趙臨瀟，左博云，黃娟娟，于東升

1.延安大學(xué)咸陽醫(yī)院病理科，陜西 咸陽 712000；2.延安大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 延安 716000

乳腺癌是全世界女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，且死亡率極高[1]。有研究報道，我國乳腺癌的發(fā)病率逐年升高，且每年以3%～4%的增長速度不斷增加[2]。有學(xué)者研究指出，乳腺癌癌的發(fā)生、發(fā)展過程中有多種蛋白共同參與的，并在腫瘤發(fā)生、發(fā)展的過程中發(fā)揮著重要作用[3-4]。相關(guān)研究報道，乳腺癌患者中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1 (glucose transporter 1，GLUT-1) 和p53 蛋白表達(dá)水平顯示異常，且對乳腺癌的預(yù)后有著至關(guān)重要的作用[5-6]。臨床上常通過檢測患者體內(nèi)GLUT-1和p53 蛋白的表達(dá)水平，為疾病早期診斷與治療及預(yù)后提供有效指標(biāo)[7]。本研究通過檢測GLUT-1 和p53 蛋白在乳腺癌患者中的表達(dá)水平，分析GLUT-1 和p53蛋白表達(dá)水平與乳腺癌組織的臨床病理特征及疾病預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料2012 年3 月至2015 年3 月在延安大學(xué)咸陽醫(yī)院就診的106例乳腺癌患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均經(jīng)病理組織活檢并確診為乳腺癌；②納入研究前未服用過影響GLUT-1 和p53 蛋白水平的藥物。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重精神類疾病，無法正常溝通者；②合并嚴(yán)重免疫力缺陷者；③一般資料不齊全者。取106例患者乳腺癌組織標(biāo)本106 份，并選取上述患者遠(yuǎn)離癌組織3 cm的癌旁正常組織106 份進(jìn)行對照研究?；颊吣挲g24～75 歲，平均(56.76±3.42)歲；體質(zhì)量46～76 kg，平均(54.30±3.89) kg；病程2.4～4.5年，平均(3.14±0.25)年。

1.2 方法

1.2.1 GLUT-1和p53蛋白檢測方法采用免疫組化法檢測。每例組織蠟塊均切片4張，厚度約4 μm。均經(jīng)甲醛溶液固定，石蠟包埋、載玻片泡酸、高溫滅菌及多聚賴氨酸涂片等處理。DAB顯色劑顯色，蘇木精復(fù)染，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。操作步驟嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。GLUT-1和p53蛋白兔多克隆抗體均采購自美國Epitomics公司。DAB顯色劑及配套試劑盒采購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2.2 陽性判定標(biāo)準(zhǔn)采用BMD-300E 型光學(xué)顯微鏡(上海比目儀器廠)進(jìn)行觀察。GLUT-1 細(xì)胞細(xì)胞膜呈棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，在高倍鏡下隨機(jī)選擇5個視野進(jìn)行觀察，每個視野細(xì)胞需大于200個，當(dāng)陽性細(xì)胞＜10%為陰性，≥10%為陽性。檢測p53 蛋白細(xì)胞核，細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒沉淀即為陽性細(xì)胞，根據(jù)顯色程度進(jìn)行評分，無色為0 分，黃色為1 分，棕黃色為2 分，3 分為棕褐色，根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行評分，陰性為0分、陽性細(xì)胞＜25%為1分、陽性細(xì)胞25%～50%為2分、陽性細(xì)胞50%～75%為3分、陽性細(xì)胞＞75%為4分，計算兩項乘積，乘積≥3分為陽性表達(dá)[8]。

1.3 觀察指標(biāo)收集患者的一般資料，包括姓名、年齡、月經(jīng)初潮年紀(jì)、腫瘤直徑、腫瘤部位、有無淋巴轉(zhuǎn)移、TNM分期、雌激素受體水平、孕激素受體水平等。先對比兩組標(biāo)本中的GLUT-1、p53 蛋白表達(dá)情況，再分析GLUT-1、p53 蛋白的表達(dá)與乳腺癌患者病理特征的關(guān)系。

1.4 隨訪用電話隨訪、短信隨訪、回院復(fù)查和上門隨訪等方式對106例乳腺癌患者進(jìn)行定期隨訪觀察，隨訪時間為3年，截止隨訪時間為2018年4月。記錄隨訪過程中患者的生存情況。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS22.0 統(tǒng)計軟件包進(jìn)行處理，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t 檢驗，計數(shù)資料以率和構(gòu)成比進(jìn)行描述，采用χ2檢驗；采用Logistic回歸模型分析影響乳腺癌患者預(yù)后死亡的相關(guān)危險因素。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌組織與癌旁組織GLUT-1和p53蛋白表達(dá)水平比較乳腺癌組織中GLUT-1、p53蛋白陽性率分別為65.09%、62.26%，明顯高于癌旁組織，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1及圖1。

圖1 免疫組化染色圖(×500)

2.2 GLUT-1和p53蛋白表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系GLUT-1 和p53 蛋白表達(dá)與患者年齡、月經(jīng)初潮年紀(jì)、腫瘤直徑、腫瘤部位無關(guān)(P＞0.05)，與淋巴轉(zhuǎn)移、TNM分期、雌激素受體水平、孕激素受體水平有關(guān)(P＜0.05)，見表2。

2.3 乳腺癌患者GLUT-1和p53蛋白表達(dá)水平與術(shù)后預(yù)后比較 GLUT-1陽性表達(dá)、p53陽性表達(dá)患者的乳腺癌死亡率明顯高于GLUT-1 陰性表達(dá)、p53 陰性表達(dá)患者，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

2.4 影響乳腺癌患者預(yù)后的相關(guān)危險因素經(jīng)非條件單因素與多因素Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，年齡、月經(jīng)初潮年紀(jì)、腫瘤部位不是影響乳腺癌患者預(yù)后死亡的相關(guān)危險因素(P＞0.05)；GLUT-1 (陽性)、p53 蛋白(陽性)、淋巴轉(zhuǎn)移(有)、TNM 分期(Ⅲ～Ⅳ期)、雌激素受體水平(異常增高)、孕激素受體水平(異常增高)為影響乳腺癌患者預(yù)后死亡的相關(guān)危險因素(P＜0.05)，見表4。

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表4 影響乳腺癌患者預(yù)后的非條件單因素與多因素Logistic回歸分析

3 討論

GLUT-1 作為一種膜性易化葡萄糖運(yùn)轉(zhuǎn)蛋白，主要負(fù)責(zé)體內(nèi)葡萄糖在細(xì)胞內(nèi)的擴(kuò)散，促進(jìn)細(xì)胞的新程代謝，是人體葡萄糖跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的主要載體[9]。有研究報道，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)腫瘤等病理情況時，體內(nèi)GLUT-1可出現(xiàn)異常表達(dá)，常作為腫瘤病理檢查的標(biāo)記物[10-11]。GLUT-1 主要分布與細(xì)胞膜、胎盤及血腦屏障中。當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)惡性腫瘤時，無糖酵解增加，引起細(xì)胞中GLUT-1 的代謝增強(qiáng)，檢查可見GLUT-1 處于高表達(dá)狀態(tài)[12-13]。p53是臨床發(fā)現(xiàn)最早的抑癌基因之一，對腫瘤蛋白有一定的抑制效果，在癌細(xì)胞中均可見到p53蛋白的高表達(dá)。因此，眾多學(xué)者認(rèn)為，p53蛋白的表達(dá)與腫瘤的惡性程度有顯著相關(guān)性[14-15]。國內(nèi)外研究顯示，p53蛋白分為野生型與突變型兩種，前者對惡性腫瘤細(xì)胞的增殖具有一定的調(diào)控性，后者可誘導(dǎo)異?；虻谋磉_(dá)，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生[16-17]。本研究采用免疫組化法對細(xì)胞中GLUT-1與p53蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行檢測，分析兩者對乳腺癌患者各病理特征與疾病預(yù)后的關(guān)系。

本研究數(shù)據(jù)顯示，癌組織與癌旁組織中GLUT-1與p53 蛋白的表達(dá)水平比較中，癌組織中GLUT-1 陽性表達(dá)與p53 蛋白陽性表達(dá)例數(shù)均明顯高于癌旁組織。表明在癌組織中，GLUT-1 與p53 蛋白均出現(xiàn)異常表達(dá)，兩者表達(dá)水平的高低與乳腺癌的發(fā)生有密切的關(guān)系，與陶德友等[18]描述相一致。有研究報道，細(xì)胞缺氧與營養(yǎng)缺乏是GLUT-1表達(dá)異常的主要誘因。由于惡性腫瘤增值速度明顯快于正常細(xì)胞，在生長過程中快速吸收機(jī)體內(nèi)營養(yǎng)，消耗氧氣，促進(jìn)葡萄糖代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)，細(xì)胞中GLUT-1、血管內(nèi)皮生長因子等異常增加，為腫瘤細(xì)胞新的血管生成提供條件，從而加速了腫瘤的生長與轉(zhuǎn)移[19-20]。經(jīng)3 年的隨訪發(fā)現(xiàn)，GLUT-1陽性表達(dá)與p53蛋白陽性表達(dá)的生存率均明顯低于兩者陰性表達(dá)的生存率，這說明GLUT-1 與p53 蛋白的高表達(dá)可增加乳腺癌患者的死亡率。金羽茜等[21]研究表明，p53蛋白可促進(jìn)乳腺癌組織對正常組織的侵襲，加快癌組織的轉(zhuǎn)移，從而增加乳腺癌患者的死亡率。本研究中數(shù)據(jù)顯示，GLUT-1 與p53 蛋白表達(dá)水平與淋巴轉(zhuǎn)移、TNM分期、雌激素受體水平、孕激素受體水平有關(guān)。有研究顯示，腫瘤直徑、有無淋巴轉(zhuǎn)移、各病理分期均可反映癌細(xì)胞生長情況，惡性程度越高的腫瘤細(xì)胞中，GLUT-1 與p53 蛋白表達(dá)水平均明顯升高且與腫瘤的生長情況呈正相關(guān)[22]。雌孕激素是腺癌檢查中的主要監(jiān)測因子，兩者可作為乳腺癌疾病的預(yù)測因子，雌孕激素的陽性表達(dá)越高，則p53蛋白表達(dá)水平越高，與國內(nèi)相關(guān)報道一致[23]。本研究顯示，GLUT-1(陽性)、p53蛋白(陽性)作為影響乳腺癌患者預(yù)后死亡的相關(guān)危險因素，可見兩者可作為了解患者病情發(fā)展、評估術(shù)后轉(zhuǎn)歸的重要指標(biāo)。提示臨床工作中可通過加強(qiáng)監(jiān)測GLUT-1 及p53 蛋白，了解乳腺腫瘤的發(fā)生及發(fā)展。由于本研究納入樣本量較小，研究結(jié)果難免存在偏倚，后續(xù)筆者將擴(kuò)大樣本量，進(jìn)一步分析GLUT-1 及p53 蛋白對乳腺癌患者預(yù)后的預(yù)測價值，以獲得更有價值的研究結(jié)果服務(wù)與臨床。

綜上所述，GLUT-1 與p53 蛋白在乳腺癌癌組織中均呈高表達(dá)狀態(tài)，且與其臨床各病理特征及預(yù)后有關(guān)，兩者對了解乳腺腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，評估患者預(yù)后意義重大。