張曉云

(河西學(xué)院附屬張掖人民醫(yī)院病理科，甘肅 張掖 734000)

數(shù)據(jù)顯示[1]，近年來我國腫瘤發(fā)病率呈升高趨勢(shì)，已成為我國患者死亡的重要因素之一。腫瘤患病初期癥狀不明顯，確診時(shí)多數(shù)處于中晚期。臨床常用的檢查方法包括CT、MRI、X 線檢查，易于操作，但漏診率較高，還需進(jìn)行病理檢查。不同檢查技術(shù)對(duì)疾病的診斷效能存在差異，常規(guī)技術(shù)病理檢查為穿刺活檢法，在確定病灶分期、類型等方面具有一定可靠性，但仍有較高的漏診率，且對(duì)患者痛苦較大。免疫組化技術(shù)通過染色，對(duì)比腫瘤組織切片，能夠?qū)M織內(nèi)抗原進(jìn)行定量、定性、定位，進(jìn)而判斷病變程度，操作簡單，對(duì)患者損傷相對(duì)較輕[2]。本研究將免疫組化技術(shù)用于病理診斷，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象資料

選取2018 年3 月-2020 年4 月收治的疑似腫瘤患者133 例，男/女為69/64，年齡46～77 歲，平均（63.85±3.52）歲；體重49～75kg，平均（62.20±4.53）kg。

1.2 方法

患者均行常規(guī)技術(shù)檢查與免疫組化技術(shù)檢查，檢查前向患者講解檢查方法、注意事項(xiàng)，引導(dǎo)患者放松心情。

常規(guī)技術(shù)：常規(guī)穿刺活檢，采用影像學(xué)技術(shù)確定病理位置、大小，活檢穿刺法取出患者腫瘤組織，與標(biāo)準(zhǔn)組織進(jìn)行對(duì)比。

免疫組化技術(shù)：取患者腫瘤樣本組織 (大小1cm×2cm×0.2cm)浸泡于甲醛溶液中，浸泡2h 后采用透明液透明60min，而后使用脫水液脫水60min，并浸蠟液60min，使用石蠟包埋法對(duì)組織進(jìn)行常規(guī)切片，厚度以2μm 為宜，而后免疫組化染色，于37℃下3%過氧化氫溶液內(nèi)孵育10min，對(duì)切片進(jìn)行高溫滅活，經(jīng)蒸餾水沖洗（3min）、110℃高壓鍋內(nèi)修復(fù)（2min），使用PBS 洗滌（5min），于常溫下孵育120min，再次使用PBS 洗滌，加入U(xiǎn)ltrasenSitiveTM SP 試劑，使用DBA 顯色，染色過程按照試劑盒說明書進(jìn)行，然后使用中性樹膠封固，觀察染色情況。甲胎蛋白（AFP）、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（glypican-3）顏色為棕黃色提示為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)

①記錄手術(shù)病理檢查結(jié)果。

②對(duì)比活檢穿刺法與免疫組化技術(shù)診斷結(jié)果與診斷價(jià)值，分析其靈敏度、特異度與漏診率。

③診斷配合度：采用我院自制的患者對(duì)診斷技術(shù)的配合度評(píng)分量表評(píng)價(jià)，內(nèi)容包括生理問題、心理問題、信任感3 個(gè)維度，每個(gè)維度評(píng)分為100 分，分值越高表明患者檢查配合度越高，對(duì)檢查方法的影響越輕微。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS21.0 處理。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料如檢查依從性評(píng)分以（±s）描述，t 檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料如2 種診斷技術(shù)間的結(jié)果比較、診斷技術(shù)與病例結(jié)果的比較采用“率”描述，用χ2檢驗(yàn)。當(dāng)P＜0.05 時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 手術(shù)病理結(jié)果

133 例疑似腫瘤患者中有108 例經(jīng)手術(shù)病理檢查確診，其中血管瘤10 例，占9.26%，肺癌37 例，占34.26%，轉(zhuǎn)移性腫瘤22 例，占20.37%，肝癌31 例，占28.70%，內(nèi)膽管癌8 例，占7.41%。

2.2 2 種診斷技術(shù)與手術(shù)病理診斷結(jié)果比較

免疫組化技術(shù)肺癌診斷準(zhǔn)確率97.30%及總診斷準(zhǔn)確率97.22%高于常規(guī)技術(shù)72.97%、75.93%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 2 種診斷技術(shù)與手術(shù)病理診斷結(jié)果比較 例（%）

2.3 2 種診斷技術(shù)診斷結(jié)果比較

常規(guī)技術(shù)診斷靈敏度（82/108）、特異度（18/25）、漏診率（26/108）分別為75.93%、72.00%、24.07%，免疫組化靈敏度（105/108）、特異度（24/25）、漏診率（3/108）分別為97.22%、96.00%、2.78%。免疫組化技術(shù)靈敏度高于常規(guī)技術(shù)（χ2=21.070，P=0.000）、漏診率低于常規(guī)技術(shù)（χ2=21.070，P=0.000）。2 種診斷方式特異度比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.720，P=0.054）。見表2、表3。

表2 常規(guī)技術(shù)診斷結(jié)果

表3 免疫組化技術(shù)診斷結(jié)果

2.4 2 種診斷方式患者檢查配合度比較

免疫組化技術(shù)檢查時(shí)患者生理問題、心理問題、信任感評(píng)分均高于常規(guī)技術(shù)（P＜0.05）。見表4。

表4 2 種診斷方式患者檢查配合度比較（±s，分）

表4 2 種診斷方式患者檢查配合度比較（±s，分）

3 討論

免疫組化技術(shù)具有較高的靈敏度與特異度，近年來隨著抗原修復(fù)技術(shù)進(jìn)步，自動(dòng)免疫染色系統(tǒng)的建立，即用型試劑盒抗體的商品化，使該技術(shù)更加簡便，易于操作，在病理診斷中的應(yīng)用日益廣泛。腫瘤可對(duì)患者生命安全構(gòu)成威脅，而早期有效、準(zhǔn)確的診斷有助于患者盡早接受規(guī)范化治療，對(duì)于延長生存期，改善生存質(zhì)量具有重要意義。免疫組化技術(shù)是用于腫瘤病理診斷的輔助手段之一，以觀察到的切片結(jié)果作為基礎(chǔ)，并對(duì)抗體篩選，進(jìn)而進(jìn)行診斷。

免疫組化技術(shù)相比常規(guī)技術(shù)，能夠觀察切片中抗原的數(shù)量及分布，從而進(jìn)行定性定量研究。石蠟切片對(duì)于組織形態(tài)保存較好，能夠長期保存，便于染色對(duì)照，使用的甲醛固定劑可對(duì)抗原起到一定修復(fù)作用[3]。免疫組化技術(shù)在鑒別腫瘤組織起源方面效果較好，例如部分腫瘤來源不明，無法明確腫瘤發(fā)病部位。如細(xì)胞角蛋白（CK20）在膽管癌、胃腸道癌中呈陽性，在乳腺癌，肺癌中呈陰性。而明確腫瘤的來源有助于為臨床治療提供更準(zhǔn)確的依據(jù)。此外，該技術(shù)對(duì)交界性腫瘤區(qū)分良好。常規(guī)技術(shù)難以檢出微小轉(zhuǎn)移灶，在區(qū)分淋巴細(xì)胞內(nèi)竇性組織細(xì)胞增生與部分癌癥早期轉(zhuǎn)移方面敏感度欠佳。而免疫組化技術(shù)能夠準(zhǔn)確及時(shí)發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶。本研究結(jié)果顯示，免疫組化技術(shù)總診斷準(zhǔn)確率高于常規(guī)技術(shù)，且診斷的靈敏度、特異度更高，漏診率更低。提示免疫組化技術(shù)用于腫瘤病理診斷具有較高的陽性診出率，敏感度與特異度較高。羅珂研究顯示[4]，免疫組化診斷的靈敏度與特異度相比常規(guī)技術(shù)較高，而漏診率相比常規(guī)技術(shù)較低，與本研究結(jié)果具有一致性。免疫組化技術(shù)對(duì)患者損害小，患者檢查配合度較高。本研究結(jié)果顯示，免疫組化技術(shù)檢查時(shí)患者生理問題、心理問題、信任感評(píng)分均高于常規(guī)技術(shù)。提示免疫組化技術(shù)可提高患者檢查配合度，對(duì)患者生理、心理的影響較小，與臨床研究具有一致性[5]。

但免疫組化技術(shù)也存在一定局限性，主要體現(xiàn)在抗體特異性與解釋。免疫組化技術(shù)檢測(cè)必須有適當(dāng)?shù)年栃耘c陰性對(duì)照，如對(duì)照組不理想或被忽略，可能會(huì)影響染色結(jié)果。免疫組化檢查結(jié)果不僅需要依靠規(guī)范化操作，還需正確的解釋，在解釋時(shí)應(yīng)結(jié)合鑒別診斷，抗體特性、研究組織性質(zhì)等。免疫組化技術(shù)存在一定假陽性，本研究中假陽性率為0.93%（1/108）?？贵w必須保持合適的濃度內(nèi)且在保質(zhì)期內(nèi)，若過期或抗體濃度不足可能會(huì)影響著色，出現(xiàn)假陽性[6]?？贵w孵育時(shí)間控制可影響假陽性發(fā)生，對(duì)于夏季應(yīng)適當(dāng)縮短孵育時(shí)間，而冬季應(yīng)稍微延長時(shí)間。同時(shí)，操作時(shí)若組織變干，則可能引起假陽性。免疫組化結(jié)果中的假陰性不是真實(shí)的反應(yīng)，出現(xiàn)假陰性的原因中，抗原修復(fù)方法不當(dāng)是重要的影響因素之一。在抗原選擇時(shí)應(yīng)根據(jù)抗原特點(diǎn)選擇，熱修復(fù)注意修復(fù)的方法及溫度。一抗效價(jià)降低或失效也會(huì)影響假陰性。免疫組化染色切片好壞會(huì)對(duì)醫(yī)生判斷染色結(jié)果產(chǎn)生直接影響，從而對(duì)病理診斷結(jié)果產(chǎn)生影響[7]。

為確保免疫組化染色結(jié)果的可靠性，現(xiàn)提出以下建議，①確定適宜的試劑濃度，以得到最大強(qiáng)度的特異性染色或最弱的背景染色作為試劑的最佳濃度；②設(shè)立對(duì)照組，確保免疫染色質(zhì)量：包括設(shè)立陽性對(duì)照、陰性對(duì)照、空白對(duì)照組；對(duì)于已知存在抗原的陽性對(duì)照組，最好選用含有少量抗原的癌組織作為對(duì)照，空白對(duì)照可采用非免疫血清。③在對(duì)抗原修復(fù)時(shí)，確保修復(fù)工具、修復(fù)溫度與修復(fù)時(shí)間一致，切片應(yīng)該自然冷卻后再進(jìn)行染色，修復(fù)工具以微波爐、高壓鍋為宜，修復(fù)溫度應(yīng)在100℃以上，修復(fù)總時(shí)間應(yīng)＞15min。④在染色過程中保持切片處于濕潤狀態(tài)，孵育過程中確保孵育盒平整，避免抗體液體流入組織內(nèi)。⑤報(bào)告染色結(jié)果時(shí)應(yīng)適當(dāng)結(jié)合臨床診斷、抗體、鑒定等，避免一味解釋，將假陰性、假陽性等各種異常進(jìn)行排除。

綜上所述，免疫組化技術(shù)用于病理診斷，準(zhǔn)確率、靈敏度、特異度更高，且漏診率低，能夠增加患者檢查舒適度，具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。