姜黎梅 王英 郭小鋒

(寶雞市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，陜西 寶雞 721000)

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)一種發(fā)病率較高的與年齡、環(huán)境、遺傳等因素相關(guān)的進展緩慢的神經(jīng)退行性疾病，患者主要臨床表現(xiàn)為震顫、運動遲緩、僵硬等。帕金森病末期容易進展為帕金森癡呆(parkinson’s disease dementia，PDD)，嚴(yán)重影響患者的正常生活[1]。由于PD早期癥狀相對隱匿，疾病進展緩慢，疾病不易在早期確診，多數(shù)患者就診時已處于病理損害的中晚期階段。PDD被認為是皮質(zhì)性癡呆及皮質(zhì)下癡呆的典型代表，若能在早期對PD患者病情及時診斷和評估，對于控制患者病情，減少PDD疾病的發(fā)生和進展具有積極意義。重組人帕金森病蛋白7(recombinant human parkinson disease protein 7，PARK7)具有抗氧化應(yīng)激反應(yīng)、蛋白水解酶功能與PD患者氧化應(yīng)激反應(yīng)存在密切關(guān)系[2]。血漿外泌體miRNA被證實與機體多種疾病存在密切關(guān)系，研究[3]表明，在PD患者中存在miR-331-5p普遍高表達的情況?？寡趸甘菣C體防止氧化應(yīng)激、清除活性自由基的一類酶，PDD患者較PD早期多巴胺神經(jīng)元抗氧化能力和氧化應(yīng)激失衡更嚴(yán)重，導(dǎo)致抗氧化酶水平明顯異常。本文主要探討PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與PDD患者精神行為癥狀的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取我院2018年10月至2020年9月收治的80例PDD患者，納入患者均經(jīng)臨床檢查確診，符合原發(fā)性PD及PDD的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；患者及家屬知情同意，自愿簽署知情同意書；臨床資料完整，能夠完成相關(guān)量表評價。已排除肝腎功能異常者；合并腦部創(chuàng)傷史、腦血管疾病、免疫性疾病、急慢性感染、血液系統(tǒng)疾病及惡性腫瘤患者；合并其他神經(jīng)退行性疾??；文盲、精神系統(tǒng)異常及其他無法配合研究者。將所有患者依照臨床癡呆評分量表(CDR)[5]分為輕度組(CDR評分0.5或1分，n=50)和中重度組(CDR評分2或3分，n=30)，其中輕度組男29例，女21例，年齡47～79歲，平均(67.2±3.8)，病程0.5～10年，平均(5.1±1.3)年，中重度組男18例，女12例，年齡49～80歲，平均(68.1±4.1)歲，病程0.5～9年，平均(4.9±1.4)年。另選取50名同期于我院接受體檢的健康志愿者作為對照組，其中男30例，女20例，年齡45～85歲，平均(68.3±4.4)歲。三組一般比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究取得我院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2方法 有研究對象采用神經(jīng)精神調(diào)查問卷(NPI)評估精神行為癥狀，分?jǐn)?shù)越高，癥狀越嚴(yán)重。采用統(tǒng)一PD評定量表運動檢查(UPDRS)評估運動功能，評分越低，運動功能越好。采用蒙特利爾認知評估量表(MoCA)及簡易精神狀態(tài)檢查表(MMSE)評估認知功能，MoCA量總分30分，分?jǐn)?shù)越高認知功能越好；MMSE量表總分30分，分?jǐn)?shù)越高，認識功能越高。并采用生活活動能力量表(ADL)評估日常生活活動能力，分?jǐn)?shù)越高，能力越好。所有研究對象(包括對照組)均于入院當(dāng)日清晨抽取5 mL靜脈血，3 000 r/min離心分離血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay ,ELISA)測定炎癥因子C反應(yīng)蛋白(CRP)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、單核細胞趨化蛋白1(MCP-1)、抗氧化酶指標(biāo)谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)及PARK7水平，試劑盒均購自日立高科技貿(mào)易(上海)有限公司，嚴(yán)格執(zhí)行說明書各項操作。采用RT-qPCR法測定血清外泌體miR-331-5p水平，取離心獲得的血清3 000 r/min離心15 min清除細胞碎片，TRI試劑分離血漿RNA。采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(購自北京諾博萊德科技有限公司)反向轉(zhuǎn)錄合成cDNA，采用美國Applied Biosystems7900實時聚合酶鏈反應(yīng)機檢測血漿外泌體miR-331-5p表達，引物序列：miR-331-5p，上游：5’-AUACCUA-3’，下游：5’-CGCAACA-3’；GADPH，上游：5’-GTCAACGGATTG-GTCTGTATT-3’，下游：5’-AGTCTTCTGG-GTGGCAGTAT-3’，試劑盒購自丹麥Denmark公司，反應(yīng)條件：95℃ 10 min，95℃ 15s，40個循環(huán)，60℃延伸1 min。采用2-△△Ct檢測miR-331-5p表達。

2 結(jié) 果

2.1問卷調(diào)查評分的比較 中重度組患者NPI、UPDRS評分顯著高于輕度組和對照組，MoCA、MMSE、ADL評分均顯著低于輕度組和對照組(P均<0.05)。見表1。

表1 各組問卷調(diào)查評分結(jié)果的比較分,n=50]

2.2血清炎癥因子水平的比較 中重度組的各項血清炎癥因子水平顯著高于輕度組(P<0.05)；輕度組、中重度組的各項血清炎癥因子水平均顯著高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 各組血清炎癥因子水平的比較

2.3血清PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平比較 中重度組患者血清PARK7、miR-331-5p表達水平顯著高于輕度組，GSH-PX、SOD、CAT水平顯著低于輕度組(P<0.05)。輕度組和中重度組患者血清PARK7、miR-331-5p表達水平顯著高于對照組，GSH-PX、SOD、CAT水平顯著低于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 各組血清PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平的比較

2.4PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與各血清炎癥因子的相關(guān)性 PARK7、miR-331-5p表達與血清炎癥因子CRP、TNF-α、MCP-1存在明顯正相關(guān)性(P<0.05)；GSH-PX、SOD、CAT水平與血清炎癥因子CRP、TNF-α、MCP-1存在明顯負相關(guān)性(P<0.05)。見表4。

表4 PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與各血清炎癥因子的相關(guān)性

2.5PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與各問卷量表評分的相關(guān)性 PARK7、miR-331-5p與NPI、UPDRS評分存在明顯正相關(guān)性，與MoCA、MMSE、ADL存在明顯負相關(guān)性(P<0.05)；GSH-PX、SOD、CAT與NPI、UPDRS評分存在明顯負相關(guān)性，與MoCA、MMSE、ADL存在明顯正相關(guān)性(P<0.05)。見表5。

表5 PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與各問卷量表評分的相關(guān)性

3 討 論

研究[6]指出，PD患者由于多巴胺分泌不足，從而影響患者的計劃能力、工作記憶、注意力等執(zhí)行能力。多巴胺與神經(jīng)末梢的促性腺激素釋放激素存在軸突聯(lián)系，多巴胺能抑制其分泌而影響人的情緒。本研究結(jié)果顯示，帕金森伴中重度癡呆患者NPI、UPDRS評分顯著高于帕金森伴輕度癡呆患者，MoCA、MMSE、ADL評分均顯著低于輕度癡呆患者。提示帕金森伴癡呆患者存在明顯的認知功能、運動功能障礙及精神行為癥狀異常，嚴(yán)重降低了患者的日常生活活動能力。

PD患者多巴胺分泌不足還會導(dǎo)致機體抗氧化物過量消耗，使生物膜受到氧化自由基的破壞，進而引發(fā)機體氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，影響神經(jīng)元代謝異常，導(dǎo)致PD患者癡呆的發(fā)生并進一步影響其精神行為癥狀[7]。本研究中，中重度PDD患者機體CRP、TNF-α及MCP-1水平較輕度PDD患者及健康對照人群均明顯升高。研究[8]表明，炎癥反應(yīng)與PD發(fā)病機制密切相關(guān)，促炎性細胞因子對于多巴胺能神經(jīng)元具有毒性作用，導(dǎo)致神經(jīng)元細胞損傷凋亡。CRP為非特異性炎癥反應(yīng)生物學(xué)標(biāo)志物，CRP升高可導(dǎo)致腦內(nèi)神經(jīng)細胞損傷。PD患者腦內(nèi)小膠質(zhì)細胞激活，促使CRP等炎性細胞因子大量釋放和聚集。TNF-α可促進小膠質(zhì)細胞合成集落刺激因子參與炎癥反應(yīng)，TNF-α還能影響細胞鈣離子水平，造成細胞損傷。MCP-1參與了機體炎癥反應(yīng)的多個環(huán)節(jié)，研究認為MCP-1與PD患者抑郁程度、認知功能障礙等存在明顯相關(guān)性。因此，炎癥水平與PDD患者疾病發(fā)生、發(fā)展及精神行為癥狀存在密切關(guān)系。

氧化應(yīng)激是導(dǎo)致PDD發(fā)生的重要因素，PARK7為PD發(fā)病早期常染色體隱性基因，可有效發(fā)揮蛋白水解酶及抗氧化應(yīng)激作用[9]。PARK7可作為機體氧化應(yīng)激感應(yīng)器，保護神經(jīng)元不受氧化應(yīng)激損害[10-11]。本研究中，PDD患者中PARK7水平明顯升高，GSH-PX、SOD、CAT明顯降低，且隨著病情進展各指標(biāo)變化更顯著。提示隨著PDD疾病進展，機體氧自由基大量產(chǎn)生，而抗氧化酶水平降低，導(dǎo)致氧化應(yīng)激反應(yīng)增強，進而損傷黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元，導(dǎo)致PDD神經(jīng)行為特征等病情發(fā)展。miR-331-5p與PD疾病嚴(yán)重程度存在密切關(guān)系。另有研究[12]證實，miR-331-5p與PD患者機體氧化應(yīng)激的發(fā)展存在一定的關(guān)聯(lián)。本研究中，PDD患者同樣存在miR-331-5p表達明顯升高的情況。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與炎癥因子及各量表評分存在明顯相關(guān)性。PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與PDD更嚴(yán)重機體抗氧化應(yīng)激能力密切相關(guān)，反映了PDD患者病情變化，影響了患者的精神行為癥狀的進展。

綜上所述，PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與帕金森癡呆患者炎癥水平及精神行為癥狀有關(guān)，檢測其水平有助于PDD患者的臨床診斷和治療。但是對于藥物治療后輕度組和中重度組PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平變化情況，及其與帕金森病患者精神行為癥狀是否存在一致性變化仍有待進一步研究。