孫元杰 牛銀萍 關(guān)紅梅

急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)是常見(jiàn)的一種兒童血液系統(tǒng)惡性腫瘤，多發(fā)于學(xué)齡期兒童和學(xué)齡前期兒童。依照不同危險(xiǎn)強(qiáng)度分為低危、中危和高危，不同危險(xiǎn)度的ALL治療強(qiáng)度也有所不同，預(yù)后情況也有所不同。但是對(duì)ALL患兒進(jìn)行長(zhǎng)期化療之后會(huì)引發(fā)嚴(yán)重不良反應(yīng)情況，特別是對(duì)高危患兒來(lái)說(shuō)，高強(qiáng)度化療的不良反應(yīng)會(huì)更加嚴(yán)重[1]。因此需要不斷發(fā)掘新的診斷因素，對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病患兒危險(xiǎn)程度精確診斷，并制定合理的治療方案，提升對(duì)ALL患兒的治療效果，減少不良反應(yīng)的發(fā)生[2]。因此本文選取60例急性淋巴細(xì)胞白血病患兒作為研究對(duì)象，分析ABCB1基因C3435T多態(tài)性與兒童急性淋巴細(xì)胞白血病發(fā)病情況的相關(guān)性，具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2018年7月到2021年3月共收治的60例急性淋巴細(xì)胞白血病患兒作為研究對(duì)象，依照中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)小兒專業(yè)委員會(huì)急性淋巴細(xì)胞白血病2015方案(CCCG.ALL.2015)的危險(xiǎn)度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[3]，將患兒分為低危組(n=25)和中高危組(n=35)。入選標(biāo)準(zhǔn)：所有患兒經(jīng)分子生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、免疫學(xué)以及形態(tài)學(xué)等相關(guān)檢驗(yàn)確診為急性淋巴細(xì)胞白血?。荒挲g在1～14歲之間；所有患兒及其家屬均知情并簽署同意書(shū)；本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。2組患兒一般資料對(duì)比無(wú)明顯差異，如表1所示。

表1 一般資料對(duì)比分析

1.2 方法

用無(wú)菌EDTA抗凝管留取ALL患兒和正常兒童骨髓血2 ml，加入Ficoll分離液(天津生物科技有限公司)，參照說(shuō)明書(shū)提取骨髓單個(gè)核細(xì)胞。

用TRIzol試劑(美國(guó)Invitro.gen公司)從骨髓標(biāo)本中提取RNA。用QuantiTect(德國(guó)ChiagenGmbH公司)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)基因?yàn)閰⒄栈颍胵RT-PCR進(jìn)行cDNA定量檢測(cè)。ABCB1C3435T位點(diǎn)上游引物序列為5'-TTCAGCTGCTTGATGGCAAA-3'，下游引物5'-AGGCAGTGACTCGATGAAGG-3'。引物進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)得到擴(kuò)增產(chǎn)物[4-6]。

PCR擴(kuò)增條件：C3435T，95 °C預(yù)變性5 min后進(jìn)行下序循環(huán)，94 °C變性30 s，60 °C退火15 s，72 °C延伸30 s，共32個(gè)循環(huán)，最后72 °C延伸8 min；C3435T，95 °C預(yù)變性5 min后進(jìn)行下序循環(huán)，94 °C變性30 s，54 °C退火15 s，72 °C延伸30 s，共32個(gè)循環(huán)，最后72 °C延伸10 min。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組患兒ABCB1基因C3435T位點(diǎn)對(duì)比分析

2組患兒ABCB1基因C3435T位點(diǎn)中CT、CC點(diǎn)位對(duì)比無(wú)明顯差異(P>0.05)，TT點(diǎn)位對(duì)比差異顯著(P<0.05)，如表2所示。

表2 2組患兒ABCB1基因C3435T位點(diǎn)對(duì)比分析/例

2.2 不同點(diǎn)位ABCB1基因C3435T的急性淋巴細(xì)胞白血病患兒生存情況對(duì)比分析

不同點(diǎn)位ABCB1基因C3435T的急性淋巴細(xì)胞白血病患兒生存情況對(duì)比無(wú)明顯差異(P>0.05)，如表3所示。

表3 不同點(diǎn)位ABCB1基因C3435T的急性淋巴細(xì)胞白血病患兒生存情況對(duì)比分析/例

2.3 60例急性淋巴細(xì)胞白血病患兒ABCBl基因多態(tài)性相關(guān)指標(biāo)分析

60例急性淋巴細(xì)胞白血病患兒ABCBl基因多態(tài)性不同點(diǎn)位患兒的性別、年齡、血小板減少患兒、中性粒細(xì)胞減少患兒對(duì)比均無(wú)明顯差異(P>0.05)，ABCBl基因多態(tài)性不同點(diǎn)患兒的血紅蛋白減少情況對(duì)比差異顯著(P>0.05)，如表4所示。

表4 急性淋巴細(xì)胞白血病患兒ABCBl基因多態(tài)性的相關(guān)指標(biāo)分析

2.4 兒童急性淋巴細(xì)胞白血病發(fā)病情況的Logistic回歸分析結(jié)果

兒童急性淋巴細(xì)胞白血病發(fā)病情況與血小板、血紅蛋白、中性粒細(xì)胞、C3435T等位基因、危險(xiǎn)度均有明顯關(guān)系(P<0.05)，如表5所示。

表5 兒童急性淋巴細(xì)胞白血病發(fā)病情況的Logistic回歸分析結(jié)果

3 討論

急性淋巴細(xì)胞白血病的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，研究表明[7-8]，環(huán)境暴露和遺傳背景是ALL發(fā)生的兩個(gè)重要因素，其中遺傳為主要因素。ABCB1基因單核苷酸的多態(tài)性會(huì)對(duì)P-糖蛋白的功能與表達(dá)產(chǎn)生影響，ABCB1基因C3435T多態(tài)性對(duì)于癌細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)及化療藥物體內(nèi)代謝具有一定影響，導(dǎo)致ALL治愈率比較低。還有研究認(rèn)為[9-10]，ABCB1基因C3435T多態(tài)性對(duì)ALL的易感性具有一定的影響。這些研究結(jié)果出現(xiàn)了差異，可能與ALL患兒的多藥耐藥機(jī)制復(fù)雜相關(guān)，并不是單一因素導(dǎo)致的，可能還存在其他的機(jī)制。

本研究結(jié)果表明，2組患兒ABCB1基因C3435T位點(diǎn)中CT、CC點(diǎn)位對(duì)比無(wú)明顯差異(P>0.05)，TT點(diǎn)位對(duì)比差異顯著(P<0.05)。任艷飛等[11]研究表示，不同危險(xiǎn)程度的ALL患者ABCB1基因C3435T位點(diǎn)無(wú)明顯區(qū)別，本研究結(jié)果中TT點(diǎn)位在不同組別患者中差異顯著，與相關(guān)研究具有一定差異，這可能與本研究基數(shù)較小有關(guān)，還有待進(jìn)一步研究。不同點(diǎn)位ABCB1基因C3435T的急性淋巴細(xì)胞白血病患兒生存情況對(duì)比無(wú)明顯差異(P>0.05)，這是因?yàn)椴煌c(diǎn)位ABCB1基因C3435T多態(tài)性與ALL患兒的生存率無(wú)明顯關(guān)系，可能與患兒的治療情況具有相關(guān)性[12]。60例急性淋巴細(xì)胞白血病患兒ABCBl基因多態(tài)性不同點(diǎn)位患兒的性別、年齡、血小板減少患兒、中性粒細(xì)胞減少患兒對(duì)比均無(wú)明顯差異(P>0.05)，ABCBl基因多態(tài)性不同點(diǎn)位患兒的血紅蛋白減少情況對(duì)比差異顯著(P>0.05)，在不同ABCBl基因C3435T多態(tài)性的點(diǎn)位患兒中，只有血紅蛋白減少情況差異顯著，這說(shuō)明ABCBl基因C3435T多態(tài)性會(huì)對(duì)ALL患兒的臨床相關(guān)指標(biāo)產(chǎn)生一定影響。相關(guān)研究表明[13-15]，ABCB1 C3435T位點(diǎn)基因多態(tài)性影響ABCB1基因的表達(dá)、表達(dá)產(chǎn)物P-gp的功能以及P-gp對(duì)底物的代謝和處置，而P-gp可阻礙藥物的吸收、滲透和保留，與本研究結(jié)果具有一定相關(guān)性；兒童急性淋巴細(xì)胞白血病發(fā)病情況與血小板、血紅蛋白、中性粒細(xì)胞、C3435T等位基因、危險(xiǎn)度均有明顯關(guān)系(P<0.05)，由此證明，除ALL發(fā)病情況基本判定指標(biāo)之外，與ABCB1 C3435T位點(diǎn)基因多態(tài)性具有明顯的相關(guān)性。

綜上所述，ABCBl基因C3435T多態(tài)性與兒童ALL可能存在著一定關(guān)系，具有一定的參考價(jià)值。