周麗君，王珊，付薪靜，萬(wàn)建華，穆耶賽爾，張洪斌

（烏魯木齊市血液中心，新疆 烏魯木齊）

0 引言

血篩核酸擴(kuò)增技術(shù)（NAT）是在分子生物學(xué)水平的基礎(chǔ)上直接對(duì)病原體核酸進(jìn)行檢測(cè)，作為對(duì)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）血液檢測(cè)的補(bǔ)充，大大縮短檢測(cè)“窗口期”，降低輸血傳播疾病殘余風(fēng)險(xiǎn)[1-2]。新疆位于西北部，地大物博，各地區(qū)檢測(cè)水平參差不齊，核酸檢測(cè)對(duì)人員、環(huán)境、設(shè)備等方面要求較高，新疆地區(qū)對(duì)沒有開展核酸檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室實(shí)行核酸集中化檢測(cè)，目前血站實(shí)驗(yàn)室在業(yè)務(wù)運(yùn)行、檢測(cè)前樣本質(zhì)量、性能驗(yàn)證、檢測(cè)中實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控、檢測(cè)后是否拆分、拆分陽(yáng)性率、室間質(zhì)評(píng)等的綜合評(píng)價(jià)領(lǐng)域，亟需建立一套系統(tǒng)、科學(xué)、有效、綜合的評(píng)價(jià)方法，制定業(yè)務(wù)發(fā)展和實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理相適應(yīng)的質(zhì)量指標(biāo)，建立同行實(shí)驗(yàn)室之間標(biāo)桿比對(duì)的體系[3]。本研究對(duì)本中心核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室2017年1月至2020年12月核酸檢測(cè)質(zhì)量監(jiān)控中常用的指標(biāo)進(jìn)行分析，探究本實(shí)驗(yàn)室核酸檢測(cè)自身業(yè)務(wù)運(yùn)行和質(zhì)量管理效果的真實(shí)狀態(tài)，有助于實(shí)驗(yàn)室利用系統(tǒng)、科學(xué)的綜合評(píng)價(jià)結(jié)果，確保血液檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、及時(shí)、有效。

1 材料與方法

1.1 核酸檢測(cè)設(shè)備和試劑

本研究使用兩套核酸檢測(cè)系統(tǒng)，A系統(tǒng)和B系統(tǒng)兩套系統(tǒng)互為備用，混樣分項(xiàng)目檢測(cè)，每批檢測(cè)均依據(jù)試劑說明書設(shè)置陰性質(zhì)控和陽(yáng)性質(zhì)控，每個(gè)pool均含內(nèi)標(biāo)。室內(nèi)質(zhì)控濃度為最低檢測(cè)限2～5倍并且與已知陰性樣本混樣檢測(cè)，第三方室內(nèi)質(zhì)控品監(jiān)控，A系統(tǒng)室內(nèi)質(zhì)控濃度分別為：50 IU/mL、200 IU/mL、1000 IU/mL；B系統(tǒng)200 IU/mL、2000 IU/mL、2000 IU/mL。按照混樣規(guī)則進(jìn)行混樣檢測(cè)，混樣檢測(cè)為反應(yīng)性的pool挑選出樣本，進(jìn)一步做拆分實(shí)驗(yàn)，拆分實(shí)驗(yàn)為反應(yīng)性的標(biāo)本判定為核酸檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性，無(wú)反應(yīng)性則判定為核酸檢測(cè)結(jié)果陰性。

1.2 資料來源于本中心核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室

對(duì)2017年1月至2020年12月核酸檢測(cè)的基本情況進(jìn)行回顧性分析。

1.3 監(jiān)測(cè)指標(biāo)

樣本數(shù)、檢測(cè)批次、匯集陽(yáng)性pool數(shù)、陽(yáng)性標(biāo)本數(shù)、核酸檢出率、拆分檢出率、樣本采集錯(cuò)誤數(shù)量、樣本采集錯(cuò)誤率、室間質(zhì)評(píng)滿分次數(shù)、室間質(zhì)評(píng)滿意度、室內(nèi)質(zhì)控失控次數(shù)、室內(nèi)質(zhì)控失控率、實(shí)驗(yàn)失敗次數(shù)、實(shí)驗(yàn)失敗率、設(shè)備故障天數(shù)、設(shè)備故障率。

1.4 常用質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)計(jì)算方式

1.4.1 核酸陽(yáng)性情況相關(guān)指標(biāo)

核酸檢出率=（核酸陽(yáng)性標(biāo)本數(shù)/檢測(cè)標(biāo)本總數(shù)）×100%。

拆分檢出率=（拆分陽(yáng)性標(biāo)本數(shù)/混樣陽(yáng)性pool數(shù)）×100%。

1.4.2 樣本采集錯(cuò)誤率

樣本采集錯(cuò)誤率=（樣本錯(cuò)誤/樣本總數(shù)）×100%。

1.4.3 室間質(zhì)評(píng)滿意度

室間質(zhì)評(píng)滿意度=（室間質(zhì)評(píng)100分次數(shù)/參加總次數(shù)）×100%。

1.4.4 室內(nèi)質(zhì)控失控率

室內(nèi)質(zhì)控失控率=（第三方室內(nèi)質(zhì)控失控批次/總實(shí)驗(yàn)批次）×100%。

1.4.5 實(shí)驗(yàn)失敗率

實(shí)驗(yàn)失敗率=（實(shí)驗(yàn)失敗批次/總實(shí)驗(yàn)批次）×100%。

1.4.6 設(shè)備故障率

設(shè)備故障率=（設(shè)備故障天數(shù)/可使用天數(shù)）×100%。

2 結(jié)果

A系統(tǒng)與B系統(tǒng)比較，見表1。

表1 A系統(tǒng)與B系統(tǒng)質(zhì)量監(jiān)測(cè)指標(biāo)比較（n,%）

3 討論

血站實(shí)驗(yàn)室可借鑒國(guó)際通用的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量指標(biāo)體系框架。如2010年美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）頒布了《建立使用質(zhì)量指標(biāo)實(shí)施實(shí)驗(yàn)室過程改進(jìn)和質(zhì)量監(jiān)控》(GP35 A)[4]，2017年，我國(guó)國(guó)家衛(wèi)計(jì)委頒布了《臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量指標(biāo)》(WS/T496 2017)，為我國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量指標(biāo)體系的建立提供了標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)[5]。烏魯木齊2017年1月至2020年12月共檢測(cè)核酸樣本229136例，采用幾種主要指標(biāo)對(duì)核酸檢測(cè)日常運(yùn)行情況進(jìn)行監(jiān)控，質(zhì)量指標(biāo)項(xiàng)目主要來源于每月給國(guó)家衛(wèi)健委上報(bào)的質(zhì)量指標(biāo)[3]，2017～2020年總體核酸檢測(cè)情況，A系統(tǒng)和B系統(tǒng)比較，核酸檢出率、實(shí)驗(yàn)失敗率有顯著性差異（P＜0.05），其余無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；兩個(gè)系統(tǒng)均進(jìn)行兩兩比較，A系統(tǒng)樣本采集錯(cuò)誤率2018年與2019年有顯著性差異（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)失敗率2017年與2018年有顯著性差異（P＜0.05），其余無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；B系統(tǒng)設(shè)備故障率：2017年與2020年有顯著性差異（P＜0.05），設(shè)備故障率：2018年與2020年有差異（P＜0.05），其余無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；樣本采集錯(cuò)誤率0.010%，標(biāo)本錯(cuò)誤主要原因是：樣本不足量、核酸酶免試管條碼貼錯(cuò)、集中化樣本因冷凍后在運(yùn)輸過程中導(dǎo)致嚴(yán)重溶血；核酸檢出率A系統(tǒng)0.091%高于B系統(tǒng)0.043%，主要與檢測(cè)試劑最低檢出限等有關(guān)；A系統(tǒng)拆分檢出率56.949%，與山東[6]接近，反映匯集反應(yīng)性pool拆分效率的指標(biāo)，本實(shí)驗(yàn)室在每月分析中可以看出，在檢測(cè)室間質(zhì)評(píng)之后的1周拆分效率較低，可能是室間質(zhì)評(píng)樣本中有HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA陽(yáng)性樣本，檢測(cè)之后沒有消毒徹底導(dǎo)致；室間質(zhì)評(píng)滿意度12次結(jié)果均為100分，但其中一次B系統(tǒng)核酸檢測(cè)設(shè)備檢測(cè)結(jié)果中，有一室間質(zhì)評(píng)樣本HIV項(xiàng)目混樣檢測(cè)結(jié)果為陰性，但仔細(xì)觀察擴(kuò)增圖異常才分析得出正確結(jié)果；室內(nèi)質(zhì)控失控率較低，主要出現(xiàn)為HCV RNA匯集未檢測(cè)出，室內(nèi)質(zhì)控失控及時(shí)填寫失控報(bào)告并進(jìn)行分析；實(shí)驗(yàn)失敗率，A系統(tǒng)低于B系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)失敗主要為陽(yáng)性未檢測(cè)出、內(nèi)標(biāo)未出、陰性檢測(cè)到陽(yáng)性結(jié)果、實(shí)驗(yàn)室溫度超出30 ℃、實(shí)驗(yàn)室干燥、人為因素、其他原因?qū)嶒?yàn)失敗等；設(shè)備故障率，主要為匯集表現(xiàn)為未加上樣本頻繁；提取故障主要表現(xiàn)為維護(hù)無(wú)法進(jìn)行、設(shè)備報(bào)錯(cuò)、提取磁珠異常等；擴(kuò)增故障未出現(xiàn)過。本實(shí)驗(yàn)室機(jī)采血小板、RH樣本按照混樣規(guī)則分配在不同的pool中，與全血已知陰性樣本混樣，拆分當(dāng)日進(jìn)行，保證樣本在采集后72 h內(nèi)發(fā)放結(jié)果，并且機(jī)采血小板、RH樣本可提前檢測(cè)出結(jié)果，運(yùn)行效果良好。

本研究的實(shí)驗(yàn)室在2016年建立了實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系之后，通過新疆臨檢中心PCR實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收，本研究通過對(duì)本實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量指標(biāo)的分析探索，不斷持續(xù)改進(jìn)，以提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力。