歐智濤 陳香玲 陳東奎 趙洪濤 劉要鑫 李果果 劉福平 羅秋娟 李珍 廖榮珍

摘要：對11個柑橘品種離體葉片進行潰瘍病菌接種，統(tǒng)計病情指數(shù);選取5個對潰瘍病易感的柑橘品種在病菌接種后不同時期進行藥劑處理試驗，評價潰瘍病病菌接種后防治的最佳時期和藥劑防效。結果表明，接種12 d潰瘍病抗性由高到低依次是長安金柑>貢柑>紅肉蜜柚>砂糖橘>金橘蜜柚>馬家柚>沙田柚>橘紅>紐荷爾臍橙>沃柑>茂谷柑;4種藥劑防效由高到低依次為可殺得>中生菌素>代森錳鋅>乙蒜素，病菌接種后12 h內(nèi)進行藥劑處理，防效較高，超過24 h防效下降趨勢增大。

關鍵詞：柑橘潰瘍病;離體接種;抗病性;防效;防治最佳時期

中圖分類號：S436.661.1+9?? 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2021）17-0107-03

收稿日期：2020-12-23

基金項目：國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（柑橘）產(chǎn)業(yè)技術體系專項桂中南柑橘綜合試驗站（編號：CARS-26）;國家重點研發(fā)計劃（編號：2017YFD0202006）;廣西農(nóng)業(yè)科學院基本科研業(yè)務專項（編號：2015 YT51、2015JZ101、桂TS2016013）;廣西科技重大專項（編號：桂科AA17204038）。

作者簡介：歐智濤（1987—），男，甘肅天水人，碩士，助理研究員，主要從事柑橘育種及栽培技術研究。E-mail：563062912@qq.com。

通信作者：陳香玲，博士，副研究員，主要從事柑橘育種及栽培技術研究。E-mail：gxcxl2008@163.com。

近年來，廣西壯族自治區(qū)柑橘產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅猛[1]，由于氣候、溫濕度、臺風等客觀環(huán)境條件影響，對柑橘潰瘍病的防治壓力較大，在市場效益驅(qū)動下，沃柑等對柑橘潰瘍病敏感的晚熟雜交柑被大量推廣，而多數(shù)種植農(nóng)戶栽培和病蟲害防治技術欠缺，基礎設施薄弱[2]，給柑橘潰瘍病的防控帶來巨大挑戰(zhàn)。前人已對不同柑橘品種的潰瘍病抗性及藥劑篩選做了不少研究[3-5]，尤其是柑橘潰瘍病防治藥劑的篩選，主要是通過抑菌圈[6]及大田接種噴藥的方法[7]比較不同柑橘品種潰瘍病的抗性及評價藥效防治效果，而在離體葉片上接種病菌并直接進行藥劑處理的方式比較潰瘍病抗性及藥劑防治效果的方法鮮有報道，本研究采用此方法比較不同柑橘品種潰瘍病抗性及不同藥劑在病菌接種后不同時期處理的防治效果，以期為柑橘潰瘍病防治時機及不同藥劑替換使用，提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

柑橘潰瘍病菌源葉片于2019年7月在廣西壯族自治區(qū)南寧市武鳴區(qū)雙橋鎮(zhèn)沃柑果園采集，將病葉帶回實驗室將病菌分離純化培養(yǎng)后保存[8-9]，配制3×106 CFU/mL菌懸液備用。供試品種為沃柑、茂谷柑、貢柑、沙糖橘、長安金柑、紅肉蜜柚、金橘蜜柚、馬家柚、沙田柚、紐荷爾臍橙和橘紅，各品種葉片均采自廣西農(nóng)業(yè)科學院里建科研基地柑橘資源圃，試驗在廣西農(nóng)業(yè)科學院園藝所實驗室開展。

1.2 葉片潰瘍病發(fā)病率試驗

選取當次葉梢面積展至最大，顏色轉(zhuǎn)綠的新葉作為供試材料，將葉片表面用無菌水清洗，選取葉片正面3個區(qū)域進行針刺處理[10]，每個區(qū)域3針，每葉9針，每個品種處理6張葉，設3次重復。將無菌濾紙剪成圓片，圓片大小以可覆蓋葉片處理區(qū)域3個針刺點為宜，吸足已制備好的菌懸液，貼在各葉片處理區(qū)域的3個針刺點上，將葉片置于無菌濾紙保濕的培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿2張葉，將蓋好的培養(yǎng)皿放置于28? ℃培養(yǎng)箱中，定期打開培養(yǎng)皿蓋噴無菌水保濕，記錄葉片開始出現(xiàn)潰瘍病癥狀的時間，于接種后12 d，統(tǒng)計各品種柑橘葉片病情指數(shù)，評價各品種柑橘抗病性。根據(jù)針刺點發(fā)病數(shù)量進行分級：0級，針刺點無發(fā)病;1級，針刺點發(fā)病1～3個;2級，針刺點發(fā)病 4～6個;3級，針刺點發(fā)病7～9個。病情指數(shù)=∑（各級病葉數(shù)×各級代表值）/（調(diào)查總葉數(shù)×最高級代表值）×100。相對病情指數(shù)=鑒定品種病情指數(shù)/CK病情指數(shù)，以病情指數(shù)最高者為CK，相對抗性指數(shù)=1-相對病情指數(shù)[3]，其中高抗（HR）：相對抗性指數(shù)為1.00～0.80;中抗（MR）：相對抗性指數(shù)為0.79～0.50;低抗（LR）：相對抗性指數(shù)為0.49～0.30;中感（MS）：相對抗性指數(shù)為 0.29～0.10;高感（S）：相對抗性指數(shù)<0.10。

1.3 藥劑防效試驗

通過比較各品種葉片潰瘍病相對抗性指數(shù)，將其中5個較感潰瘍病的品種葉片用上述方法接種病菌后進行藥劑處理，用代森錳鋅500倍液（利民化工股份有限公司）、乙蒜素900倍液（河南比賽爾農(nóng)業(yè)科技有限公司）、中生菌素900倍液（福建凱立生物制品有限公司）和可殺得1 700倍液（美國杜邦公司），分別在離體葉片接種潰瘍病病菌后2、6、12、24、48、72 h噴灑于葉片針刺區(qū)域的濾紙上，以噴無菌水為對照，比較不同藥劑在潰瘍病病菌接種后不同時期的藥劑防效。藥劑防效=（CK病情指數(shù)-處理病情指數(shù)）/CK病情指數(shù)×100%。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2007和SPSS 14.0軟件進行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析。

2 結果與分析

2.1 葉片出現(xiàn)潰瘍病癥狀的時期比較

由表1可知，沙田柚、紐荷爾臍橙葉片針刺點在接種1 d后即出現(xiàn)潰瘍病癥狀;沃柑、茂谷柑、紅肉蜜柚和橘紅在接種后2 d出現(xiàn)癥狀;沙糖橘、金橘蜜柚、馬家柚癥狀出現(xiàn)在接種3 d后;貢柑和長安金柑在接種后4 d開始表現(xiàn)癥狀。

2.2 葉片潰瘍病發(fā)病抗性比較

由表2可知，至接種后12 d，在11份測試材料中，沃柑和茂谷柑葉片的病情指數(shù)最高，分別是6.36、6.97，相對抗性指數(shù)低于0.1，為高感品種;長安金柑為1.21，在所有品種中病情指數(shù)最低，相對抗性指數(shù)超過0.8，為高抗品種;貢柑為中抗;沙糖橘、紅肉蜜柚和金橘蜜柚為低抗;馬家柚、沙田柚、紐荷爾臍橙和橘紅為中感品種。由結果可知，不同柑橘品種葉片是否易感潰瘍病與出現(xiàn)癥狀的時間無直接關系。

2.3 不同時期藥劑處理防效試驗

由圖1可知，隨著病菌接種后時間的推移，對沃柑潰瘍病的藥劑防效由高至低依次為可殺得>中生菌素>代森錳鋅>乙蒜素。4種藥劑的防效均逐漸下降，且均在12 h后降幅趨勢增大;其中，中生菌素和代森錳鋅在病菌接種48 h內(nèi)處理的藥劑防效與可殺得相近，可殺得在病菌接種72 h后處理的防效最高，其他3種藥劑防效均低于20%。茂谷柑和紐荷爾臍橙上4種藥劑的防效變化趨勢與沃柑相似，其中除乙蒜素外，另外3種藥劑在12 h內(nèi)處理的藥劑防效較高，超過12h防效下降趨勢逐漸增大;橘紅處理中可殺得、代森錳鋅和乙蒜素藥劑防效下降趨勢較均勻;而沙田柚上可殺得、代森錳鋅和中生菌素3種藥劑在24 h內(nèi)處理的藥劑防效較高，均高于45%，超過24 h后的藥劑防效下降趨勢才逐漸增大。5個柑橘品種葉片的藥劑試驗結果表明，可殺得在所有品種的接種試驗中防效均最高，乙蒜素均最低，中生菌素和代森錳鋅在不同品種葉片上防效表現(xiàn)有輕微差異，藥劑防效居中。

3 小結與討論

關于柑橘潰瘍病的抗性，與所侵染病菌致病力[11]、葉片氣孔密度[12-13]以及植物激素作用均相關[14]，其侵染主要通過葉片氣孔和傷口進行。風雨過程中樹枝與葉片物理摩擦，潛葉蛾危害[15]等對葉片都會造成大量傷口，客觀地為潰瘍病菌侵染創(chuàng)造有利條件。離體葉片實驗室人工針刺接種，模擬了大田潰瘍病病菌通過傷口侵染葉片的過程，對潰瘍病防治具有一定的指導意義。通過前人對柑橘潰瘍病藥劑的篩選[16]，銅制劑效果良好，但如果銅制劑使用不當會造成土壤重金屬污染[17];還會引起紅蜘蛛的危害風險[18-19]，明確潰瘍病病菌侵染后防治的最佳時期，結合不同藥劑在不同時期處理的防效，可以為藥劑交替使用和提高防治效率提供理論依據(jù)。

本研究通過離體接種病菌統(tǒng)計病情指數(shù)的方法比較不同柑橘品種的潰瘍病抗性，其中沃柑、茂谷柑病情指數(shù)最高，對潰瘍病敏感;紐荷爾臍橙、橘紅、馬家柚和沙田柚次之，為中感品種;沙糖橘、紅肉蜜柚、金橘蜜柚為低抗;貢柑為中抗;長安金柑的病情指數(shù)最低，高抗柑橘潰瘍病。藥劑處理試驗中，在病菌接種后12 h內(nèi)進行藥劑處理防效較好，超過24 h藥劑防效下降較快;通過各類型藥劑防效比較，中生菌素和代森錳鋅與可殺得對潰瘍病防效相近，可以交替使用，在保證柑橘潰瘍病防治效果的同時合理減少銅制劑的使用量。

潰瘍病防治效果的評價需要考慮多種因素，離體葉片在實驗室接種后進行藥劑處理所得的結果，是以接種特定濃度菌懸液為前提，適用于不同類型藥劑間的橫向比較;而藥劑防效的評價還應結合所接種病菌的致病力、菌懸液濃度以及在大田試驗進一步研究后，進行客觀綜合評價。

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