楊 娜，曹建萌，劉志剛，高風英，可小麗，王 淼，衣萌萌，盧邁新

(1.中國水產(chǎn)科學研究院珠江水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部熱帶亞熱帶水產(chǎn)資源利用與養(yǎng)殖重點實驗室，廣州 510380；2.上海海洋大學水產(chǎn)與生命學院，上海 201306)

羅非魚(Tilapia)隸屬于鱸形目(Perciformes)鱺魚科(Cichlidae)，是世界重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖品種。從上世紀五十年代開始，我國先后引進了尼羅羅非魚(Oreochromisniloticus)、奧利亞羅非魚(Oreochromisaureus)和吉富羅非魚(Oreochromisniloticus,GIFT)等品種，羅非魚的養(yǎng)殖也帶動了良種繁育、飼料加工、魚類規(guī)模化養(yǎng)殖和水產(chǎn)品加工等產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，目前中國已經(jīng)成為世界上羅非魚出口和產(chǎn)量最多的國家[1]。羅非魚在我國的主產(chǎn)區(qū)主要分布在廣東、廣西、海南、云南和福建等南方地區(qū)，其中吉富羅非魚的養(yǎng)殖面積約占60%，是目前主要養(yǎng)殖的羅非魚品種之一。

雜交是魚類遺傳育種技術中廣泛采用的一種手段，包括種內(nèi)雜交和遠緣雜交，種內(nèi)雜交一般是同種內(nèi)的不同品系、不同品種的個體間的雜交[2]。宣云峰[3]用長江、珠江水系草魚(Ctenopharyngodonidellus)種群進行種內(nèi)雜交，獲得了雜交后代家系及群體組合，發(fā)現(xiàn)雜交后代遺傳變異水平顯著提高，具有較高的選育潛力，在生長性能和體型特征上均具有優(yōu)勢。遠緣雜交是指不同物種之間的雜交，可以是種間、屬間、科間或者親緣關系更遠的物種之間的雜交[4]。魚類中種間雜交的如烏斑鱧[烏鱧(Channaargus)(♀)×斑鱧(Channamaculata)(♂)][5]和合方鯽[日本白鯽(Carassiusauratuscuvieri)(♀)×紅鯽(CarassiusauratusRedVariety)(♂)][6]等在生產(chǎn)上獲得了較大的經(jīng)濟價值。在魚類屬間雜交中，三角魴(Megalobramaterminalis)(♀)和翹嘴鲌(Culteralburnus)(♂)及其屬間雜交子代具有顯著的超雙親生長優(yōu)勢，且體質量也顯著高于對照組[7]。

父母本的親緣關系越遠，更可能將生物的優(yōu)良性狀通過雜交綜合于雜種中，雜種優(yōu)勢也較為明顯，但雜交相容性都很低，往往存在雜交不易成功和雜交后代存活率低等問題[8]。翹嘴鱖(Sinipercachuatsi)隸屬于鱸形目真鱸科(Percichthyidae)鱖屬(Siniperca)，具有生長快、肉質細嫩、耐寒性強和營養(yǎng)價值高等優(yōu)點[9]。目前已報道的關于羅非魚和鱖的遠緣雜交有奧利亞羅非魚(♀)與翹嘴鱖(♂)的科間雜交，子代成活率為0.3%～0.5%[10]。本研究進行了吉富羅非魚(♀)與翹嘴鱖(♂)的遠緣雜交研究，探索吉富羅非魚(♀)與翹嘴鱖(♂)雜交的可行性，研究正常發(fā)育的雜交子代的胚胎發(fā)育、細胞遺傳和分子遺傳特征，豐富魚類遠緣雜交的基礎數(shù)據(jù)，以期為吉富羅非魚(♀)與翹嘴鱖(♂)遠緣雜交F1的開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗用魚

實驗魚均取自中國水產(chǎn)科學研究院珠江水產(chǎn)研究所高要水產(chǎn)種質中心。吉富羅非魚5尾(♀)，體重900.0～1 000.0 g；吉富羅非魚5尾(♂)，體重1 000.0～1 100.0 g；翹嘴鱖5尾(♂)，體重700.0～800.0 g。親魚在人工繁殖前放養(yǎng)于循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中。水溫控制在(26.5±0.5) ℃，pH為8.1±0.1，氨氮量低于0.1 mg/L，溶解氧大于5.8 mg/L，光暗周期為12L ∶12D。每天吸出殘餌并及時補充因吸出損失的水。吉富羅非魚每天上午下午各投喂一次飼料，翹嘴鱖每天上午下午各投喂一次適口餌料魚。

1.2 人工繁殖

吉富羅非魚(♀)×翹嘴鱖(♂)為實驗組，吉富羅非魚(♀)×吉富羅非魚(♂)為對照組。吉富羅非魚和翹嘴鱖的人工授精方法參考Cao等[11]的方法進行。

1.3 胚胎發(fā)育

用Olympus解剖鏡(Nikon P-RN2，南京衡橋儀器有限公司)觀察胚胎發(fā)育過程。授精當天每0.5 h取樣觀察一次，第二天開始每12 h取樣觀察一次，直至胚胎孵化出魚苗。每次統(tǒng)計時隨機抽取800～1 400粒胚胎，受精后1 h統(tǒng)計胚胎受精率，胚胎發(fā)育至孵化期時統(tǒng)計胚胎孵化率，胚胎發(fā)育至首次喂養(yǎng)階段時統(tǒng)計胚胎存活率。受精率=(受精卵數(shù)目/卵子總數(shù))×100%；孵化率=(出苗數(shù)/受精卵數(shù)目)×100%；存活率=(開口時的魚苗數(shù)/受精卵數(shù)目)×100%[12]。多次重復實驗，并使用SPSS26.0對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學差異的單因素顯著性分析。

1.4 DNA含量檢測

1.4.1 實驗材料

吉富羅非魚自交組受精后10 d(10 days post-fertilization,10 dpf)的胚胎10枚，吉富羅非魚(♀)×翹嘴鱖(♂)10 dpf的胚胎20枚。所有胚胎均為發(fā)育正常的胚胎。

1.4.2 實驗方法

在Sysmex CyFlow?Ploidy Analyser倍性分析儀(Sysmex-Partec公司)上用CyStain?UV Precise P試劑盒對每尾個體的DNA含量進行流式細胞檢測。取300 μL的染色緩沖液放入培養(yǎng)皿中，放入300 μL的染色緩沖液中裂解，用刀片垂直把樣品切碎，用30 μm的濾膜過濾樣品，向過濾后的樣品中加入1 200 μL DAPI染色溶液，上機檢測。吉富羅非魚自交組的子代為二倍體參照，并使用SPSS26.0對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學差異的單因素顯著性分析。

1.5 染色體數(shù)目觀察

1.5.1 實驗材料

吉富羅非魚5尾，體重800.0～900.0 g；翹嘴鱖5尾，體重600.0～700.0 g；雜交子代5尾，體重170.0～180.0 g。

1.5.2 實驗方法

參照淡水黑鯛染色體標本制備方法[13]并加以改進，按10 μg/g魚體重的劑量腹腔注射植物血細胞凝素(PHA)，24 h后，按照1 μg/g魚體重腹腔注射秋水仙素，2 h后在水中剪鰓放血，取頭腎組織制備細胞懸液。頭腎組織放入加有10 mL生理鹽水的小燒杯中，用剪刀剪碎組織直至無明顯大組織塊，經(jīng)1 500 r/min離心5 min后收集細胞，加入0.037 5 mol/L KCl溶液，低滲30 min，離心后加入新配制的卡諾氏固定液(甲醇 ∶冰醋酸=3 ∶1)，固定2次。固定后再次離心后取沉淀，加入適量的固定液重懸細胞，用吸管吸取細胞懸液滴在洗好的載玻片上，過酒精燈火焰3次，自然晾干。染色體標本經(jīng)染色液(Giemsa染液 ∶磷酸鹽緩沖液=1 ∶9)染色后用蒸餾水沖洗干凈并晾干，置于Olympus DM 4000B顯微鏡下進行觀察拍照和統(tǒng)計分析。隨機選取100個來自不同細胞的分散良好、形態(tài)清晰的中期分裂相染色體(20個/尾)，通過統(tǒng)計分析確定染色體數(shù)目，并使用SPSS26.0對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學差異的單因素顯著性分析。再拍照、放大并剪下其中的10個中期分裂相染色體，然后按LEVAN[14]提出的標準進行染色體測量、分類及核型分析。

1.6 微衛(wèi)星分析

1.6.1 實驗材料

用1尾吉富羅非魚(♀)和1尾翹嘴鱖(♂)構建一個全同胞家系，采集兩親本和雜交子代20尾(體重130.0～140.0 g)的尾鰭樣本。采集吉富羅非魚群體(20尾，中國水產(chǎn)科學研究院珠江水產(chǎn)研究所高要水產(chǎn)種質中心，體重500.0～600.0 g)、尼羅羅非魚無錫群體(20尾，無錫淡水漁業(yè)研究中心，體重600.0～700.0 g)的尾鰭樣本。將所有樣本的尾鰭置于無水乙醇中保存。其中全同胞家系中的父本和雜交子代群體為一組，后續(xù)用翹嘴鱖的微衛(wèi)星標記進行微衛(wèi)星分析；全同胞家系中的母本、雜交子代群體、吉富羅非魚群體和尼羅羅非魚無錫群體為一組，后續(xù)用羅非魚的微衛(wèi)星標記進行微衛(wèi)星分析。

1.6.2 DNA提取

使用HiPure Tissue DNA Micro Kit試劑盒(購自廣州美基生物科技有限公司)提取各尾鰭樣本的基因組DNA，1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的質量，微量分光光度計(OSE-260，購自北京天根生化科技公司)檢測DNA的濃度及純度。用ddH2O將基因組DNA稀釋至終濃度為50 ng/μL，置于-20 ℃保存。

1.6.3 微衛(wèi)星引物的合成

羅非魚和翹嘴鱖的微衛(wèi)星標記均為已開發(fā)的多態(tài)性水平較高的微衛(wèi)星標記[15-16]。從已開發(fā)的翹嘴鱖微衛(wèi)星標記中篩選出10對在吉富羅非魚群體中擴增不出條帶但在翹嘴鱖群體中多態(tài)性較高的微衛(wèi)星標記，10對標記的登錄號分別是AY395717.1、AY395718.1、DQ789291、JQ686834、JQ804746、JQ804762、GR476841、GR476843、GR476286、GR476056。從已開發(fā)的羅非魚微衛(wèi)星標記中篩選出10對在吉富羅非魚群體中多態(tài)性較高的標記，10對標記的登錄號分別是BV005323、G64061、G68185、G68187、G68214、G68228、G68231、G68242、G68250、G68253。引物均由北京擎科生物科技有限公司合成。

1.6.4 微衛(wèi)星PCR擴增條件及產(chǎn)物檢測

翹嘴鱖的微衛(wèi)星引物的擴增條件及產(chǎn)物檢測：PCR反應體系為20 μL，包括：DNA模板1 μL(50 ng/μL)，上、下游引物各0.4 μL，2×M5 HiPer plus Taq HiFi PCR Mix(with blue eye)10 μL，ddH2O 8.2 μL。PCR熱循環(huán)程序為：94 ℃預變性3 min，94 ℃變性30 s，58～64 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，循環(huán)數(shù)為27個，最后72 ℃終延伸10 min，4 ℃保存。PCR產(chǎn)物經(jīng)12%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，產(chǎn)物上樣量為2 μL，50 bp ladder上樣量為2 μL，電泳緩沖液為1×TBE，先使用50 V低電壓電泳30 min，再使用150 V電壓電泳150 min[17]。電泳完成后將玻璃板分離，把聚丙烯酰胺凝膠置于0.1% AgNO3溶液中染色10 min，再用ddH2O漂洗染色后的凝膠，稍后凝膠放置顯色液(稱取5 g NaOH固體和0.25 g無水Na2CO3固體，加ddH2O溶解定容至500 mL，使用前加2 mL CH2O)中顯色7～10 min。染色及顯色時放搖床輕輕搖晃，直至出現(xiàn)條帶。用50 bp Marker條帶估算條帶大小，統(tǒng)計每個微衛(wèi)星位點等位基因大小、種類和數(shù)目。

羅非魚的微衛(wèi)星引物的擴增條件及產(chǎn)物檢測：PCR反應體系為20 μL，包括：DNA模板1 μL(50 ng/μL)，上、下游引物各0.4 μL，2 × M5 HiPer plus Taq HiFi PCR Mix(with blue eye)10 μL，ddH2O 8.2 μL。PCR熱循環(huán)程序為：95 ℃預變性3 min，94 ℃變性25 s，56～65 ℃退火25 s，72 ℃延伸25 s，循環(huán)數(shù)為28個，最后72 ℃終延伸5 min，4 ℃保存。制備聚丙烯酰胺凝膠。用50 bp Marker條帶估算條帶大小，統(tǒng)計每個微衛(wèi)星位點等位基因大小、種類和數(shù)目。用軟件Popgen32計算各位點的觀測雜合度(Observed heterozygosity)、期望雜合度(Expect heterozygosity)和Nei’s遺傳距離，用POPTREE軟件對各群體進行NJ聚類分析。

2 結果與分析

2.1 胚胎發(fā)育

吉富羅非魚(♀)×翹嘴鱖(♂)子代的胚胎發(fā)育至囊胚期前的階段與吉富羅非魚自交組發(fā)育同步。吉富羅非魚自交組的胚胎發(fā)育至原腸期時，雜交子代的胚胎出現(xiàn)發(fā)育停滯高峰。吉富羅非魚自交組的胚胎發(fā)育至體節(jié)分化期時，雜交子代的胚胎發(fā)育進度明顯慢于吉富羅非魚自交組。吉富羅非魚自交組的胚胎發(fā)育至孵化期時，雜交子代的胚胎存活情況可分為四類：正常胚胎、亞正常胚胎、畸形胚胎和嚴重畸形胚胎。亞正常胚胎表現(xiàn)為有心跳，沒有閉合的血液循環(huán)系統(tǒng)，血管發(fā)育異常，血細胞聚集在卵黃一側等癥狀；畸形胚胎表現(xiàn)為體軸縮短，圍心腔水腫，有心跳無閉合的血液循環(huán)等癥狀；嚴重畸形胚胎表現(xiàn)為頭部發(fā)育異常，小眼或無眼，圍心腔水腫嚴重，體軸縮短并伴有嚴重的脊索彎曲等癥狀。上述三種不同程度的畸形胚胎在孵化過程中不斷死亡，到開口期部分畸形個體雖然存活，但無法攝食，后續(xù)全部死亡。此外，雜交子代中表型正常的胚胎，從孵化期到開口期這段時間內(nèi)陸續(xù)也有死亡。吉富羅非魚自交組和雜交組的胚胎受精率分別是(98.90±1.09)%和(95.61±1.19)%(表1)，雜交組的胚胎受精率顯著低于自交組(P<0.05)。吉富羅非魚自交組的胚胎孵化率是(95.66±1.59)%，雜交組的胚胎孵化率是(16.25±1.64)%，吉富羅非魚自交組的胚胎存活率是(92.38±1.25)%，雜交組的胚胎存活率是(0.34±0.13)%，雜交組的胚胎孵化率和存活率都極顯著低于自交組(P<0.01)(表1)。

表1 吉富羅非魚自交組和吉富羅非魚(♀)×翹嘴鱖(♂)子代的胚胎受精率、孵化率和存活率統(tǒng)計

2.2 DNA含量分析

吉富羅非魚自交組和吉富羅非魚(♀)×翹嘴鱖(♂)正常子代的平均DNA含量峰值分別為12 945.59和13 292.90(圖1)，吉富羅非魚(♀)×翹嘴鱖(♂)正常子代的平均DNA含量與吉富羅非魚自交組的子代的平均DNA含量比值為1.03，并且與預期值1相比無顯著性差異(P>0.05)。

圖1 DNA相對含量直方圖

2.3 染色體數(shù)目統(tǒng)計及核型分析

2.3.1 染色體數(shù)目統(tǒng)計

吉富羅非魚的染色體眾數(shù)為44，眾數(shù)出現(xiàn)頻率為88%，結果表明其染色體數(shù)目為2n=44(表2)；翹嘴鱖的染色體眾數(shù)為48，眾數(shù)出現(xiàn)頻率為92%，結果表明其染色體數(shù)目為2n=48(表3)；吉富羅非魚(♀)×翹嘴鱖(♂)子代的染色體眾數(shù)為44，眾數(shù)出現(xiàn)頻率為83%，結果表明其染色體數(shù)目為2n=44(表2)。雜交子代的染色體眾數(shù)與吉富羅非魚的染色體眾數(shù)相同，雜交子代的染色體眾數(shù)與翹嘴鱖的染色體眾數(shù)差異顯著(P<0.05)。

表2 吉富羅非魚和雜交子代的染色體眾數(shù)統(tǒng)計

表3 翹嘴鱖的染色體眾數(shù)統(tǒng)計

2.3.1 染色體核型分析

吉富羅非魚(♀)×翹嘴鱖(♂)子代具有3對亞中部著絲點染色體、12對亞端部著絲點染色體和7對端部著絲點染色體，染色體核型公式為6sm+24st+14t，染色體臂數(shù)(NF)=50(表4，圖2)。吉富羅非魚具有3對亞中部著絲點染色體、13對亞端部著絲點染色體和6對端部著絲點染色體，其染色體核型公式是6sm+26st+12t，NF=50(表5，圖2)。4對翹嘴鱖具有4對亞中部著絲點染色體、5對亞端部著絲點染色體和15對端部著絲點染色體，核型公式是8sm+10st+30t，NF=56(表6，圖2)。

表4 雜交子代染色體相對長度(RL)和臂比(AR)(平均值±標準差)

續(xù)表4

表5 吉富羅非魚染色體相對長度(RL)和臂比(AR)(平均值±標準差)

表6 翹嘴鱖染色體相對長度(RL)和臂比(AR)(平均值±標準差)

圖2 吉富羅非魚、雜交子代和翹嘴鱖的有絲分裂中期染色體

2.4 分子遺傳學分析

10個翹嘴鱖微衛(wèi)星標記在父本翹嘴鱖和雜交子代群體中的擴增結果顯示，10個微衛(wèi)星標記在父本翹嘴鱖中均擴增出條帶，在雜交子代群體中均無條帶出現(xiàn)，圖3為微衛(wèi)星Sc90在父本翹嘴鱖和雜交子代群體中的擴增結果。

圖3 微衛(wèi)星Sc90在父本翹嘴鱖和雜交子代群體中的擴增結果

10個羅非魚微衛(wèi)星標記在全同胞家系的母本及其子代群體中均擴增出條帶，且條帶大小均相同。10個羅非魚微衛(wèi)星標記在雜交子代群體、吉富羅非魚群體和尼羅羅非魚無錫群體中共擴增出69個等位基因，每個位點等位基因的數(shù)量為1個或2個，這些引物擴增的帶寬范圍為100～300 bp。在吉富羅非魚群體中，UNH846、UNH849、UNH954、UNH940、UNH920、UNH916、UNH960位點的多態(tài)性較高，GM131、UNH773、UNH896位點的多態(tài)性較低。在雜交子代群體中，所有位點的多態(tài)性都很低。在尼羅羅非魚無錫群體中，UNH896、UNH940、UNH846、UNH849、UNH916、UNH920、UNH954和UNH960位點的多態(tài)性水平較高，GM131和UNH773位點的多態(tài)性水平較低。圖4為微衛(wèi)星UNH916在三個群體中的擴增結果。

圖4 微衛(wèi)星UNH916在三個群體中的擴增結果

三個群體基因變異參數(shù)見表7。三個群體中，雜交子代群體的平均觀察純合度和平均期望純合度最高。三個群體間遺傳相似系數(shù)和遺傳距離見表8。雜交子代群體和吉富羅非魚群體間的遺傳距離最小，吉富羅非魚群體和尼羅羅非魚無錫群體間的遺傳距離最大。根據(jù)遺傳距離，用MEGA5軟件對3個群體進行聚類分析。聚類分析結果顯示：雜交子代群體與吉富羅非魚群體聚為一支，其次是尼羅羅非魚無錫群體(圖5)。

表7 吉富羅非魚群體、雜交子代群體及尼羅羅非魚無錫群體的變異參數(shù)

表8 吉富羅非魚群體、雜交子代群體與尼羅羅非魚無錫群體間遺傳相似系數(shù)和遺傳距離

圖5 基于Nei氏(1978)無偏遺傳距離構建的NJ聚類樹

3 討論

魚類雜交過程中最關鍵的是雜交親本的相容性，造成遠緣雜交不相容的主要原因可能是雙親的染色體數(shù)目、雙親DNA之間的相容性和協(xié)調(diào)性、雙親細胞質之間的相容性和協(xié)調(diào)性和雙親DNA與細胞質之間的相容性和協(xié)調(diào)性差別過大，使兩者形成的合子基因調(diào)控不協(xié)調(diào)，最終造成胚胎發(fā)育障礙[18]，如由于草魚的染色體數(shù)目(2n=48)和鯉的染色體數(shù)目(2n=100)差異太大和核質的不協(xié)調(diào)等，草魚(♀)和鯉(♂)的二倍體雜種很難成活[19]。

吉富羅非魚(♀)與翹嘴鱖(♂)的雜交屬于科間雜交，其胚胎受精率和胚胎孵化率分別為(95.61±1.19)%和(16.25±1.64)%，胚胎存活率僅為(0.34±0.13)%，藏雪等[20]進行了河川沙塘鱧(♀)與云斑尖塘鱧(♂)的科間雜交，只有0.3%左右的胚胎能成活，唐永凱等[21]進行了奧利亞羅非魚(♀)與鱖(♂)的科間雜交，統(tǒng)計胚胎存活率為0.2%～0.3%，相關的研究表明遠緣雜交子代的存活率很低，這可能與科間雜交存在一定程度的配子不親和有關。Polonis等[22]研究虹鱒(Oncorhynchusmykiss)與褐鱒(Salmontrutta)的基因組的不親和性，發(fā)現(xiàn)細胞核的不親和性不是導致雜交種異常的唯一原因，虹鱒(♀)×褐鱒(♂)的早期胚胎的存活率較高，應該是染色體的消除和碎裂過程中，親本物種之間的基因組不匹配和細胞核沖突的程度較輕，基于目前的結果還無法確定吉富羅非魚與翹嘴鱖之間是否存在染色體碎裂情況，后續(xù)將開展相關研究。

DNA相對含量分析的結果顯示，吉富羅非魚(♀)×翹嘴鱖(♂)子代是二倍體。吉富羅非魚和翹嘴鱖的染色體數(shù)目和核型已有報道[23-24]，本研究中的吉富羅非魚和翹嘴鱖的染色體數(shù)目與已有報道一致，核型分析與已有報道存在差異，這可能是由于染色體核型的分析方法和測量染色體長度時的誤差導致的。雜交子代的染色體數(shù)目與其母本相同，核型更接近母本，雜交子代的染色體數(shù)目和核型與父本不同。這與曹麗萍等[24]對奧利亞羅非魚、鱖及其雜交子一代的染色體數(shù)目的分析結果一致。此外，根據(jù)唐永凱等[21]進行的奧利亞羅非魚(♀)與鱖(♂)的受精細胞學研究，在奧利亞羅非魚(♀)與鱖(♂)有正常的受精程序和常規(guī)的卵裂方式，胚胎發(fā)育中只有鱖染色體整套丟失而奧利亞羅非魚染色體進行自然加倍的個體才能夠存活，推測雜交子代很可能是受鱖精子刺激的雌核發(fā)育個體。由本研究的結果可以推測，正常成活的雜交子代是吉富羅非魚卵子染色體加倍獲得的，推測吉富羅非魚(♀)×翹嘴鱖(♂)子代是雌核發(fā)育個體。遠緣雜交誘發(fā)雌核發(fā)育的現(xiàn)象已有許多報道，一般認為雌核和雄核未發(fā)生融合，卵子的染色體加倍形成了天然的雌核發(fā)育二倍體，Wang等[25]進行鯉(2n=100)(♀)與團頭魴(2n=48)(♂)的屬間雜交，發(fā)現(xiàn)后代中存在雌核發(fā)育二倍體。

10個翹嘴鱖微衛(wèi)星標記在全同胞家系的父本翹嘴鱖和雜交子代群體中的擴增結果顯示，各微衛(wèi)星位點在父本翹嘴鱖中均擴增出條帶，在雜交子代群體中均沒有擴增出條帶，表明雜交子代不具有父本的遺傳物質。10個羅非魚微衛(wèi)星標記在全同胞家系的母本吉富羅非魚和雜交子代群體中均擴增出條帶，且條帶大小相同，表明雜交子代遺傳了母本的遺傳物質。對雜交子代群體、吉富羅非魚群體、尼羅羅非魚無錫群體進行微衛(wèi)星分析，結果表明雜交子代群體的平均觀測純合度和平均期望純合度最高，聚類分析結果顯示該雜交子代群體與吉富羅非魚群體聚為一支，其次是尼羅羅非魚無錫群體。王金龍等[26]采用RAPD和測序的方法對奧利亞羅非魚(♀)與鱖(♂)的雜交F1組合與親本的遺傳關系進行研究，結果表明雜交子代中導入了父本的遺傳物質。簡林江等[27]探討大黃魚(Larimichthyscrocea)(♀)與鮸狀黃姑魚(Nibeamiichthioides)(♂)屬間遠緣雜交的可行性，并利用10個微衛(wèi)星標記對雜交親本及F1進行遺傳分析，發(fā)現(xiàn)存活的個體都是雌核發(fā)育后代。鄭國棟等[28]進行團頭魴‘浦江1號’(♀)與翹嘴鲌(♂)的屬間人工雜交，獲得了遺傳背景不同的雜種A型和雜種B型子代，微衛(wèi)星分析結果顯示雜種A型為二倍體雜交種，雜種B型的帶型與母本相同，屬于雌核發(fā)育后代。

細胞遺傳和分子遺傳特征的結果顯示，吉富羅非魚(♀)×翹嘴鱖(♂)子代屬于雌核發(fā)育個體。