來慶梅 王世濤 丁愛君 韓艷嬌 于謙 李玉燕 李月 劉松 張承新 郭龍宗

中圖分類號：S831.2 文獻標識碼：C文章編號：1673-1085（2021）8-0016-03

對于種雞生產(chǎn)場來說，種公雞的飼養(yǎng)管理至關重要。對于籠養(yǎng)授精飼養(yǎng)模式來說，種公雞的精液是最關鍵的因素，種公雞的精液質(zhì)量直接影響著種蛋的受精率、孵化性能、雛雞數(shù)量與質(zhì)量，進而與種雞場的經(jīng)濟效益掛鉤。但是種公雞的精液質(zhì)量在個體之間存在很大差異，影響公雞精液質(zhì)量的因素有很多，比如：公雞體重、體況、周齡、營養(yǎng)水平、飼料配方、管理水平、采集手法以及遺傳基因等方面。據(jù)統(tǒng)計只有 1/3～1/2 （部分品種可達到2/3）的公雞精液質(zhì)量是良好的，所以對精液質(zhì)量進行檢測，是保障較高種蛋受精率、高水平雛雞質(zhì)量的重要措施，是篩選優(yōu)秀種公雞、淘汰精液質(zhì)量不合格的雞只的有效措施，是降低公母比例、降低飼養(yǎng)成本、提高種雞場經(jīng)濟效益的必要措施。

目前，精液質(zhì)量檢測與選育工作在實際生產(chǎn)中并未廣泛推廣使用，主要原因在于：精液質(zhì)量實驗室檢測程序復雜，檢測設備專業(yè)化要求高，檢測速度慢，難以進行大規(guī)模的推廣;生產(chǎn)單位對精液質(zhì)量檢測和選育的意義認識不到位，忽略精液質(zhì)量檢測和選育工作。

本文主要對公雞精液質(zhì)量檢測方法在種雞場中的可操作性進行探討。通過對人工授精的公雞精液量進行檢測，進而量化授精精子數(shù)，選留優(yōu)秀公雞，降低公母比例，降低飼養(yǎng)成本。

1 公雞精液質(zhì)量的檢測方法與內(nèi)容

考慮到種雞場條件、設備有限，公雞精液質(zhì)量檢測內(nèi)容主要為單次排精量、精液外觀、精子活性與精子密度，其中精子活性與精子密度主要使用顯微鏡進行計數(shù)檢測。

1.1 檢測材料

恒溫顯微鏡（山東牛爾電子科技有限公司），0.0025 mm²精子計數(shù)板（上海富雪生物科技有限公司），集精杯，1 mL離心管，6 mL玻璃管，50 uL移液器，1 mL移液器，相應規(guī)格移液器滴頭，保溫桶，計數(shù)器，PBS緩沖液，紗布，托盤。

1.2 采精器具的準備

將集精杯、玻璃管、移液器滴頭、膠頭滴管用清水刷洗干凈，如有清洗不凈的污垢，可使用酸和堿浸泡清除。

將滴管裝入盛有10%火堿（堿性清潔劑）溶液的塑料桶1中（溶液必須沒過滴管）浸泡24 h，清水沖洗干凈;然后將清洗后的滴管放入盛有 10%過氧乙酸溶液（酸性清潔劑）的塑料桶2中（溶液必須沒過滴管）浸泡 24 h，清水反復沖洗干凈，清洗完成后避免酸堿殘留可以用 pH 試紙測量一下，保證無誤。將水滴甩干，玻璃器具在烤箱中用140 ℃的溫度烘烤 4 h（集精杯內(nèi)壁不出現(xiàn)水氣為止），塑料器具使用110 ℃烘烤30 min，待烤箱和玻璃管、離心管等冷卻后，將采集器具放在托盤中覆蓋清潔紗布待用。

1.3 保溫桶準備

將保溫桶中加入溫水，調(diào)整水溫至37 ℃，放入插有1 mL或6 mL玻璃管（編號）的泡沫板，備用。

1.4 制備PBS緩沖液

稱取KCl 0.2g、NaCl 8g、Na₂HPO₄1.44g、KH₂PO₄0.24g溶解于800 mL蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1 L即可。

1.5 采精

采精一般采用背腹式按摩采精法，一般兩人操作，一人采精，一人收集精液。采精員將公雞雙腿固定于兩腿間，頭朝左后方，尾部朝前，采精員左手拇指與其他四指自然分開，以掌面貼在公雞背面翅內(nèi)側向尾部區(qū)域輕快按摩，待公雞出現(xiàn)性發(fā)射（尾羽上翹，泄殖腔外翻），立即用左手掌將尾羽向背部撥，使其上翻，拇指和食指放在勃起的交配溝兩側，向交配器擠壓，右手握集精杯貼近交配器承接流出的精液即可。另一人將集精杯內(nèi)的公雞精液用移液器轉至1 mL離心管，封閉離心管，讀取精液量刻度并記錄在相應表格中。每只公雞一個離心管，并按照雞只編號進行編號，將離心管放到保溫桶中的泡沫板上，由專人送到檢測室，檢測室盡量選擇生產(chǎn)區(qū)域的房間，減少外界干擾。

1.6 稀釋液預溫

將PBS緩沖液放在水溫為37 ℃的水浴鍋中進行預溫，使用PBS緩沖液稀釋，可保證精子正常滲透壓，保證精子活力。

1.7 稀釋精液

用50 μL的移液器吸取20 μL的精液加至加有5 mL PBS緩沖液的6 mL玻璃管中，移液器滴頭深入稀釋液中，緩慢注入，然后用1 mL移液器輕輕吹打溶液混勻溶液即可，稀釋倍數(shù)為1︰400。

1.8 精液鏡下檢測

將恒溫顯微鏡載物臺溫度調(diào)整至37 ℃，將精子計數(shù)板放于載物臺上進行預溫。調(diào)整螺旋使視野中至計數(shù)板大方格清晰，使用100×即可。用50 μL的移液器吸取適量稀釋后的精液滴入精子計數(shù)板中，滴入過程緩慢，保證精子充滿整個計數(shù)池。

1.8.1 精子數(shù)量計數(shù)方法 1 mL原精液精子數(shù)量N=n×50×1000×m，m為稀釋倍數(shù)，n為讀取視野中5個正方格的精子總數(shù)。

1.8.2 精子活力評定方法 ①活力好，精子在鏡下呈現(xiàn)開水煮沸狀，云霧狀;②活力一般，精子在鏡下呈現(xiàn)直線前進運動;③活力差，精子在鏡下游動緩慢。

1.8.3 記錄 將每只公雞的精液進行鏡檢，記錄其精子數(shù)量以及活力。

1.8.4 檢測舉例 檢測某種雞場的公雞，周齡60～61周，每只采精量為0.4 mL，在100×鏡下見圖1所示。

那么1 mL原精液的精子數(shù)量為N=216×50×1000×400=4320000000，即1 mL原精液精子數(shù)約為43.2億;同時該份精液精子在鏡下部分呈現(xiàn)快速直線運動，部分呈現(xiàn)沸騰狀，說明該份精液活性較好。

2 討論

2.1 精液量的測定

測定結果受多因素影響，比如：品種差異、個體差異、采精人員的熟練度、采精手法等。一般公雞的射精量在0.4 mL以上，實際生產(chǎn)中精液量低于 0.4 mL的公雞建議調(diào)出供精序列，單獨飼養(yǎng)管理，而在選育公雞的過程中則建議對低于0.4 mL的公雞進行淘汰。

2.2 精液外觀檢查

精液采集完成后，需要對精液的外觀進行檢查，并記錄在相應的表格中。正常的精液應該是乳白色、不透明的乳狀液體（精液里若存在白色絮狀物，為尿酸鹽沉積）。精液采集過程中容易受到糞便污染，需要注意采精手法與力度。對精液稀薄、發(fā)黃、帶血的雞只，應停止采精，讓其休息2輪后，根據(jù)采集精液情況判斷，如果依舊存在以上問題，建議淘汰該公雞。

2.3 精子活力

精子活力是指在37 ℃環(huán)境下，前進運動精子數(shù)占總精子數(shù)的百分比。雞精子和卵子的受精部位在輸卵管壺腹部，即精子進入生殖道后仍需向受精部位運行，其運行能量來源于生殖道的收縮輔助與精子自身的活動力，在此過程中精子完成獲能同。因此要完成上述全部過程，對輸入母雞生殖道內(nèi)的精液有一定的要求，精液中必須有一定比例活力強的精子，活力好的精子在顯微鏡下的表現(xiàn)是呈直線運動，故精子活力是鑒定精液質(zhì)量最主要的指標之一。通過檢測公雞的精子活力獲知該雞的飼養(yǎng)水平與遺傳性能，在實際生產(chǎn)與育種過程中對公雞進行有效的控制。

2.4 精子數(shù)檢測

精子數(shù)檢測指檢測每毫升精液中精子的數(shù)量。通過顯微鏡檢測方法確定每毫升精液的精子數(shù)，從而確定每只母雞的輸精量?？梢愿鶕?jù)受精率的需要，調(diào)整輸精量，對輸精量進行具體化，在滿足最佳受精率的前提下，降低輸精量，而不是全群統(tǒng)一的20～30 μL原精液，從而實現(xiàn)公母比例的合理化，降低飼養(yǎng)公雞數(shù)量。

3 小結

受精率是種雞場關鍵生產(chǎn)指標之一，直接影響著出雛雞數(shù)量，進而影響經(jīng)濟效益，而種公雞的精液質(zhì)量直接影響著種蛋的受精率，因此控制好種公雞的精液質(zhì)量是任何一個種雞場都必須重視的工作。在人工授精技術中，不僅要考慮精液的遺傳品質(zhì)，同時也要考慮到精液的繁殖性狀（包括精液量、精子密度、精子活力、輸入母雞體內(nèi)的有效精子數(shù)），故對精液質(zhì)量進行準確與可靠的檢測，需要規(guī)范的檢測技術，同時加大對精液質(zhì)量檢測和選育過程的監(jiān)控力度，保證精液質(zhì)量檢測和選育過程的有效進行。種公雞精液質(zhì)量檢測是一項操作簡單、用工量少的常規(guī)技術，目前已在育種單位得到了推廣和應用，也應該應用于種雞場的常規(guī)生產(chǎn)中。

通過檢測公雞精液質(zhì)量，不但可以隨時掌控公雞發(fā)育與繁殖性狀，調(diào)控供精公雞序列，還能確定母雞優(yōu)秀受精率所需要的最低精子數(shù)量，降低精液總需求量，從而合理降低公母比例，減少公雞飼喂量，降低成本，增加種雞場經(jīng)濟效益。

收稿日期：2021-07-15

作者簡介：來慶梅（1986- ），女，獸醫(yī)本科，主要從事規(guī)?；B(yǎng)殖場養(yǎng)殖技術與實驗室血清學診斷。E-maiL：lqm07517@163.com;共同第一作者：王世濤（1987- ）男，獸醫(yī)碩士，主要從事規(guī)?；B(yǎng)殖場新品種研發(fā)、管理與禽病臨床診治。E-maiL：wstysgf@163.com。

**通訊作者：郭龍宗（1981- ），男，獸醫(yī)碩士，主要從事規(guī)?；B(yǎng)殖場禽病臨床診治和實驗室管理。E-maiL：guoLongzong1981@163.com。