王南南, 劉發(fā)貴

(1.沂南縣檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東 臨沂 276000；2.魯南制藥集團(tuán)股份有限公司，山東 臨沂 276000)

藥物中的殘留溶劑定義為在原料藥或輔料的生產(chǎn)及在制劑制備過(guò)程中使用或產(chǎn)生而又未能完全去除的有機(jī)溶劑[1-2].殘留溶劑沒有療效[3]，但當(dāng)產(chǎn)品所含的殘留溶劑水平高于限定值時(shí)，會(huì)對(duì)后續(xù)的產(chǎn)品產(chǎn)生影響，甚至對(duì)人體、環(huán)境存在危害.因此必須將殘留溶劑控制在規(guī)定限度內(nèi)[4]，以符合產(chǎn)品規(guī)范、藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(GMP)、人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議(ICH)及藥典標(biāo)準(zhǔn)的要求[5].

醋氯芬酸是一種新型、強(qiáng)效解熱、鎮(zhèn)痛、抗關(guān)節(jié)炎藥物，臨床上應(yīng)用廣泛[6-8].由于醋氯芬酸具有羧酸基，呈一定酸性，且沸點(diǎn)較高，高溫下易分解.因此，使用直接進(jìn)樣的氣相色譜法進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)較多的樣品降解未知峰，同時(shí)系統(tǒng)存在不同程度的物質(zhì)殘留峰，嚴(yán)重影響檢測(cè).而且長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)行，也會(huì)導(dǎo)致進(jìn)樣口污染.為此，本文建立了一種采用頂空-氣相色譜法(HS-GC)測(cè)定醋氯芬酸中殘留溶劑的方法.此方法為檢測(cè)高沸點(diǎn)、呈酸(堿)性、氣相色譜系統(tǒng)易殘留的物質(zhì)提供了一定的參考.

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

氣相色譜儀，Agilent 7890B，配FID檢測(cè)器(美國(guó)安捷倫)；電子分析天平，Mettler Toledo，MS205DU；色譜柱：DB-624 30 m×0.32 mm，1.8 μm(美國(guó)安捷倫).

異丁烯(溶于異丙醚中，分析級(jí)，TCI)；甲醇(色譜級(jí)，Merck)；叔丁醇(分析級(jí)，TDEIA)；乙酸甲酯(分析級(jí)，國(guó)藥集團(tuán))；N,N-二甲基甲酰胺(色譜級(jí)，Merck)；醋氯芬酸(自制，批號(hào)：181001C，181002C).

1.2 色譜條件

6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細(xì)管色譜柱；初始溫度40 ℃，保持3 min，以20 ℃/min的速率升溫至240 ℃，保持5 min；進(jìn)樣口溫度240 ℃；分流比為20∶1；載氣為氮?dú)?；檢測(cè)器(FID)溫度250 ℃；流速為2 mL/min.頂空平衡溫度80 ℃，平衡時(shí)間30 min.

1.3 溶液配制

空白溶劑：N,N-二甲基甲酰胺.

對(duì)照品溶液：分別稱取異丁烯、甲醇、乙酸甲酯和叔丁醇各適量，精密稱定，加溶劑稀釋制成每1 mL中約含異丁烯0.01 mg、甲醇0.3 mg、乙酸甲酯0.5 mg和叔丁醇0.3 mg的混合溶液，精密量取2 mL，置頂空瓶中，密封，作為對(duì)照品溶液.

供試品溶液：取醋氯芬酸樣品(批號(hào)：181001C)約200 mg，精密稱定，置頂空瓶中，精密加入溶劑2 mL使溶解，密封，作為供試品溶液.

測(cè)試溶液：取醋氯芬酸樣品(批號(hào)：181001C)約200 mg，精密稱定，置頂空瓶中，精密加入對(duì)照品溶液2 mL使溶解，密封，作為測(cè)試溶液.

2 結(jié)果與討論

2.1 殘留溶劑分析

在分析醋氯芬酸生產(chǎn)工藝的基礎(chǔ)上，經(jīng)前期試驗(yàn)，確定本生產(chǎn)工藝條件下，醋氯芬酸可能存在的殘留溶劑有4種，分別是異丁烯、甲醇、乙酸甲酯和叔丁醇.除異丁烯外，其他3種均為ICH相關(guān)指導(dǎo)原則明確需要控制的溶劑.異丁烯常溫條件下為氣體.目前國(guó)內(nèi)外報(bào)道的常見原料藥中存在常溫為氣體的物質(zhì)主要為氯代烷，異丁烯相關(guān)報(bào)道較少.

異丁烯的危害多見于窒息、弱迷醉和弱刺激.長(zhǎng)期較低濃度接觸的情況下，可能會(huì)出現(xiàn)頭痛、頭暈、乏力的不適.因此應(yīng)控制異丁烯在醋氯芬酸中的殘留量，其限度的確定參考毒理學(xué)數(shù)據(jù)的相關(guān)資料[9].

2.2 專屬性

取空白溶劑、對(duì)照品和供試品溶液,分別依照本法測(cè)定.試驗(yàn)結(jié)果表明，空白溶劑對(duì)各溶劑測(cè)定無(wú)干擾，供試品溶液色譜圖中無(wú)未知峰.殘留溶劑峰之間的分離度大于2.0，方法專屬性良好.試驗(yàn)結(jié)果如表1所列.

表1 專屬性

2.3 定量限和檢測(cè)限

取異丁烯、甲醇、乙酸甲酯和叔丁醇對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋，以S/N約為10和3，分別作為定量限和檢測(cè)限.異丁烯、甲醇、乙酸甲酯和叔丁醇的定量限分別為0.042、2.407、1.001、1.834 μg/mL，檢測(cè)限分別為0.013、0.722、0.300、0.550 μg/mL.

2.4 線性與范圍

分別取各溶劑的對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，配制各溶劑一系列的梯度濃度，進(jìn)行試驗(yàn).以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.結(jié)果各溶劑在試驗(yàn)范圍內(nèi)，質(zhì)量濃度和峰面積線性關(guān)系良好(r均大于0.999).結(jié)果如表2所列.

表2 線性試驗(yàn)結(jié)果

2.5 精密度

由不同分析實(shí)驗(yàn)人員于不同日期使用不同的儀器，分別取對(duì)照品和測(cè)試溶液進(jìn)行試驗(yàn)，按外標(biāo)法計(jì)算測(cè)試溶液中各殘留溶劑的含量.結(jié)果異丁烯、甲醇、乙酸甲酯和叔丁醇含量的RSD分別為4.3%、3.8%、4.8%和4.6%(n=12)，表明該方法精密度良好.

2.6 準(zhǔn)確度

參照“1.3溶液配制”，分別配制含各溶劑3個(gè)梯度濃度(限度的80%、100%、120%)的測(cè)試溶液進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果異丁烯、甲醇、乙酸甲酯和叔丁醇回收率RSD值分別為6.9%、4.2%、4.5%、4.9%(n=9)，具體結(jié)果如表3所列.試驗(yàn)結(jié)果表明本法準(zhǔn)確度良好.

表3 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.7 耐用性

通過(guò)改變初始柱溫、進(jìn)樣口溫度和流速，考察色譜條件發(fā)生微小變化時(shí)，各溶劑測(cè)定結(jié)果的變化.結(jié)果異丁烯、甲醇、乙酸甲酯和叔丁醇的測(cè)得含量RSD值分別為7.8%、6.6%、7.7%和8.7%，表明本法的耐用性良好.

3 實(shí)際樣品檢測(cè)

取空白溶劑、對(duì)照品和兩批次供試品溶液分別依照本法測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算各批次樣品中殘留溶劑的含量，具體結(jié)果如表4所列.試驗(yàn)結(jié)果表明，兩批次樣品中殘留溶劑的含量均合格.

表4 樣品檢測(cè)結(jié)果

4 結(jié)論

目前，藥品中殘留溶劑的控制愈加受到重視.如何更加快捷、準(zhǔn)確的檢測(cè)藥物中殘留溶劑，是每一名制藥人不斷努力的目標(biāo).本文采用HS-GC法建立了醋氯芬酸中殘留溶劑檢測(cè)的方法，避免了直接進(jìn)樣法帶來(lái)的一系列問題，如易殘留、溫度高、易降解等.經(jīng)系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果表明本法的專屬性良好、準(zhǔn)確度高，可用于醋氯芬酸中殘留溶劑的測(cè)定.同時(shí)本法為首次應(yīng)用于醋氯芬酸中異丁烯殘留量的檢測(cè)方法，這為其他藥物中異丁烯的檢測(cè)提供了較好的參考.