屠小龍 趙 穎 史國(guó)軍 王永生 張婷素 胡夢(mèng)奕

1.浙江省寧波市中醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，浙江寧波 315016；2.海軍軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)征醫(yī)院中醫(yī)科，上海 200433

胰腺癌是起源于胰腺導(dǎo)管上皮、腺泡細(xì)胞消化系統(tǒng)疾病的常見(jiàn)惡性腫瘤，早期癥狀隱匿且診斷困難，其惡性程度高，進(jìn)展迅速，患者生存時(shí)間短，預(yù)后差[1-3]。親吻素-1（Kisspeptin-1，Kiss-1）是惡性黑素瘤的轉(zhuǎn)移抑制因子，在多種人類(lèi)惡性腫瘤中Kiss-1 表達(dá)下調(diào)，且與腫瘤進(jìn)展、侵襲轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后相關(guān)[4-6]。目前Kiss-1 與胰腺癌關(guān)系的報(bào)道少見(jiàn)，本研究通過(guò)檢測(cè)胰腺癌血清Kiss-1水平，分析其與胰腺癌臨床特征及預(yù)后的關(guān)系，以期為胰腺癌的臨床預(yù)后預(yù)測(cè)及診斷治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015 年1 月至2017 年12 月浙江省寧波市中醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“我院”）收治的胰腺癌患者132例為胰腺癌組，其中男75例，女57例；年齡48～72歲，平均（60.35±3.21）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均為胰頭癌，術(shù)后病理證實(shí)為胰腺癌；②初診、入組前未接受放、化療；③術(shù)后給予吉西他濱聯(lián)合埃羅替尼化療，配合隨訪，隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并壺腹癌、膽總管癌、肝癌等其他部位惡性腫瘤；②胰腺囊性病變、胰腺損傷性疾病；③惡病質(zhì)、血液疾病、免疫系統(tǒng)疾病。另選擇我院同期收治胰腺良性疾病患者57例為良性病變組及我院同期門(mén)診體檢健康者53 名為對(duì)照組。良性病變組男36例，女21例；年齡51～70歲，平均（60.09±3.17）歲。對(duì)照組男29 名，女24 名；年齡50～70歲，平均（60.11±3.12）歲。三組年齡、性別比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），具有可比性。本研究已獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

胰腺癌組術(shù)前（良性病變組入院72 h 內(nèi)，對(duì)照組體檢當(dāng)日）采集肘靜脈血3 ml 注入干燥試管，4℃、2000 r/min 離心10 min（離心半徑15 cm）取血清檢測(cè)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清Kiss-1水平，試劑盒購(gòu)于法國(guó)STAGO 公司，批號(hào)160102。美國(guó)雅培i2000全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)胰腺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物糖類(lèi)抗原199（carbohydrate antigen 199，CA199)、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）水平，試劑盒購(gòu)自北京科美東雅生物技術(shù)有限公司（批號(hào)：151003）。

1.3 隨訪

胰腺癌組患者出院后均定期門(mén)診復(fù)查，使用電話或微信隨訪3 年，隨訪結(jié)束后將自病理確診至死亡的時(shí)間定義為總生存時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0 對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Pearson 相關(guān)系數(shù)分析相關(guān)性，采用多因素Cox 回歸分析影響因素，Kaplan-Meier 法進(jìn)行生存分析，Log-Rank 檢驗(yàn)差異性。采用受試者操作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC 曲線）分析Kiss-1 預(yù)測(cè)胰腺癌預(yù)后的價(jià)值。以P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組血清Kiss-1、CEA、CA199水平比較

胰腺癌組血清Kiss-1水平低于良性病變組和對(duì)照組，CEA、CA199水平均高于良性病變組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。良性病變組與對(duì)照組血清Kiss-1、CEA、CA199水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 三組血清Kiss-1、CEA、CA199水平比較（）

表1 三組血清Kiss-1、CEA、CA199水平比較（）

注：與對(duì)照組比較，aP ＜0.05；與良性病變組比較，bP ＜0.05。Kiss-1：親吻素-1；CEA：癌胚抗原；CA199：糖類(lèi)抗原199

2.2 血清Kiss-1 與CEA、CA199 相關(guān)性

胰腺癌組血清Kiss-1水平與CEA、CA199水平均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.687、-0.703，P ＜0.001）。

2.3 不同臨床特征胰腺癌患者血清Kiss-1水平比較

TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、發(fā)生肝轉(zhuǎn)移的胰腺癌患者血清Kiss-1水平低于TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、未發(fā)生肝轉(zhuǎn)移的胰腺癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 不同臨床特征胰腺癌患者血清Kiss-1水平比較（pg/ml，）

表2 不同臨床特征胰腺癌患者血清Kiss-1水平比較（pg/ml，）

注：Kiss-1：親吻素-1

2.4 不同血清Kiss-1水平胰腺癌患者預(yù)后差異

低Kiss-1水平組3 年生存率為2.63%（2/76），低于高Kiss-1水平組的30.36%（17/56）（χ2=12.20，P=0.001）。見(jiàn)圖1。

圖1 不同血清Kiss-1水平胰腺癌患者生存曲線

2.5 影響胰腺癌患者預(yù)后的Cox 回歸分析

以胰腺癌患者隨訪期間死亡（0=否，1=是）為因變量，以TNM 分期（0=Ⅰ～Ⅱ期，1=Ⅲ～Ⅳ期）、肝轉(zhuǎn)移（0=否，1=是）及Kiss-1水平（0=≥42.13 pg/ml，1=＜42.13 pg/ml，）為自變量。多因素Cox 回歸分析顯示TNM 分期高、有肝臟轉(zhuǎn)移、低Kiss-1水平是胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（OR ＞1，P ＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 影響胰腺癌患者預(yù)后的多因素Cox 回歸分析

2.6 Kiss-1 預(yù)測(cè)胰腺癌預(yù)后的價(jià)值分析

ROC 曲線結(jié)果顯示，Kiss-1 預(yù)測(cè)胰腺癌預(yù)后的截?cái)嘀禐?5.16 pg/ml，曲線下面積為0.867（95%CI：0.790～0.944，P ＜0.001），靈敏度為72.73%，特異性為66.67%。見(jiàn)圖2。

圖2 親吻素-1 預(yù)測(cè)胰腺癌預(yù)后的受試者操作特征曲線

3 討論

胰腺癌是最致命的惡性腫瘤之一，2012 年全球約33.8 萬(wàn)人患有胰腺癌，排名惡性腫瘤第11 位[8]，2012 年我國(guó)胰腺癌患者占全球19.45%，死亡患者占全球的19.27%[9]。腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為是導(dǎo)致治療失敗、腫瘤復(fù)發(fā)、患者死亡的重要因素，識(shí)別與胰腺癌病理特征和預(yù)后相關(guān)的分子機(jī)制可為臨床分子靶向治療，預(yù)后評(píng)估提供新的靶點(diǎn)和參考。

Kiss-1 是一個(gè)重要的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，位于人類(lèi)染色體的長(zhǎng)臂1，在胎盤(pán)、胰腺、肝臟、骨骼肌等多種組織中廣泛表達(dá)，Kiss-1 在血清中可被迅速加工成為小分子活性肽，參與代謝、調(diào)節(jié)生殖神經(jīng)內(nèi)分泌軸、維持體內(nèi)平衡、調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移等作用[10-13]。在惡性腫瘤中Kiss-1 發(fā)揮抑癌作用，口腔鱗狀細(xì)胞癌中Kiss-1表達(dá)下調(diào)，Kiss-1 低表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期、局部復(fù)發(fā)及總生存時(shí)間均有關(guān)[4]，Kiss-1 在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)低于癌旁組織，Kiss-1 低表達(dá)與結(jié)直腸癌分化、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移、臨床分期和5 年生存情況均有關(guān)[14]，Kiss-1 表達(dá)與胃癌腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和總生存時(shí)間也有關(guān)[15]。但Kiss-1 在胰腺癌的表達(dá)特點(diǎn)尚不清楚，本研究發(fā)現(xiàn)胰腺癌患者血清Kiss-1水平低于良性病變組和對(duì)照組，Kiss-1水平與CEA、CA199 呈負(fù)相關(guān)，CEA、CA199 是胰腺癌診斷的敏感腫瘤標(biāo)志物[16-19]，提示Kiss-1 表達(dá)缺失可能促使胰腺癌發(fā)生。本研究發(fā)現(xiàn)Kiss-1水平與分化程度、TNM 分期、肝轉(zhuǎn)移有關(guān)，體外報(bào)道顯示轉(zhuǎn)染Kiss-1 后胰腺癌細(xì)胞的侵襲指數(shù)顯著降低[20]，提示Kiss-1 參與胰腺癌細(xì)胞遷移和侵襲過(guò)程，但是機(jī)制尚不清楚，推測(cè)為Kiss-1 通過(guò)結(jié)合并激活G 蛋白偶聯(lián)受體54，誘導(dǎo)磷脂酰肌醇4，5-二磷酸水解，提高細(xì)胞內(nèi)鈣濃度，激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，抑制細(xì)胞增殖和分化，發(fā)揮抗轉(zhuǎn)移和抗腫瘤等抑癌基因作用[21]。Kiss-1 與G 蛋白偶聯(lián)受體54 結(jié)合后還可通過(guò)激活磷脂酶C 產(chǎn)生第二信使肌醇聯(lián)結(jié)和雙甘酯，抑制細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞凋亡[22]。其次，Kiss-1 通過(guò)以下不同機(jī)制抑制腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移，分別為：①Kiss-1通過(guò)抑制基質(zhì)金屬蛋白酶9 表達(dá)及其介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，抑制腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[23]。②Kiss-1通過(guò)阻止遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移細(xì)胞生長(zhǎng)和定植組織癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移[24]。③Kiss-1 還可通過(guò)激活細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1來(lái)抑制胰腺癌PANC-1 細(xì)胞遷移[25]。因此Kiss-1 缺失可導(dǎo)致胰腺癌惡性進(jìn)展。本研究生存分析顯示血清低Kiss-1水平組3 年生存率低于高Kiss-1水平組，Cox回歸分析結(jié)果顯示低Kiss-1水平與胰腺癌患者預(yù)后有關(guān)，ROC 曲線分析Kiss-1 預(yù)測(cè)胰腺癌預(yù)后的曲線下面積為0.867，提示Kiss-1 可以作為胰腺癌患者預(yù)后預(yù)測(cè)的無(wú)創(chuàng)血清學(xué)指標(biāo)。

綜上，胰腺癌患者血清Kiss-1水平降低，低Kiss-1水平與胰腺癌患者腫瘤分期、侵襲轉(zhuǎn)移惡性行為、低生存率有關(guān)。監(jiān)測(cè)血清Kiss-1水平可以為胰腺癌預(yù)后預(yù)測(cè)提供參考。