖取直徑為4 mm供試菌株菌塊轉(zhuǎn)接至日本寒天平板培養(yǎng)基上，置于19 ℃恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)，試驗(yàn)重復(fù)3次。菌絲萌發(fā)后第3天，在培養(yǎng)皿底部菌塊中心劃兩條十字交叉線，繼續(xù)培養(yǎng)至菌落邊緣距培養(yǎng)皿邊緣約1 cm時(shí)，測(cè)算菌絲日均生長(zhǎng)速度并觀察菌絲長(zhǎng)勢(shì)。

1.3.2 ITS rRNA 基因序列及菌株系統(tǒng)發(fā)育分析

供試菌株由生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行ITS rRNA基因測(cè)序。獲得的序列在NCBI（National Center for Biotechnology Infor- mation）與 GenBank（www.ncbi.nml.nih.gov）數(shù)據(jù)庫中以BLAST搜索，獲得其他金針菇序列，在CLUSTAL X1.8程序進(jìn)行比較。使用neighbor-joining method計(jì)算進(jìn)化距離，在MEGA 6.0軟件中用p-distances和Kimura-2parameter雙參數(shù)法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，并用bootstrap檢驗(yàn)進(jìn)化樹分支聚類的置信度，重復(fù)1 000次[3]。

1.3.3 供試菌株栽培料試驗(yàn)

按照工廠化瓶栽模式，采用1 500 mL聚丙烯瓶裝料，瓶口內(nèi)徑84 mm，每瓶濕料重1 060 g，干料重349.8 g。采用液體菌種接種，每個(gè)菌株接種16瓶，重復(fù)3次。接種后放置于培養(yǎng)溫度16～17 ℃，空氣相對(duì)濕度75%的環(huán)境下避光養(yǎng)菌。19天菌絲長(zhǎng)滿，21天利用機(jī)器搔菌并注水8 mL后送至出菇室進(jìn)行出菇管理。

按照常規(guī)工廠化調(diào)控方法進(jìn)行培育，經(jīng)過菌絲恢復(fù)期、現(xiàn)蕾期、低溫抑制期，菇蕾長(zhǎng)出后包膠片。待子實(shí)體長(zhǎng)度達(dá)15～16 cm時(shí)采收，統(tǒng)計(jì)平均單瓶產(chǎn)量和生物轉(zhuǎn)化率，并評(píng)價(jià)子實(shí)體品質(zhì)，包括菇帽大小、干爽度、根切面白度、菇形緊實(shí)度、菇柄硬度等，統(tǒng)計(jì)優(yōu)等菇比率。優(yōu)等菇標(biāo)準(zhǔn)為菇帽直徑5～8 mm，菇體干爽、根切面白皙，菇形緊實(shí)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同菌株的菌絲生長(zhǎng)特性

由表1可知，10個(gè)白色金針菇菌株在日本寒天培養(yǎng)基平板上的菌絲生長(zhǎng)速度相近，其中白色5號(hào)日均生長(zhǎng)速度最快，為3.81 mm；J08長(zhǎng)速慢，為3.28 mm。菌絲長(zhǎng)勢(shì)較弱的是白色Q1和07-5。

表1 10個(gè)白色金針菇菌株菌絲生長(zhǎng)表現(xiàn)

2.2 10個(gè)菌株的系統(tǒng)發(fā)育分析

將10個(gè)菌株的ITS rRNA基因序列提交到NCBI，通過Blast工具在GenBank數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行相似性比較，選取相似性在99%以上的菌株構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖1）。結(jié)果顯示，10個(gè)菌株可以歸于兩類，其中07-11、白色Q2、白色28、白色Q1、白色13、07-A、07-5之間的親緣關(guān)系非常近，位于同一個(gè)進(jìn)化枝；其他3個(gè)菌株07-3、J08和白色5號(hào)的親緣關(guān)系最近，說明具有較高的同源性。而這10株菌株和標(biāo)準(zhǔn)菌株位于不同的兩枝，親緣關(guān)系稍遠(yuǎn)。

圖1 11個(gè)菌株（含1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌株）基于ITS序列的系統(tǒng)發(fā)育樹

2.3 不同菌株的出菇產(chǎn)量與品質(zhì)

10個(gè)菌株生物轉(zhuǎn)化率由高到低為：J08>白色Q2>白色Q1>白色5號(hào)>07-3>07-5>07-A>白色28>白色13>07-11（表2）。平均單瓶產(chǎn)量以菌株J08最高，為547.27g；以07-11最低，僅472.79 g。單瓶產(chǎn)量最高的是白色Q2，為570.53 g。

表2 10個(gè)白色金針菇菌株產(chǎn)量及生物轉(zhuǎn)化率比較

優(yōu)等菇率是反映金針菇菌株工廠化栽培商業(yè)屬性的指標(biāo)之一，考察菇帽、干爽度、根切面、菇形緊實(shí)度和菇柄的綜合屬性。10個(gè)菌株的優(yōu)等菇率由高到低為：白色Q2>白色Q1>白色5號(hào)>白色13>07-A> 07-5>07-11>白色28>07-3>J08（表3），其中白色Q2優(yōu)等菇率為78.9%，J08僅29.17%。菇體干爽度07-A和白色Q1最佳；菇根切面以白色13和07-5表現(xiàn)白凈；菇形以07-A、白色Q1和白色5號(hào)表現(xiàn)緊實(shí)；菇柄硬度以白色Q2、白色Q1、07-A和07-5為好。

表3 10個(gè)白色金針菇菌株子實(shí)體品質(zhì)比較

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，菌株白色Q2和白色Q1有著較高的生物轉(zhuǎn)化率和優(yōu)等菇率，符合工廠化栽培對(duì)菌株性狀的要求，適合工廠化推廣和栽培。J08雖然單產(chǎn)和生物轉(zhuǎn)化率高，但子實(shí)體農(nóng)藝性狀欠佳，菇帽大，優(yōu)等率較低。其他菌株表現(xiàn)一般。

本試驗(yàn)平板培養(yǎng)基菌絲的生長(zhǎng)速度差異不大，但菌絲的長(zhǎng)速和長(zhǎng)勢(shì)與單產(chǎn)并無直接關(guān)系。菌絲生長(zhǎng)速度快的，單產(chǎn)和轉(zhuǎn)化率不一定高，這與文獻(xiàn)[4-6]的報(bào)道相一致。

通過ITS序列分析表明，雖然10個(gè)菌株來源地不同，但菌株間親緣關(guān)系較近，平均單瓶產(chǎn)量、生物轉(zhuǎn)化率和子實(shí)體外觀品質(zhì)表現(xiàn)一定差異。陸歡等[7]研究表明，我國(guó)市場(chǎng)上金針菇工廠化栽培菌株的親緣關(guān)系較近，與本文研究結(jié)果相符。因此，我國(guó)金針菇優(yōu)良菌種繁育工作任重而道遠(yuǎn)。