石紅，王毅

寶雞市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西 寶雞 721008

沙門菌屬細(xì)菌是寄生在動(dòng)物和人類腸道中的常見菌種，沙門菌屬細(xì)菌感染為臨床常見的食源性疾病和人畜共患病，可引起多種臨床表現(xiàn)，嚴(yán)重威脅機(jī)體健康安全[1]。沙門菌屬細(xì)菌的型別較多，抗原結(jié)構(gòu)和血清型較復(fù)雜，相關(guān)研究報(bào)道，腹瀉患者不同血清型的沙門菌屬細(xì)菌的致病力有明顯差異[2]?？股厥桥R床治療沙門菌屬細(xì)菌感染的常用手段，但近年來隨著抗生素的濫用，沙門菌屬細(xì)菌的耐藥率不斷增加，增加臨床治療難度[3]。朱德永等[4]研究也表明，目前沙門菌屬細(xì)菌的多重耐藥問題較嚴(yán)重，其對(duì)三代頭孢藥物和環(huán)丙沙星的敏感性較低。臨床加強(qiáng)沙門菌屬細(xì)菌的藥敏監(jiān)測(cè)對(duì)此類細(xì)菌耐藥性傳播的抑制有重要影響，且可指導(dǎo)臨床用藥。本研究主要分析183 株沙門菌屬細(xì)菌的血清型分布、分子分型特征和耐藥性情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料183株沙門菌屬細(xì)菌來自寶雞市中心醫(yī)院2016年2月至2020年10月門診及住院患者的臨床送檢標(biāo)本，其中血液標(biāo)本50 例，大便標(biāo)本127例，尿液標(biāo)本4 例，其他引流液標(biāo)本2 例；其中女性89例，男性94例；年齡：≤10歲4例，11～20歲9例，21～30歲65例，31～40歲31例，41～50歲25例，51～60歲42例，＞60歲7例。183例患者年齡、性別信息均齊全。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌鑒定及血清型分型將所有患者送檢標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)，取無菌棉拭子蘸取可疑部分并立即送至實(shí)驗(yàn)室。用亞硝酸鹽增殖液進(jìn)行接種，37℃溫度下孵化24 h，并同時(shí)接種麥康凱瓊脂培養(yǎng)基和HE 瓊脂培養(yǎng)基。36℃、24 h后查看細(xì)菌生長(zhǎng)狀態(tài)，通過初步生化、細(xì)菌分離得到沙門菌屬，并進(jìn)行分型。

1.2.2 藥物敏感性試驗(yàn)全部試驗(yàn)菌株均通過紙片擴(kuò)散法進(jìn)行體外藥物敏感性試驗(yàn)。首先制備接種菌液，制作接種平板，貼紙片并賦育。培養(yǎng)后將平板取出，用游標(biāo)卡尺測(cè)定抑菌環(huán)直徑，參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)菌株對(duì)常見抗生素的敏感性結(jié)果[5]。

1.2.3 PFGE 分型首先進(jìn)行膠塊制備，再裂解沙門菌屬細(xì)菌，洗膠塊，膠塊內(nèi)DNA酶切、加樣、電泳、染色、脫色和拍攝圖像。將拍攝圖像上傳至對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)庫軟件，進(jìn)行處理和分析。以國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)菌株H9218作為標(biāo)準(zhǔn)分子量進(jìn)行校準(zhǔn)，識(shí)別、標(biāo)記條帶位置。用非加權(quán)配對(duì)算術(shù)平均法進(jìn)行條帶的聚類分析[6]。

2 結(jié)果

2.1 183 株沙門菌屬細(xì)菌血清型分布183 株沙門菌屬細(xì)菌中鼠傷寒沙門菌為最常見血清型，其次為腸炎沙門菌，見表1。

表1 183株沙門菌屬細(xì)菌血清型分布

2.2 主要沙門菌屬細(xì)菌分子分型特征對(duì)183株沙門菌屬細(xì)菌前兩種血清型鼠傷寒沙門菌、腸炎沙門菌進(jìn)行PFGE分型。兩種血清型菌株共168株，參照100%相似度，119株鼠傷寒沙門菌可見81個(gè)PFGE型，29株腸炎沙門菌可見21個(gè)PFGE型。

2.3 183株沙門菌屬細(xì)菌耐藥性分析沙門菌屬細(xì)菌對(duì)四環(huán)素、頭孢哌酮、鏈霉素、萘啶酸、氨芐西林表現(xiàn)出耐藥，對(duì)卡那霉素、頭孢他啶、頭孢吡肟、頭孢噻肟、頭孢曲松、阿莫西林/克拉維素的耐藥率較低，且全部菌株對(duì)環(huán)丙沙星、頭孢西丁、亞胺培南均敏感，見表2。

3 討論

沙門菌屬細(xì)菌的宿主廣泛，主要在動(dòng)物腸道內(nèi)分布，少部分沙門菌屬細(xì)菌對(duì)宿主具有選擇性，其菌型較多，對(duì)動(dòng)物及人均有程度不一的致病性，近年來沙門菌屬細(xì)菌感染已成為臨床嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題[7]。

血清分型為沙門菌屬細(xì)菌的主要表型分型方法，其操作簡(jiǎn)單快速，可重復(fù)性高。沙門菌屬細(xì)菌的血清分型復(fù)雜且類別較多，腸炎沙門菌、鼠傷寒沙門菌為沙門菌感染的最常見病原。其中鼠傷寒沙門氏菌的感染性強(qiáng)，室溫下能夠快速繁殖，致病速度極快，是胃腸炎及敗血癥的主要病原之一[8-9]。腸炎沙門菌為食物中毒事件檢出率最高的沙門菌血清型，可從雞群中分離[10]。另外副傷寒沙門菌、傷寒沙門菌感染則可引起腸熱癥。本研究中183株沙門菌屬細(xì)菌感染的最常見血清型為鼠傷寒沙門氏菌，另外腸炎沙門菌也是其優(yōu)勢(shì)血清型，此結(jié)果與臨床報(bào)道結(jié)果相符[11]。其次部分患者檢出副傷寒沙門菌、傷寒沙門菌、甲型副傷寒沙門菌、斯坦利沙門菌，德爾卑沙門菌等血清型。但血清分型存在高消耗、低產(chǎn)出等不足，且易和大腸埃希菌及其他細(xì)菌出現(xiàn)交叉反應(yīng)，此外血清分型的分辨力有限。另有研究報(bào)道，單一血清表型分型對(duì)傳染疾病跨地區(qū)傳播的追蹤、調(diào)查價(jià)值有限[12]。生物分型、噬菌體分型等表型方法的技術(shù)難度高，區(qū)分能力較低。

近年來沙門菌屬細(xì)菌的分子分型技術(shù)不斷改善，具有高通量、可重復(fù)性好和高靈敏度等特點(diǎn)，對(duì)流行病的調(diào)查有重要價(jià)值。PFGE目前已用于多種細(xì)菌分子生物學(xué)分型監(jiān)測(cè)中，其通過限制性內(nèi)切酶將菌株DNA 消化，再經(jīng)PFGE 進(jìn)行分離，與染色體限制性內(nèi)切酶圖譜對(duì)比，對(duì)細(xì)菌分型進(jìn)行鑒定[13]。臨床研究指出，PFEG 能夠反映DNA 序列的不同變化，對(duì)細(xì)菌性傳染病的防治、追蹤有重要價(jià)值[14]。既往研究表明，鼠傷寒沙門菌PFGE 帶型表現(xiàn)出多態(tài)性分布[15-16]。本研究結(jié)果也顯示，按照100%相似度，鼠傷寒沙門菌的PFGE 型別較多，無明顯優(yōu)勢(shì)帶型。另外其余沙門氏菌細(xì)菌的PFGE型別也較多，呈散在分布。

抗生素是沙門菌屬細(xì)菌感染者的常用藥物，其中三代頭孢菌素和喹諾酮類藥物為其首選用藥[17]。但有文獻(xiàn)指出，部分鼠傷寒沙門氏菌感染者對(duì)三代頭孢類藥物出現(xiàn)耐藥[18]。近年來隨著抗生素藥物的濫用和廣泛應(yīng)用，沙門菌屬細(xì)菌的耐藥問題較突出。王月等[19]研究表示，隨著沙門菌屬細(xì)菌耐藥性的不斷增加，可相應(yīng)增加抗生素的種類、用藥量和療程。本研究結(jié)果顯示，183 株沙門菌屬細(xì)菌對(duì)四環(huán)素、頭孢哌酮、鏈霉素、萘啶酸、氨芐西林表現(xiàn)出耐藥，此類藥物均為臨床常見抗生素，證實(shí)沙門菌屬細(xì)菌的耐藥性問題較嚴(yán)重。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，沙門菌屬細(xì)菌對(duì)萘啶酸耐藥性高可能相應(yīng)增加菌株對(duì)環(huán)丙沙星的耐藥性，從而影響臨床用藥的選擇[20]。但本研究中，全部菌株對(duì)環(huán)丙沙星均敏感，但未排出潛在的環(huán)丙沙星耐藥情況。另外本研究中沙門菌屬細(xì)菌對(duì)卡那霉素、頭孢他啶、頭孢吡肟、頭孢噻肟、頭孢曲松、阿莫西林/克拉維素的耐藥率較低，且全部菌株對(duì)頭孢西丁、亞胺培南均敏感。提示三代頭孢菌素和喹諾酮類藥物仍可作為沙門菌屬細(xì)菌感染經(jīng)驗(yàn)用藥，但建議臨床加強(qiáng)抗生素應(yīng)用的監(jiān)控，以減少耐藥菌株的發(fā)生，并有效預(yù)防沙門菌屬細(xì)菌感染，控制疾病流行。

綜上所述，沙門菌屬細(xì)菌的血清型分布和分子分型較復(fù)雜，耐藥現(xiàn)象較嚴(yán)峻，臨床需進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)抗生素用藥的監(jiān)測(cè)。