萬(wàn)品文，萬(wàn)春

南陽(yáng)市中心醫(yī)院肝臟外科，河南 南陽(yáng) 473000

結(jié)腸癌是腸道惡性腫瘤的最常見(jiàn)類型之一，近年發(fā)病率逐步提高且有年輕化趨勢(shì)，符合根治性手術(shù)指征的早中期結(jié)腸癌患者改善生存結(jié)局的最可靠手段是早期積極實(shí)施結(jié)腸癌根治術(shù)，但部分患者術(shù)后仍出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，是患者5年生存率不高的首要原因。微小RNA（microRNA，miRNA）與結(jié)腸癌關(guān)系的研究已經(jīng)開(kāi)展較多，發(fā)現(xiàn)不少miRNA可影響結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖、侵襲等惡性生物學(xué)行為并最終影響治療預(yù)后。miRNA-3120-5p是近年發(fā)現(xiàn)的miRNA類型，細(xì)胞研究證實(shí)其可促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的侵襲，但關(guān)于結(jié)腸癌患者中miRNA-3120-5p的表達(dá)情況及其對(duì)治療結(jié)局的影響等研究尚未涉及。本研究以此為切入點(diǎn)探討結(jié)腸癌患者中miRNA-3120-5p的表達(dá)情況及其對(duì)患者生存預(yù)后可能帶來(lái)的影響，旨在為結(jié)腸癌患者術(shù)前死亡風(fēng)險(xiǎn)預(yù)估、治療方案細(xì)化等尋找更多可靠的參考指標(biāo)，最終改善結(jié)腸癌患者的生存結(jié)局，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2015年1月至2017年1月在南陽(yáng)市中心醫(yī)院接受結(jié)腸癌根治術(shù)的118例原發(fā)性結(jié)腸癌患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理檢查確診為原發(fā)性結(jié)腸癌；②首次確診并接受治療；③符合結(jié)腸癌根治術(shù)指征；④臨床資料完整，配合完成治療及術(shù)后隨訪，患者或直系親屬簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他原發(fā)惡性腫瘤性疾??；②合并嚴(yán)重心肝腎功能不全、嚴(yán)重自身免疫性疾病等可能影響病情轉(zhuǎn)歸的疾?。虎廴焉锘蛘卟溉槠谂?。病例脫落標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)后突發(fā)其他疾病或者意外導(dǎo)致死亡；②隨訪期間失聯(lián)。118例患者在隨訪期脫落9例，最終109例患者作為結(jié)腸癌組，其中男性56例，女性53例；年齡36～79歲，平均（62.38±13.29）歲。取同期在南陽(yáng)市中心醫(yī)院進(jìn)行體檢且各項(xiàng)檢查結(jié)果均在正常范圍內(nèi)、既往無(wú)腫瘤病史的100名志愿者作為正常對(duì)照組，其中男性54名，女性46名；年齡34～77歲，平均（62.17±11.65）歲。結(jié)腸癌組與正常對(duì)照組的性別、年齡比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 血清miRNA-3120-5 p表達(dá)水平檢測(cè)

留取結(jié)腸癌組患者入院即刻（未經(jīng)任何治療時(shí)）、正常對(duì)照組入組即刻的空腹外周靜脈血標(biāo)本，2000 r/min離心10 min后留取上層血清標(biāo)本并凍存于-80℃冰箱中備用，具體miRNA-3120-5p水平測(cè)定步驟如下：加入Trizol提取總RNA，采用酶標(biāo)儀測(cè)定其濃度及純度，使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。以U6作為內(nèi)參進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化定量，U6上游引物5'-GCGATTGAGCTGAGAGTTA-3'，下游引物5'-TCGAACGATAAGCTGGATAGA-3'；miRNA-3120-5p上游引物 5'-ATCCGAGTAGTTAGCGCTAAGTC-3'，下游引物5'-GCTAGCTTGAACGTAGCTAGA-3'。使用聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）試劑盒進(jìn)行基因擴(kuò)增，反應(yīng)條件為：95℃10 min、95℃ 20 s、60℃ 30 s、72℃ 30 s，共42個(gè)循環(huán)。

1.3 資料收集

收集109例結(jié)腸癌組患者的臨床資料，包括性別、年齡、長(zhǎng)期煙酒史、腫瘤部位、術(shù)前是否行新輔助化療、是否合并梗阻、TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、術(shù)前癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）水平。

1.4 術(shù)后隨訪及終點(diǎn)事件判定

以結(jié)腸癌患者完成根治術(shù)后24 h作為隨訪起點(diǎn)，術(shù)后每6個(gè)月（或者患者自覺(jué)不適即刻）進(jìn)行一次腸鏡、胸部CT、腹部CT檢查，以明確患者是否出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。隨訪方式主要包括電話、門診復(fù)查等，隨訪截止日期為2020年1月1日或該日期前患者確診復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移當(dāng)日，隨訪不影響患者采取恰當(dāng)?shù)闹委煼绞健?/p>

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 血清miRNA-3120-5 p水平的比較

結(jié)腸癌組患者術(shù)前血清miRNA-3120-5p水平為（0.66±0.11），高于正常對(duì)照組的（0.51±0.09），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=10.733，P＜0.05）。

2.2 術(shù)前血清miRNA-3120-5 p水平對(duì)結(jié)腸癌根治術(shù)患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)價(jià)值

隨訪期內(nèi)，109例結(jié)腸癌根治術(shù)后患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移34例，總復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率為31.19%。ROC曲線顯示，術(shù)前血清miRNA-3120-5p水平預(yù)測(cè)結(jié)腸癌根治術(shù)患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的最佳截?cái)嘀禐?.68，曲線下面積（area under the curve，AUC）為 0.816（95%CI：0.730～0.902），對(duì)應(yīng)的靈敏度、特異度分別為69.33%、70.59%。（圖1）

圖1 術(shù)前血清miRNA-3120-5 p水平預(yù)測(cè)結(jié)腸癌根治術(shù)患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的ROC曲線

2.3 結(jié)腸癌根治術(shù)患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移影響因素的單因素分析

復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌患者的性別、年齡、長(zhǎng)期煙酒史、腫瘤部位及是否行術(shù)前新輔助化療、是否有梗阻發(fā)生情況比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌患者TNM分期、分化程度、術(shù)前CEA水平、術(shù)前血清miRNA-3120-5p水平及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 結(jié)腸癌根治術(shù)患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移影響因素的單因素分析

2.4 結(jié)腸癌根治術(shù)患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移影響因素的多因素分析

以結(jié)腸癌根治術(shù)患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移作為因變量（未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移=0，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移=1），將單因素分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)（TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、術(shù)前CEA水平、術(shù)前血清miRNA-3120-5p水平）作為自變量納入Logistic回歸模型，結(jié)果顯示，TNM分期較高、分化程度較低、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、術(shù)前CEA水平增高、術(shù)前血清miRNA-3120-5p水平較高是結(jié)腸癌根治術(shù)患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。（表2）

表2 結(jié)腸癌根治術(shù)患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移影響因素的多因素分析

3 討論

miRNA在人體多個(gè)生命過(guò)程中均扮演重要角色，且越來(lái)越多研究指出其可調(diào)控惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲。miRNA-3120-5p屬于新型miRNA，國(guó)內(nèi)雜志對(duì)其報(bào)道較少。Xu和Wen的研究指出miRNA-3120-5p可能通過(guò)靶向Krüppel樣因子4（Krüppel-like factor 4，KLF4）促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲。Hongdan和Feng的研究在結(jié)腸癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)miRNA-3120-5p的異常高表達(dá)。既往研究均提示miRNA-3120-5p參與結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展，本研究中首先對(duì)比結(jié)腸癌根治術(shù)患者術(shù)前血清miRNA-3120-5p水平與健康志愿者的差異，發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌組患者術(shù)前血清miRNA-3120-5p的水平高于正常對(duì)照組，與既往研究結(jié)論基本吻合。且進(jìn)一步分析miRNA-3120-5p水平對(duì)結(jié)腸癌根治術(shù)患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)價(jià)值發(fā)現(xiàn)，術(shù)前血清miRNA-3120-5p水平預(yù)測(cè)結(jié)腸癌根治術(shù)患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的靈敏度、特異度分別為69.33%、70.59%，提示早期測(cè)定miRNA-3120-5p水平有助于結(jié)腸癌患者的預(yù)后評(píng)估，且可能對(duì)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)較高的結(jié)腸癌患者進(jìn)一步細(xì)化治療方案以期優(yōu)化最終結(jié)局。

結(jié)腸癌根治術(shù)患者的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是一個(gè)多因素參與的結(jié)果，經(jīng)單因素、多因素分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TNM分期較高、分化程度較低、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、術(shù)前CEA水平增高、術(shù)前血清miRNA-3120-5p水平較高是結(jié)腸癌根治術(shù)患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是最為典型的惡性腫瘤病理特征，國(guó)內(nèi)外研究均明確其與腫瘤患者病情密切相關(guān)，惡性程度較高者根治術(shù)中若遺留微小殘留灶則可短期內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。CEA是典型的腫瘤標(biāo)志物，且在較多研究中被發(fā)現(xiàn)與結(jié)腸癌關(guān)系緊密。李東言等的研究指出，CEA在早期結(jié)腸癌患者的診斷中具有較高準(zhǔn)確度，其表達(dá)水平的升高與腫瘤惡性程度呈正相關(guān)。吳勝文和周蓉的研究認(rèn)為，CEA升高是ⅡA期結(jié)腸癌患者的預(yù)后不良因素，有可能被用作ⅡA期結(jié)腸癌患者需要輔助化療的高危因素之一。術(shù)前血清miRNA-3120-5p水平較高是結(jié)腸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的影響因素之一，進(jìn)一步佐證了該miRNA對(duì)結(jié)腸癌惡性演進(jìn)及不良治療結(jié)局的影響。關(guān)于miRNA-3120-5p促進(jìn)結(jié)腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制不明，有待后續(xù)更多研究深入開(kāi)展明確。

綜上所述，結(jié)腸癌根治術(shù)患者術(shù)前血清miR-NA-3120-5p水平異常增高，且對(duì)術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移具有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。高表達(dá)的miRNA-3120-5p是結(jié)腸癌根治術(shù)患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一。本研究也存在以下不足，如納入病例數(shù)有限，可能引起數(shù)據(jù)偏倚，未涉及miRNA-3120-5p對(duì)結(jié)腸癌產(chǎn)生影響的具體機(jī)制，均有待后續(xù)研究進(jìn)一步補(bǔ)充探索。