胡衛(wèi)兵，邢軍華，李偉

（仙桃市第一人民醫(yī)院輸血科，湖北 仙桃 433000）

近年來，由于抗生素濫用現(xiàn)象越來越嚴重，致使諸多抗生素自身敏感性及耐藥性出現(xiàn)明顯變化，進而影響臨床檢驗工作[1]。每種細菌對非同種藥物敏感性不同，盡管同一細菌的不同菌株，其形成的細菌敏感度同樣存在差異，由此可知，臨床治療及診斷過程中，細菌鑒定的選擇尤為重要[2]。現(xiàn)階段，臨床常用的細菌鑒定方法包括血清學凝集試驗、鏡檢、直接藥敏試驗與常規(guī)檢驗等[3]。藥敏試驗是指利用血液樣本中細菌抗藥敏感度開展相應分析，以此準確鑒別細菌類型，該方法具有操作簡單、方便、快捷、準確度高等特點[4]?；诖?，本研究旨在分析不同細菌鑒定藥敏試驗在臨床血液檢驗中的應用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年4—11月本院收治的發(fā)熱并存在全身感染癥狀患者250例，其中男160例，女90例；年齡18～65歲，平均（35.41±6.35）歲；收集所選患者血液標本，僅進行1次收集，每例患者收集30 mL血液，冷藏保存標本，并于短時間內(nèi)送至檢驗科檢查。

1.2 方法 每份血液標本分別進行常規(guī)藥敏實驗與直接藥敏試驗檢測。

1.2.1 常規(guī)藥敏試驗方法 分別于血平板、巧克力平板及麥康凱平板上放置本研究收集的陽性血液樣本并進行接種，孵育環(huán)境如下：溫度36℃，時間16～22 h，6.0%的CO2，于平板上涂抹菌落，并實施格蘭染色，獲取檢測結(jié)果后選擇合適的酶。最后鑒定利用Walkaway系統(tǒng)藥敏試驗。

1.2.2 直接藥敏試驗方法 直接藥敏試驗檢測及培養(yǎng)均通過BACTEC9240系統(tǒng)，利用該系統(tǒng)培養(yǎng)、檢測標本。系統(tǒng)檢測出陽性樣本后，立即采用消毒注射器抽取陽性樣本10 mL，后置入無菌試管中對細菌進行分離操作，1 600 r/min離心6 min，收集上層清液；29 000 r/min離心13 min，去除上清液，通過PBS洗滌，經(jīng)2次沉淀后重懸。應用革蘭氏染色20μL懸液涂片，然后利用顯微鏡觀察。若格蘭陽性均呈鏈狀，則第1次藥敏試驗材料為MH+6%羊血的血瓶本，獲取檢測結(jié)果后，選擇合適的酶，后調(diào)整菌液濃度至6.0×105cuf/L，然后于NC21綜合板上接種，最后開展細菌鑒定及藥敏試驗。常規(guī)菌種，于MH平板上接種，通常滴懸液1～3滴，后利用無菌試紙均勻涂抹，最終置于藥敏紙片上。通過2005NCCLSI標準準確判斷耐藥性及敏感度。

1.3 觀察指標 統(tǒng)計不同檢測方法菌種檢出符合率及藥敏試驗結(jié)果與抗生素敏感度符合率。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測方法菌種檢出符合率 250份樣品中，經(jīng)有效檢測共220份陽性樣品。直接法檢測的革蘭陰性球菌及革蘭陽性桿菌檢出符合率分別為92.00%和96.43%，與常規(guī)法比較差異無統(tǒng)計學意義，見表1。

表1 兩種檢測方法菌種檢出符合率比較[n（%）]Table 1 Comparison of the coincidence rate of the two detection methods for the detection of strains[n(%)]

2.2 兩種檢測方法藥敏試驗結(jié)果與抗生素敏感度符合率比較 直接法檢測的革蘭陰性球菌、革蘭陽性桿菌抗生素敏感度符合率分別為97.44%和98.39%，與常規(guī)法比較差異均無統(tǒng)計學意義，見表2。

表2 兩種檢測方法藥敏實驗結(jié)果與抗生素敏感度符合率比較[n（%）]Table 2 Comparison of the coincidence rate between the results of the two detection methods and the sensitivity of antibiotics[n(%)]

3 討論

近年來，由于細菌耐藥性越來越強，增加了菌血癥及敗血癥等疾病發(fā)生率，導致由血液疾病引起的死亡率不斷升高[5]?？茖W、合理、快速的檢測方法在臨床診治中具有重要作用[6]。目前，臨床主要通過藥敏試驗方法鑒定血液中的細菌。藥敏試驗要求嚴格，且試驗條件創(chuàng)造難度大[7]?，F(xiàn)階段，臨床使用范圍相對較廣的藥敏試驗方法包括抗生素濃度梯度法、稀釋法、全自動培養(yǎng)檢測儀及紙片擴散法等[8]。本研究中，檢測系統(tǒng)為BACTEC9240系統(tǒng)，該系統(tǒng)屬于全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)，通過熒光探測技術(shù)對培養(yǎng)瓶密封，連續(xù)檢測瓶內(nèi)微生物代謝導致的CO2或O2濃度變化[9]，檢測微生物正常繁殖狀況，其同樣適用于快速血液檢測和細菌其他標本中真菌、感染及分枝桿菌檢測中[10]。

利用BACTEC9240系統(tǒng)開展檢測，利用兩種實驗方法鑒定血培養(yǎng)陽性標本可知，在革蘭陰性球菌及革蘭陽性桿菌鑒別診斷中具有較高的符合率[11]，此外，在腸桿菌種檢測中，也具有較高的檢出符合率[12]。本系統(tǒng)除可清楚顯示革蘭陰性球菌與革蘭陽性桿菌，同時具有較高的腸桿菌屬敏感性。本研究結(jié)果表明，250份樣品中，經(jīng)有效檢測共220份陽性樣品，直接法檢測的革蘭陰性球菌及革蘭陽性桿菌檢出符合率分別為92.00%和96.43%，與常規(guī)法比較差異均無統(tǒng)計學意義；直接法檢測的革蘭陰性球菌、革蘭陽性桿菌抗生素敏感度符合率分別為97.44%和98.39%，與常規(guī)法比較差異均無統(tǒng)計學意義。根據(jù)上述結(jié)果分析，兩種檢測方法具有較高的應用價值。與常規(guī)藥物檢測方法相比，直接藥敏實驗具有準確率高、操作簡單、快捷等特點，通常情況下，直接藥敏試驗時間大約為10 h，與其他檢驗相比更短，此外，其為臨床診治提供了重要數(shù)據(jù)參考，以便更好開展治療工作，確保良好的治療效果[13]。

綜上所述，常規(guī)藥敏試驗與直接藥敏試驗均具有較高的臨床血液細菌檢出率，但與常規(guī)藥敏試驗檢測方法相比，直接藥敏試驗具有操作快捷、簡單、準確度高等特點，值得臨床推廣。