李長生 薛永飛 袁小筍 冀 葉 任中海

肺癌是我國發(fā)病率及死亡率最高的惡性腫瘤，其中超過80%患者為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)[1]。NSCLC早期確診率低，大部分患者于局部晚期或晚期確診而無法行手術(shù)根治，預(yù)后較差，NSCLC早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷對患者治療及預(yù)后尤為重要[2]。隨著分子生物學(xué)研究的迅速發(fā)展，癌癥研究已進入基因組學(xué)時代，了解癌癥基因變化從而輔助診斷癌癥、聯(lián)合臨床病理學(xué)參數(shù)評估預(yù)后成為癌癥研究熱點[3]。近年臨床發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞分裂周期中紡錘體檢查點功能缺陷會引起細(xì)胞染色體不穩(wěn)定和非整倍體傳代，引起細(xì)胞惡變，這是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞存在的主要原因之一。苯并咪唑出芽抑制解除同源物蛋白-1(budding uninhibited by benzimidazoles-1，BUB1)是紡錘體檢測點蛋白，通過調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為參與多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展[4-5]。此外，還有研究[6]發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄活化因子(AP-1)家族成員的Jun二聚化蛋白2(jun dimerization protein 2，Jdp2)，可與原癌基因Fos、活化轉(zhuǎn)錄因子ATF形成Jun-Jun、Jun-Fos和Jun-ATF 二聚體，形成的二聚體是AP-1抑制蛋白，參與細(xì)胞分化、衰老、凋亡等過程，抑制癌基因活性，在多種腫瘤細(xì)胞中均呈低表達?；诖?，本研究分析BUB1、Jdp2在非小細(xì)胞肺癌中的表達水平及其與臨床病理參數(shù)、預(yù)后的相關(guān)性，探討二者在NSCLC中的應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年6月至2017年6月于我院經(jīng)外科手術(shù)切除且經(jīng)病理證實的72例NSCLC癌組織標(biāo)本和相匹配的癌旁組織(腫瘤邊緣>5 cm的組織)標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)術(shù)后病理確診為NSCLC；首次NSCLC確診；術(shù)前未接受放化療、靶向藥物治療等抗癌治療；臨床資料完整；對研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤或存在NSCLC遠處轉(zhuǎn)移；標(biāo)本采集困難或不正確；合并嚴(yán)重心腦血管疾病等危急重癥；術(shù)后3年失訪；術(shù)前存在全身性炎癥反應(yīng)。72例患者中男性46例，女性26例，年齡42～80歲，平均(63.27±7.31)歲；體質(zhì)量指數(shù)19～26 kg/m2，平均(21.59±2.32)kg/m2；腫瘤直徑≤3 cm 32例、>3 cm 40例；腫瘤TNM分期[7]：Ⅰ期24例、Ⅱ期21例、Ⅲ期27例；分化程度：低分化28例、中分化24例、高分化20例；病理類型：腺癌46例、鱗癌26例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例。

1.2 方法

1.2.1 基線資料收集 收集患者臨床資料，統(tǒng)計患者性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、腫瘤直徑、腫瘤TNM分期、分化程度、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及隨訪3年生存情況，隨訪截止至2020年6月。

1.2.2 組織取材 患者均接受手術(shù)治療，手術(shù)切除NSCLC腫瘤組織和距腫瘤邊緣5 cm以上的癌旁正常肺組織，腫瘤組織進行病理學(xué)檢查，確診NSCLC。癌組織與癌旁組織均以10%中性甲醛固定，進行常規(guī)酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋處理，制成2 μm的層厚切片，置于組織漂烘儀的水槽中展平，載玻片撈片，放入60 ℃電熱恒溫烤箱中烤片1 h，固定組織切片。

1.2.3 BUB1、Jdp2表達檢測及結(jié)果判讀 (1)采用免疫組化法檢測BUB1、Jdp2在癌組織及癌旁組織中的表達，操作步驟包括：脫蠟、脫水、高壓抗原熱修復(fù)、滅活內(nèi)源性過氧化物酶、加入一抗、加入二抗、二氨基聯(lián)苯胺顯色、蘇木精復(fù)染、梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片；封片后晾干鏡檢，觀察BUB1、Jdp2蛋白表達。(2)結(jié)果判讀由資深病理科醫(yī)師進行，蛋白表達判定標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞核中出現(xiàn)黃染為陽性染色，各切片于光學(xué)顯微鏡下(×400)選取5個不同視野，每個視野至少含100個細(xì)胞，根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比(BUB1：≤5%計0分，>5%～25%計1分，>25%～75%計2分，>75%計3分；Jdp2：≤5%計0分，>5%～25%計1分，>25%～50%計2分，>50%計3分)和染色程度(無染色計0分，淺黃色計1分，黃色至棕黃色計2分，棕褐色至褐色計3分)分別評分，BUB1蛋白表達將兩種評分相加獲得結(jié)果，Jdp2蛋白表達將兩種評分相乘獲得評分結(jié)果，均以<2分為陰性(-)，≥2分為陽性(+)。

1.3 觀察指標(biāo)

比較癌組織、癌旁組織中BUB1、Jdp2蛋白陽性表達率；比較BUB1、Jdp2蛋白陽性表達和陰性表達患者的一般資料。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 BUB1、Jdp2蛋白在癌組織、癌旁組織中表達情況

BUB1蛋白在癌組織中的陽性表達率高于癌旁組織(P<0.05)；Jdp2蛋白在癌組織中陽性表達率低于癌旁組織(P<0.05)。見表1。

表1 BUB1、Jdp2蛋白在癌組織、癌旁組織中的表達情況(例，%)

2.2 BUB1、Jdp2蛋白表達情況與NSCLC患者臨床病理參數(shù)關(guān)系

BUB1蛋白陽性表達與患者的臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)；Jdp2蛋白陽性表達與患者的腫瘤直徑、臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 BUB1、Jdp2蛋白表達情況與NSCLC患者臨床病理參數(shù)、預(yù)后的關(guān)系(例，%)

2.3 BUB1、Jdp2蛋白表達情況與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系

隨訪3年，NSCLC生存患者BUB1蛋白陽性表達率低于死亡患者，Jdp2蛋白的陽性表達率高于死亡患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 BUB1、Jdp2蛋白表達情況與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系(例，%)

2.4 BUB1、Jdp2蛋白表達與NSCLC患者臨床病理參數(shù)、預(yù)后的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析顯示，BUB1蛋白表達上調(diào)與NSCLC臨床分期等級、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)(γ=0.286、0.427、0.368，P均<0.05)，與預(yù)后生存負(fù)相關(guān)γ=-0.296，P<0.05)；Jdp2蛋白表達上調(diào)與NSCLC腫瘤直徑、臨床分期等級、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移負(fù)相關(guān)(γ=-0.725、-0.509、-0.355、-0.317，P均<0.05)，與預(yù)后生存正相關(guān)(γ=0.294，P<0.05)。見表4。

表4 BUB1、Jdp2蛋白表達與NSCLC患者臨床病理參數(shù)、預(yù)后的相關(guān)性

3 討論

癌癥的發(fā)生是多基因、多步驟、多階段的過程，涉及不同的基因及不同的變化形式，基因變化與基因間的信號傳遞均能夠為癌癥治療提供具有敏感性的信息，從分子水平上分析腫瘤基因變化，能夠輔助癌癥治療及預(yù)后判斷，甚至更能為新的治療靶點提供方向，具有重要意義[8]。隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，腫瘤基因組學(xué)數(shù)據(jù)測序工程的完成，使得臨床提高了對癌癥的分子特征認(rèn)知，中晚期NSCLC治療策略已由基于組織病理學(xué)的化療轉(zhuǎn)向基于致癌因素的個體化精準(zhǔn)治療，也迫切需要癌癥基因變化及癌癥基因表達的相關(guān)蛋白變化信息，指導(dǎo)臨床、評估預(yù)后[9]。

BUB1蛋白是紡錘體檢查點蛋白，在細(xì)胞有絲分裂過程中能夠調(diào)控細(xì)胞有絲分裂的激活和監(jiān)控，保證染色體的正常分離。當(dāng)有絲分裂檢查點功能缺陷時染色體異常分離形成非整倍體，從而促進腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，這是腫瘤的本質(zhì)特征之一[10]。此外，BUB1還能夠監(jiān)控有絲分裂過程中微管與著絲點的結(jié)合、免疫細(xì)胞腫瘤內(nèi)浸潤，影響機體微環(huán)境和血管的生成[11]；目前臨床研究已證實BUB1通過多種分子生物學(xué)機制參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，與前列腺癌、胃癌、乳腺癌等多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[12-14]，但目前在其NSCLC中的作用尚不明確。Jdp2蛋白則是通過SOS 募集系統(tǒng)從AP-1的Jun亞基分離出來的蛋白，是AP-1的抑制物，可調(diào)控相應(yīng)區(qū)域組蛋白轉(zhuǎn)錄、修飾、結(jié)合和激活的過程，具有抑制c-Jun、c-Fos、ATF等癌基因活性的作用[15]。有研究指出[16]，抑癌基因Jdp2能夠抑制肝細(xì)胞癌，與患者臨床病理特征存在潛在聯(lián)系，可作為評估肝細(xì)胞癌預(yù)后的良好指標(biāo)。陳蕾等[17]研究指出，Jdp2在NSCLC中呈低表達，與患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后均有關(guān)。但目前關(guān)于Jdp2在NSCLC中的應(yīng)用價值報道較少，值得臨床關(guān)注?；贐UB1、Jdp2表達變化在NSCLC中的應(yīng)用現(xiàn)狀，本研究分析二者表達水平與NSCLC患者病理學(xué)參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系，以期能夠輔助NSCLC臨床診療及預(yù)后評估。本研究回顧性分析72例NSCLC患者癌組織、癌旁組織中BUBI、Jdp2蛋白的陽性表達情況，發(fā)現(xiàn)在癌組織中BUB1高表達、Jdp2低表達，在癌旁組織中的表達則相反，且NSCLC患者中BUB1、Jdp2表達情況不同的患者在臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移資料及預(yù)后存在明顯差異，Jdp2表達不同的患者在腫瘤直徑上也存在明顯差異，表明BUB1、Jdp2均參與了NSCLC的發(fā)生與發(fā)展，且與臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后有關(guān)。進一步進行相關(guān)性分析，顯示BUB1蛋白表達上調(diào)與NSCLC臨床分期等級、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)，與預(yù)后生存負(fù)相關(guān)；Jdp2蛋白表達上調(diào)與NSCLC腫瘤直徑、臨床分期等級、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移負(fù)相關(guān)，與預(yù)后生存正相關(guān)，說明BUB1蛋白表達上調(diào)、Jdp2蛋白表達下調(diào)均預(yù)示NSCLC患者腫瘤細(xì)胞迅速增殖，腫瘤惡性程度增加，提高了腫瘤臨床分期、分化程度，同時促進了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，不利于患者預(yù)后，與彭鳳翔等[18]研究結(jié)果、潘峰[19]研究結(jié)果一致。本研究雖表明BUB1蛋白、Jdp2蛋白可作為NSCLC病情及預(yù)后評估的檢測指標(biāo)，但僅采用免疫組化結(jié)果進行分析，對二者在NSCLC中高表達和低表達的具體機制尚不清楚，有待后續(xù)展開深入研究。

綜上所述，經(jīng)免疫組化檢測證實BUB1、Jdp2蛋白在NSCLC癌組織中對應(yīng)呈現(xiàn)高表達和低表達，二者表達情況與患者腫瘤直徑(僅Jsp2)、臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)，可作為NSCLC的檢測指標(biāo)用于指導(dǎo)臨床治療。