◎ 許 萍,王春華,劉曉丹,馬金龍,于寶平
(1.上海城建職業(yè)學院,上海 201415;2.通標標準技術(shù)服務(wù)(上海)有限公司,上海 200233;3.中檢科(上海)測試技術(shù)有限公司,上海 201206)
氰化物分為有機氰化物和無機氰化物,均屬于高毒性化合物[1]。氰化物是具有極高活性的小分子物質(zhì),在細菌、真菌、節(jié)肢動物、脊椎動物和植物中均能自然產(chǎn)生[2]。日常生活中常見的糧食類食品,例如木薯、玉米、小麥、豆類等都有天然氰化物的存在。在使用糧食作為釀酒原料時,氰化物會被帶入成品酒中。因此,針對糧食和蒸餾酒及其配制酒,氰化物的安全風險必須得到重視。
為了控制糧食和蒸餾酒及其配制酒的氰化物風險,國內(nèi)外監(jiān)管機構(gòu)規(guī)定了詳細的限量要求。歐盟于2007年發(fā)布通報,規(guī)定直接食用的杏仁中氫氰酸不得大于20 mg·kg-1。日本對水果、蔬菜、豆類谷物、小麥粉等食品的氰化物含量(以氫氰酸計)作出不同限量的具體規(guī)定[3]。我國是蒸餾酒生產(chǎn)、消費大國,因此加強對蒸餾酒及其配制酒的氰化物監(jiān)管非常重要。在《食品安全國家標準 蒸餾酒及其配制酒》(GB 2757—2012)中明確規(guī)定氰化物(按100%酒精度)不大于8.0 mg·L-1。
目前氰化物的測試方法較多,主要有分光光度法、氣相色譜法、離子色譜法[4]和滴定法等。我國測試標準以GB 5009.36—2016為主,包括分光光度法、氣相色譜法和定性法。分光光度法儀器成本低,并且操作簡便、可靠性好[5],適合不同規(guī)模的實驗室,應(yīng)用較廣泛。本文參照GB 5009.36—2016分光光度法,對不同食品基質(zhì)中氰化物進行測試,驗證了方法的線性關(guān)系、精密度、回收率,建立了可靠的測試能力。
瓦里安Cary 100 Scan型紫外分光光度計;梅特勒-托利多ME 204E電子天平。
異煙酸、吡唑酮(分析純,國藥集團化學試劑有限公司)、N-二甲基甲酰胺、氯胺T(有效氯含量≥11%)、水中氰標準溶液(50 mg·L-1,中國計量科學研究院)。
樣品為市售木薯粉、市售高粱酒。
配制濃度為1 g·L-1的氫氧化鈉溶液,用氫氧化鈉溶液將水中氰標準溶液稀釋50倍,得到濃度為1 μg·mL-1的氰標準使用液。
1.3.1 木薯粉氰化物含量測定
稱取試樣于蒸餾裝置,加水、乙酸鋅溶液、酒石酸,用氫氧化鈉溶液收集餾液。吸取樣液及0.0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL和5.0 mL氰標準使用液(相當于0.0 μg、0.1 μg、0.2 μg、0.5 μg、1.0 μg、2.0 μg、4.0 μg和5.0 μg氫氰酸)。分別加入氫氧化鈉溶液和酚酞指示液,用乙酸調(diào)至紅色消失,加磷酸鹽緩沖溶液,加溫至37 ℃,加入氯胺T溶液,放置5 min,加入5 mL異煙酸-吡唑酮溶液,加水后于40 ℃放置40 min,用2 cm比色杯于波長638 nm處測吸光度。
1.3.2 高粱酒氰化物含量測定
吸取試樣,加氫氧化鈉溶液,放置10 min。吸取0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL和2.0 mL氰標準使用液(相當于0 μg、0.5 μg、1.0 μg、1.5 μg和2.0 μg氫氰酸),加入氫氧化鈉溶液。加入酚酞指示劑,用乙酸溶液調(diào)至紅色褪去,用氫氧化鈉溶液調(diào)至近紅色,加磷酸鹽緩沖溶液、氯胺T溶液,放置3 min,加入2 mL異煙酸-吡唑酮溶液,加水稀釋,30 ℃放置30 min,用1 cm比色杯于波長638 nm處測吸光度。
實驗結(jié)果顯示,分光光度法線性良好。木薯粉的標準曲線為y=6.514 03x+0.040 49,高粱酒標準曲線為y=0.144 28x+0.000 44,相關(guān)系數(shù)均為0.999。符合GB/T 27417—2017的要求,相關(guān)系數(shù)不低于0.99。
2.2.1 木薯粉
在稱取的10 g木薯粉中加標3水平,相當于加標0.5 μg/10 g、1 μg/10 g、5 μg/10 g 樣品,測定氰化物含量結(jié)果見表1。表1中加標前后氰化物含量的精密度最高7.4%,均不大于10%。結(jié)果顯示分光光度計法測試木薯粉精密度高、再現(xiàn)性好。精密度符合GB 5009.36—2016的要求,重復(fù)性條件下獲得的2次獨立測定結(jié)果的絕對差值不超過算術(shù)平均值的10%。表1中3個加標水平最低回收率為80.3%,最高回收率達93.2%?;厥章史螱B/T 27404—2008的要求,被測組分含量為0.1~1 mg·kg-1時回收率范圍在80%~110%。
表1 木薯粉精密度和加標回收率表
2.2.2 高粱酒
在吸取的1.0 mL樣品中兩水平加標,相當于加標1 μg·mL-1、2 μg·mL-1樣品,測定氰化物含量結(jié)果見表2。從表2可以看出,加標后測定氰化物含量的精密度最高3.8%,不大于10%。結(jié)果顯示分光光度計法測試高粱酒精密度高、再現(xiàn)性好。精密度符合GB 5009.36—2016的要求,重復(fù)性條件下獲得的2次獨立測定結(jié)果的絕對差值不超過算術(shù)平均值的10%。表2中兩個加標水平最低回收率為90.0%,最高回收率達96.4%。回收率符合GB/T 27404—2008的要求,被測組分含量為1~100 mg·kg-1時回收率范圍在90%~110%。
表2 高粱酒精密度和加標回收率表
本文參照GB 5009.36—2016分光光度法,對不同食品基質(zhì)中氰化物進行測試,驗證了不同食品基質(zhì)的測試精密度和回收率,均得到了符合要求的測試結(jié)果。①分光光度法操作簡單,有利于測試人員的培訓。②通過本文的方法驗證實驗可以看出分光光度法精密度高、重現(xiàn)性好,有利于實驗室質(zhì)量控制。③本文分光光度法適用于不同基質(zhì),木薯粉和高粱酒的方法驗證結(jié)果均符合國家標準的要求。此外,對于顏色較深的或者混濁的蒸餾酒及其配制酒樣品,需要蒸餾預(yù)處理,預(yù)處理方法可參考糧食類樣品的蒸餾方法。④木薯粉和高粱酒的回收率均符合國家標準要求。本文分光光度法準確度高,結(jié)果可信。
綜上所述,分光光度法可用于實驗室檢測糧食類食品和蒸餾酒及其配制酒,均達到檢測的質(zhì)量控制要求。