韓盧生，李煥榮，王玉民

（1.河南省盧氏縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所 472200；2. 北京農學院動科學院/國家級實驗教學示范中心 102206）

禽巴氏桿菌病導致禽類高死亡率和低生產性能，造成養(yǎng)禽業(yè)巨大損失[1]。該病以發(fā)熱、腹瀉、呼吸困難為特征[2]。疫苗免疫和抗生素治療是主要手段，中藥治療的病例報道很多[3,4]。而中獸藥以其綜合藥效作用及耐藥性、藥物殘留等較少發(fā)生在治療畜禽傳染病方面顯示其獨特優(yōu)勢[5-6]。

青藍石膏口服液選取大青葉、生石膏、生地黃、牡丹皮、板藍根等進行配伍，對癥于禽巴氏桿菌病新研制的中獸藥復方制劑，組方中的藥物皆有清熱、涼血、抗菌消炎的功效[7-8]，符合中獸醫(yī)對巴氏桿菌病的辨證分析，推測其對防治禽巴氏桿菌起到一定作用。本研究旨在針對雞巴氏桿菌病臨床癥狀與病理特點，制定體外抑菌、殺菌、抗炎、解熱等系列試驗，為青藍石膏口服液預防與治療禽巴氏桿菌病提供藥效學數據。

1 材料

1.1 試驗動物、藥品和菌種

試驗動物：SPF級昆明種小鼠（雄性）、成年Sprague Dawley（SD）大鼠購自北京金牧陽試驗動物養(yǎng)殖有限責任公司（動物生產許可證編號：SCXK（軍）2007-0004和2007-0001）。

青藍石膏口服液，河北科星藥業(yè)有限公司中試產品，生產批號：20110602。含生藥1.0g/mL；雞巴氏桿菌，批號：1812，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.2 動物飼養(yǎng)條件

大、小鼠均雌雄各半分籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度為20℃±2℃，濕度為60%±5%。自由飲水，給藥前禁食12h，自由飲水。

2 方法

2.1 體外抑菌殺菌試驗

2.1.1 體外抑菌試驗（MIC）

在肉湯培養(yǎng)基增菌，挑取單個菌落接種到2mL營養(yǎng)肉湯內，37℃培養(yǎng)18～24h，受試藥物用一次性過濾器過濾除菌。采用二倍稀釋法測定青藍石膏口服液的MIC。每支試管加入2mL滅菌的含5%血清營養(yǎng)肉湯，加入2mL受試藥物，依次倍比稀釋，設7個稀釋度，同時設陽性和陰性對照。37℃培養(yǎng)24h觀察結果。以無菌生長的最低稀釋度為MIC。

2.1.2 體外殺菌試驗

取上述清潔透明的各試管培養(yǎng)物，劃線接種含血清的營養(yǎng)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24h，沒有菌落生長的試管內藥物的稀釋度即該菌的最小殺菌濃度（MBC）。

2.2 解熱試驗

大鼠雌雄分籠飼養(yǎng)，每組雌雄各半，每組6只，觀察3d后，稱重測體溫。設3個劑量組（高、中、低劑量組）及對照組，口服給藥，給藥30min后背部皮下注射2-4二硝基苯酚2mL，給藥濃度為25mg/kg體重。對照組不給藥僅注射2-4二硝基苯酚2mL。給藥后每30min時監(jiān)測一次體溫，觀察體溫變化。

2.3 抗炎試驗

雄性小鼠32只，隨機分為4組，青藍石膏口服液3個劑量組和模型組，每組8只。中藥對照組灌胃，按0.25g/kg、0.5g/kg、0.75g/kg體重給藥濃度0.1mL/只，0.2mL/只，0.3mL/只，1次/d，連續(xù)3d。最后一次給藥后30min，將各組小鼠右耳的前后兩側涂上二甲苯，用量0.1mL，致炎時間為15sec。等待1h，麻醉處死小鼠后將兩耳剪下，用打孔器在兩耳的同一位置打下直徑為8mm的圓形耳片，立即稱重，每鼠右耳片減去左耳片質量即為耳片炎癥腫脹度。

2.4 數據分析

應用SPSS12.0軟件對測定的數據進行差異顯著性檢驗，P＜0.05表示差異顯著。試驗結果用平均數±標準差（±S）表示。

3 結果

3.1 體外抑菌殺菌試驗

抑菌試驗結果顯示青藍石膏口服液對多殺性巴氏桿菌體外抑菌的最高稀釋度為26，最低抑菌濃度為1∶64，生藥含量為15.625mg/mL；對巴氏桿菌體外殺菌最高稀釋度為25，最低殺菌濃度為1∶32，生藥含量為31.25mg/mL。

3.2 解熱試驗

結果見表1。由表可知青藍石膏口服液高劑量組在給藥90min和150min可明顯降低致熱大鼠模型體溫，可使2-4二硝基苯酚對大鼠的制熱作用失效；中、低劑量組使大鼠高體溫的維持時間縮短，升溫幅度減小。

表1 大鼠解熱試驗體溫測定結果

3.3 抗炎試驗

青藍石膏口服液高、中、低劑量組的腫脹值較生理鹽水組顯著減?。≒＜0.05）（表2），且給藥劑量越大效果越明顯，各給藥組間無統(tǒng)計學差異（P＞0.05)，表明青藍石膏口服液可顯著性抑制由二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹度。

表2 抗炎作用測定結果

4 討論

禽巴氏桿菌病是由禽多殺性巴氏桿菌引起的一種接觸性傳染病，可危害多種家禽、野禽。其特征表現為敗血性過程，發(fā)病率和死亡率都很高[7]，預防與藥物治療均可發(fā)揮一定作用。隨著減抗替抗政策的頒布和對動物源食品安全的要求，研究開發(fā)新中獸藥替代抗生素不失為一種好的手段。

在中藥新藥的開發(fā)中，中藥藥效學評價是至關重要的環(huán)節(jié)。許多中藥或中藥復方制劑通過藥效學作用研究，用來確定新藥預期的藥效，闡明新藥的作用機制或用來確定新藥作用的強度[8]。金青口服液藥效學研究發(fā)現對小鼠和發(fā)熱家兔有抗菌、解熱、消炎等藥效學作用[9]。復方大青葉合劑可減輕炎性癥狀，降低大腸桿菌引起的家兔體溫升高，并對葡萄球菌，鏈球菌，流感桿菌等多種細菌有抑制作用[10]。有研究顯示大青葉有明顯的抑菌作用，尤其對革蘭氏陰性菌的更加顯著[11]；大青葉提取物對二甲苯致小鼠耳廓腫脹有抑制作用[12]。板藍根不同有效部位多種提取物皆有不同程度的抑菌和解熱作用[13]；生石膏歸屬于陽明病治療用藥，可用于清解里熱。生石膏對發(fā)熱的家兔有顯著的退熱作用[14]；此外，牡丹皮水煎劑可抑制多種急性炎癥反應的發(fā)生[15]；生地黃也有抗炎與降溫作用[16]。

青藍石膏口服液藥效學結果顯示，最低抑菌生藥含量為15.625 mg/mL，最低殺菌生藥含量為31.25mg/mL，MIC和MBC分別為1∶64和1∶32；高中低劑量組均具有明顯抗炎效果，且具有劑量依賴性；各劑量在一定程度上均可緩解對2,4-二硝基苯酚引起的體溫升高，高劑量組降溫速度快、效果明顯，但中低劑量組可縮小高溫持續(xù)時間，降低升溫幅度。

5 結論

青藍石膏口服液對雞多殺性巴氏桿菌有抑菌、殺菌作用，也有抗炎、解熱等藥效學作用。為臨床用藥治療相關疾病奠定基礎。