連 溯 劉雪玲 莫秋艷 王金花 王慶高 傅葉葉 蘇虹月

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院超聲科，南寧市 530023，電子郵箱：271857173@qq.com)

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(coronary atherosclerotic heart disease，CAD)是全球最常見的心臟病之一，以進行性冠狀動脈粥樣硬化閉塞為特征，患者心肌供需不匹配，嚴(yán)重時可出現(xiàn)心肌梗死、心力衰竭，甚至死亡[1]。脂肪由脂肪源性干細(xì)胞、前脂肪細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞組成，可分泌上百種生物活性成分，包括瘦素、脂聯(lián)素、脂肪酶、補體或細(xì)胞因子(例如腫瘤壞死因子、趨化因子等)[2-3]。根據(jù)旁分泌特征不同可將脂肪分為皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪兩類。心外膜脂肪組織(epicardial adipose tissue，EAT)是內(nèi)臟脂肪的一種，位于心肌和心包臟層之間，與心肌直接接觸，由冠狀動脈分支供血，并圍繞冠狀動脈下行至心尖，參與小血管和微血管管壁的構(gòu)成。EAT與心肌或冠狀動脈壁可通過細(xì)胞、代謝物或信號分子直接進行串?dāng)_[4]。EAT可以防止高水平的循環(huán)游離脂肪酸對心肌和冠狀動脈產(chǎn)生毒性作用，也可以促進心肌和冠狀血管的局部炎癥反應(yīng)[5]。相較于被心肌包圍的節(jié)段(中部分支和心肌橋下)，冠狀動脈粥樣硬化更可能發(fā)生在被 EAT 包圍的節(jié)段中[6]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，實驗性去除血管周圍的EAT，可阻止豬冠狀動脈粥樣硬化的進一步發(fā)展[7]。還有研究顯示，EAT炎癥與冠狀動脈痙攣之間存在明顯的關(guān)聯(lián)，提示冠狀動脈與EAT之間具有潛在的相互作用[8]。但目前關(guān)于EAT參與CAD的機制尚未完全明確。本研究基于兩個獨立的微陣列數(shù)據(jù)庫對EAT和皮下脂肪組織的差異表達(dá)基因進行分析，探討EAT參與CAD發(fā)展的分子機制，為尋找新的CAD生物標(biāo)志物及制定新的治療策略提供參考。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)來源 通過GEO數(shù)據(jù)庫(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)，查找并篩選出已接受冠狀動脈旁路移植術(shù)的CAD患者，同時具有EAT和皮下脂肪組織的轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)及表達(dá)矩陣的2個數(shù)據(jù)集：GSE24425和GSE64554。GSE24425使用Illumina Human WG-6 V3.0芯片，包含6個成對的EAT和皮下脂肪組織樣本。GSE64554使用Illumina Human HT-12 V3.0芯片，包含13個成對的EAT和皮下脂肪組織樣本。需要使用R語言軟件(http://www.r-project.org/)對數(shù)據(jù)進行歸一化的線性處理，以確保數(shù)據(jù)集的完整性和可比性。

1.2 差異表達(dá)基因的篩選 應(yīng)用R語言環(huán)境的“edgeR”包對數(shù)據(jù)集GSE24425、GSE64554中CAD患者EAT與皮下脂肪組織之間的差異表達(dá)基因進行篩選。差異表達(dá)基因需同時滿足以下條件：(1)∣log2倍數(shù)變化∣>2；(2)P<0.05。

1.3 差異表達(dá)基因的生物信息學(xué)分析 采用Metascape在線數(shù)據(jù)庫(https://metascape.org)對差異表達(dá)基因進行基因本體論(Gene Ontology,GO)分析和京都基因與基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析。最小富集度設(shè)定為1.5，P<0.05，最小計數(shù)為3。

1.4 差異表達(dá)基因的相互作用分析 將差異表達(dá)基因?qū)朐诰€數(shù)據(jù)庫Metascape，數(shù)據(jù)庫內(nèi)置STRING6(http://www.stringdb.org/)、BioGrid7(http://thebiogrid.org/)、OmniPath8(http://omnipathdb.org/)和InWeb/u IM9(http://www.inweb.org.br/)，構(gòu)建CAD患者心包脂肪差異表達(dá)基因蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction，PPI)網(wǎng)絡(luò)，設(shè)定條件為STRING的物理相互作用評分>0.187。結(jié)果網(wǎng)絡(luò)中差異表達(dá)基因兩兩之間的聯(lián)系節(jié)點≥1。運用Cytoscape 3.1.2軟件進行可視化分析，使用軟件中的插入式分子復(fù)合物檢測(MCODE插件，使用默認(rèn)參數(shù)，最小網(wǎng)絡(luò)節(jié)點設(shè)置為3)篩選出PPI網(wǎng)絡(luò)中的樞紐模塊和關(guān)鍵基因，然后對關(guān)鍵基因進行GO分析。

1.5 與關(guān)鍵基因相關(guān)的微小RNA的預(yù)測 利用在線預(yù)測工具微小RNA(microRNA，miRNA)數(shù)據(jù)集成門戶網(wǎng)站mirDIP(http://ophid.utoronto.ca/)對潛在的miRNA進行靶向預(yù)測。提交篩選出的關(guān)鍵基因，選擇每種基因的前3個預(yù)測miRNA，同時，采用miRBase數(shù)據(jù)庫(http://www.mirbase.org)驗證關(guān)鍵模塊基因與預(yù)測miRNA的相關(guān)性。

2 結(jié) 果

2.1 差異表達(dá)基因的篩選結(jié)果 對數(shù)據(jù)集GSE24425、GSE64554進行篩選，共得到179個差異表達(dá)基因，其中，下調(diào)基因92個，上調(diào)基因87個。取兩個數(shù)據(jù)集的交集后，得到76個差異表達(dá)基因，其中上調(diào)基因41個，下調(diào)基因35個。見圖1、圖2。

圖1 差異表達(dá)基因的分布火山圖

圖2 數(shù)據(jù)集GSE24425、GSE64554的交集基因

2.2 差異表達(dá)基因的GO富集分析 41個上調(diào)基因主要與嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophil,EOS)趨化性、細(xì)胞對脂質(zhì)的反應(yīng)、后腦發(fā)育、細(xì)胞外基質(zhì)等生物學(xué)過程有關(guān)；而35個下調(diào)基因主要與胚胎骨骼系統(tǒng)發(fā)育、細(xì)胞外基質(zhì)、上皮管形態(tài)發(fā)生、上皮細(xì)胞分化等生物學(xué)過程有關(guān)，見表1。

表1 差異表達(dá)基因的GO富集過程圖

2.3 差異表達(dá)基因KEGG富集分析 76個差異表達(dá)基因主要參與細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、朊病毒病、精氨酸和脯氨酸代謝信號通路，見表2。

表2 差異表達(dá)基因的通路注釋結(jié)果

2.4 差異表達(dá)基因PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建與分析 采用Metascape在線工具內(nèi)置的STRING構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，采用Cytoscape 3.1.2軟件進行可視化分析，結(jié)果如圖3、圖4所示。采用MCODE插件分析獲得的最顯著的相互作用模塊，結(jié)果共得出10個關(guān)鍵基因，其中，上調(diào)基因中的關(guān)鍵基因有CC基序趨化因子配體(C-C motif chemokine ligand,CCL)2、CCL5、CCL8、CCL21、早期生長反應(yīng)蛋白2(early growth response 2,EGR2)和白細(xì)胞介素7受體(interleukin 7 receptor，IL-7R)，見圖5；下調(diào)基因中的關(guān)鍵模塊基因有同源異型盒(homeobox，HOX)A5、HOXB5、HOXB7、HOXC8，見圖6。關(guān)鍵上調(diào)基因與EOS趨化性、EOS遷移和趨化因子受體結(jié)合生物學(xué)過程相關(guān)；關(guān)鍵下調(diào)基因與胚胎骨骼系統(tǒng)形態(tài)發(fā)生、胚胎骨骼系統(tǒng)發(fā)育和前/后模式規(guī)范生物學(xué)過程相關(guān)，見表3。

表3 關(guān)鍵基因GO富集

圖3 上調(diào)基因PPI網(wǎng)絡(luò)圖 圖4 下調(diào)基因PPI網(wǎng)絡(luò)圖

圖5 上調(diào)基因關(guān)鍵模塊圖 圖6 下調(diào)基因關(guān)鍵模塊圖

2.5 miRNA預(yù)測結(jié)果 hsa-miRNA-196a-5p和hsa-miRNA-196b-5p均與HOXA5、HOXB7、HOXC8高度相關(guān)。見表4。

表4 關(guān)鍵基因的前3個預(yù)測miRNA

3 討 論

本研究通過生物信息學(xué)分析方法，從GSE24425、GSE64554芯片中篩選出CAD患者的心包脂肪組織和皮下脂肪組織之間的差異表達(dá)基因共179個，取兩個數(shù)據(jù)集的交集后，獲得上調(diào)基因41個，下調(diào)基因35個。通過構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，獲得2個關(guān)鍵模塊共10個關(guān)鍵基因：CCL2、CCL5、CCL8、CCL21、EGR2、IL-7R、HOXA5、HOXB5、HOXB7、HOXC8。通過預(yù)測與關(guān)鍵基因相關(guān)的miRNA，發(fā)現(xiàn)hsa-miR-196a-5p和hsa-miR-196b-5p均與HOXA5、HOXB7、HOXC8高度相關(guān)。

CAD的發(fā)生是多因素共同作用的復(fù)雜過程，包括動脈粥樣硬化、血栓形成、冠狀動脈痙攣等，其最重要的病理基礎(chǔ)為動脈粥樣硬化。動脈粥樣硬化以動脈壁內(nèi)的慢性炎癥性反應(yīng)為特征，表現(xiàn)為脂質(zhì)、細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞的聚集并浸潤血管壁。趨化因子是相對分子量介于8 000～12 000之間的蛋白質(zhì)，介導(dǎo)細(xì)胞運動(趨化性)、白細(xì)胞脫粒和血管生成[9]。趨化因子序列高度保守，具有相似的結(jié)構(gòu)，一般由N端Loop區(qū)、3個反向平行的β折疊和1個碳端α螺旋組成[10]。根據(jù)N端半胱氨酸殘基的數(shù)量和位置，將其分為4個趨化因子亞家族：C、CC、CXC和CX3C。CCL2、CCL5、CCL8和CCL21均屬于趨化因子CC亞家族。一種趨化因子可以結(jié)合多種趨化因子受體，反之亦然，它們相互作用構(gòu)成了復(fù)雜的趨化因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，趨化因子及其受體協(xié)調(diào)免疫細(xì)胞的活化、募集和浸潤，以及隨后的炎癥表型變化。因此，在CAD發(fā)生和發(fā)展的各個階段中，趨化因子及其受體是以網(wǎng)絡(luò)形式而不是單個細(xì)胞因子形式起作用。本研究中，GO富集結(jié)果顯示，上調(diào)基因CCL2、CCL5、CCL8和CCL21大量存在于細(xì)胞外基質(zhì)中，這或可增強嗜酸性粒細(xì)胞趨化性，介導(dǎo)嗜酸性粒細(xì)胞的遷移，并通過趨化因子-趨化因子受體結(jié)合作用參與CAD。

CCL2可與CC趨化因子受體(C-C motif chemokine receptor,CCR)1結(jié)合，與慢性促炎狀態(tài)相關(guān)[11-12]。CCL2還可刺激內(nèi)皮細(xì)胞與CCR的相互作用[13]，并在動脈粥樣硬化斑塊中大量表達(dá)[14]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，動脈粥樣硬化患者的血清CCL2水平與冠狀動脈鈣化有關(guān)[15]；與CCL2低水平表達(dá)的患者相比，血清CCL2高水平表達(dá)的CAD患者的冠狀動脈斑塊更不穩(wěn)定，因此CCL2水平是預(yù)測高危冠狀動脈斑塊的血清學(xué)指標(biāo)[16]。最近有研究顯示， CCL2 被以晝夜節(jié)律方式振蕩的髓樣細(xì)胞有節(jié)奏地釋放到動脈內(nèi)皮中[17]，基于該研究結(jié)果提出的 “慢性藥理學(xué)治療策略”，針對動脈粥樣硬化性髓樣細(xì)胞作用的峰值，強調(diào)將復(fù)雜的手術(shù)安排在CCL2釋放量較少的時間進行。

CCL5能結(jié)合CCR1、CCR3和CCR5等多種受體[18]。研究顯示，血小板衍生的CCL5沉積在活化的內(nèi)皮細(xì)胞上可引起單核細(xì)胞停滯，從而在動脈粥樣硬化病變的發(fā)展中具有關(guān)鍵作用[19]；其還可促進單核細(xì)胞在內(nèi)皮上停滯以及免疫細(xì)胞浸潤到病變中，從而促進動脈粥樣硬化的形成[20-21]。CCL5水平升高與較大的動脈粥樣硬化病變有關(guān)[22-23]。盡管CCL5在動脈粥樣硬化斑塊的形成和失穩(wěn)過程中具有重要作用，但其在CAD發(fā)生、發(fā)展中的作用仍存在爭議。例如，在Versteylen等[22]的研究結(jié)果顯示，與狹窄程度小于50%的患者相比，阻塞性CAD患者的CCL5顯著升高。Kong等[23]的研究卻表明，動脈粥樣硬化病變進展較輕的CAD患者的CCL5濃度更高。

CCL8主要來源于巨噬細(xì)胞，主要與CCR1、CCR2、CCR3、CCR5和CCR8結(jié)合發(fā)揮作用[24]。目前關(guān)于CCL8在心臟疾病中的作用研究較少。Dai等[25]的體外細(xì)胞實驗表明，經(jīng)血小板衍生生長因子-BB刺激后人主動脈平滑肌細(xì)胞(human aortic smooth muscle cell,HASMC)中CCL8的表達(dá)上調(diào)，表達(dá)上調(diào)的CCL8又可促進血小板衍生生長因子-BB增殖和遷移，并通過調(diào)節(jié)HASMC中關(guān)鍵分子的表達(dá)來加速細(xì)胞周期和表型的轉(zhuǎn)換，將正常靜止?fàn)顟B(tài)下的收縮表型轉(zhuǎn)變成為具有強大增殖和遷移能力的促炎表型，而沉默CCL8具有相反的作用，這表明CCL8可能是動脈粥樣硬化的治療靶標(biāo)。

CCL21和CCL19共享相同的受體CCR7，與正常人相比，頸動脈粥樣硬化患者血漿中的CCL19和CCL21水平上調(diào)[26]。體外實驗表明，CCL21具有促進巨噬細(xì)胞脂質(zhì)蓄積的作用，或可直接促進動脈粥樣硬化的發(fā)展[27]。急性心肌梗死動物模型的循環(huán)CCL21水平和心臟CCR7的水平升高，通過靜脈注射抗CCL21單克隆抗體中和CCL21可減少急性心肌梗死后的梗死面積，降低急性心肌梗死后血清中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞化學(xué)引誘劑的水平，抑制梗死心肌中中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的募集，且抗CCL21治療也可緩解心臟擴大并改善左心室功能，由此推測CCL21參與了急性心肌梗死后的心臟重塑[28]。

針對CAD中趨化因子及其受體作用機制的研究絕大多數(shù)定位于巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的經(jīng)典炎癥途徑，而探討EOS介導(dǎo)的過敏性炎癥途徑的研究較少。既往研究表明EOS可能具有促炎和促凝血的功能[29]，其能夠產(chǎn)生活性氧，誘導(dǎo)內(nèi)皮損傷和血小板活化，從而促進血栓形成，并增強冠狀動脈血管收縮[30]。血清EOS濃度升高可能與心壁血栓和栓塞事件有關(guān)[31]，是冠狀動脈疾病患者危險分層的新生物標(biāo)志物[32]。此外，嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白(eosinophil cationic protein,ECP)是EOS的活化標(biāo)志物，較高的血清ECP水平與置入藥物洗脫支架和裸金屬支架患者的不良預(yù)后有關(guān)[33]。而有研究顯示，藥物洗脫支架的EOS浸潤濃度比裸金屬支架更高，且藥物洗脫支架植入后6周的EOS總數(shù)是支架內(nèi)再狹窄發(fā)生的唯一預(yù)測因子，這表明經(jīng)皮冠狀動脈介入術(shù)治療后患者對藥物洗脫支架的免疫敏感性反應(yīng)與支架內(nèi)再狹窄的發(fā)生存在關(guān)聯(lián)[34]。因此，EOS介導(dǎo)的過敏性炎癥途徑在CAD發(fā)生、發(fā)展中的作用值得進一步探討。結(jié)合本研究結(jié)果，CAD患者EAT中的CCL2、CCL5、CCL8和CCL21表達(dá)上調(diào)，其通過與CCR結(jié)合增強細(xì)胞對脂質(zhì)的反應(yīng)，并可能通過促進免疫細(xì)胞激活和聚集，參與粥樣硬化斑塊的形成；同時，這些因子可增強嗜酸性粒細(xì)胞的遷移和趨化，通過過敏性炎癥途徑，增強冠狀動脈收縮，促進血栓生成，參與CAD的發(fā)展并影響治療后的轉(zhuǎn)歸。

白細(xì)胞介素7受體(interleukin 7 receptor,IL-7R)的生物學(xué)效應(yīng)主要通過與白細(xì)胞介素7(interleukin 7，IL-7)相結(jié)合來完成。IL-7/IL-7R 對骨髓、胸腺的中樞性T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞的發(fā)育和成熟具有重要作用，并可上調(diào)抗凋亡蛋白，下調(diào)促凋亡蛋白，抑制已分化和激活的T淋巴細(xì)胞凋亡[35]。結(jié)合本研究關(guān)鍵基因的富集分析結(jié)果，IL-7R與細(xì)胞間黏附的調(diào)節(jié)和細(xì)胞活性的調(diào)節(jié)相關(guān)，因此，IL-7R可能通過調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的黏附和免疫活性來參與CAD的發(fā)生、發(fā)展。EGR2是EGR家族中的一員，目前，人們對于EGR家族的認(rèn)識主要集中在調(diào)控神經(jīng)功能可塑性方面。EGR2可反式調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、凋亡及轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為[36]，在周圍神經(jīng)髓鞘形成、T淋巴細(xì)胞成熟、后腦分割和脂質(zhì)生物合成中起重要作用[37]。本研究的關(guān)鍵基因富集結(jié)果提示EGR2具有運輸和趨化作用，因此我們認(rèn)為，EGR2可能是趨化因子的活性調(diào)節(jié)和定向黏附基因。盡管關(guān)于IL-7及其受體信號途徑在病毒感染、骨髓移植、免疫重建中作用的研究，以及EGR2在大腦神經(jīng)發(fā)育等領(lǐng)域中的研究均較多，但兩者在心臟領(lǐng)域中的研究幾乎均為空白，今后需開展相關(guān)研究探討兩者在心臟領(lǐng)域中的作用。

HOX由180個核苷酸構(gòu)成，其堿基順序和在染色體中的位置高度保守，通過其同源域識別并結(jié)合特異的DNA序列[38-39]。HOX基因在不同的染色體上成簇排列又稱HOX基因簇。哺乳動物共有39個HOX基因，按結(jié)構(gòu)劃分為4簇，即HOXA、HOXB、HOXC、HOXD；根據(jù)序列同源性及其在簇中的相對位置，HOX又分為13個旁系同源基因組，它們在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和表達(dá)模式上具有相似性[40]。 HOX基因編碼的轉(zhuǎn)錄因子可以調(diào)節(jié)目標(biāo)基因的表達(dá)，以及早期胚胎發(fā)育過程中脂肪組織和心血管系統(tǒng)等多種結(jié)構(gòu)和器官的形成和發(fā)育；出生后HOX基因仍持續(xù)表達(dá)，參與維持血管壁的完整性、體內(nèi)平衡和破壞后的血管重塑。研究表明，在正常人群中，與皮下脂肪相比，內(nèi)臟脂肪中HOXA5高表達(dá)[41]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠脂肪組織中HOXA5的表達(dá)降低[42]。還有類似的研究表明，高脂飲食小鼠脂肪組織中的HOXA5基因高度甲基化，使HOXA5 mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào)，而恢復(fù)標(biāo)準(zhǔn)飲食兩個月后，小鼠體重減輕，HOXA5甲基化和mRNA水平幾乎完全恢復(fù)正常[43]。本研究中，HOXA5在CAD患者EAT中呈低表達(dá)，與肥胖狀態(tài)下內(nèi)臟脂肪組織的HOXA5的表達(dá)類似[44]。肥胖是公認(rèn)的CAD的危險因素之一，因此，我們認(rèn)為CAD患者保持健康的生活方式并關(guān)注其肥胖程度，可能有助于HOXA5表達(dá)恢復(fù)正常水平，但這需要進一步研究。同時，HOX基因參與維持血管壁的完整性、體內(nèi)平衡，以及破壞后的血管重塑，在血管床的不同部位其表達(dá)有所不同。HOX基因可通過表觀遺傳機制調(diào)節(jié)血管壁干細(xì)胞向血管平滑肌細(xì)胞分化，而血管壁干細(xì)胞的失調(diào)在動脈粥樣硬化和新內(nèi)膜斑塊形成中起重要作用[45-46]。這可能是某些部位更容易發(fā)生粥樣硬化的原因之一。

此外，較高的生理性剪切應(yīng)力具有保護性，在動脈的分支和彎曲處，容易出現(xiàn)血流紊亂的血流模式進而產(chǎn)生低剪切應(yīng)力。研究表明，在血流紊亂的情況下，HOXA5的啟動子在小鼠主動脈中高度甲基化(即轉(zhuǎn)錄被抑制)，這種HOXA5過度甲基化可激活血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥表型從而導(dǎo)致炎癥增加[47]。Jiang等[48]的研究結(jié)果也顯示，HOXA5在豬主動脈的紊流區(qū)域中被甲基化。有學(xué)者指出，HOX基因在主動脈中的表達(dá)模式是由胚胎模式中建立的“HOX代碼”決定，具有指定位置同一性的保守特點，“HOX代碼”失調(diào)時，會促進動脈粥樣硬化的發(fā)展[49]。本研究中，除HOXA5基因外，HOXB5、HOXB7和HOXC8這3個關(guān)鍵基因在CAD的EAT中表達(dá)下調(diào)。既往研究中，上述基因被證實是預(yù)測癌癥預(yù)后的生物標(biāo)志物和治療靶標(biāo)，包括胰腺癌[50]、皮膚鱗狀細(xì)胞癌[51]、卵巢癌[52]等，但其在CAD中的作用卻少有研究。然而，由于 HOX 在調(diào)節(jié)Wnt信號通路、抑制轉(zhuǎn)化生長因子、絲裂原活化蛋白激酶、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B、核因子κB、Notch、缺氧誘導(dǎo)因子1、扭體家族bHLH轉(zhuǎn)錄因子1等多種信號通路中具有重要功能[46]。因此，我們認(rèn)為HOX基因的下調(diào)可以抑制保護性脂肪細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄、促發(fā)成年人動脈振蕩血流區(qū)域的動脈粥樣硬化，進而在CAD的病理生理過程中發(fā)揮重要作用。

本研究采用在線工具預(yù)測與關(guān)鍵模塊基因相關(guān)的miRNA，在這些 miRNA 中，hsa-miRNA-196a-5p和hsa-miRNA-196b-5p與下調(diào)關(guān)鍵基因HOXA5、HOXB7和HOXC8均高度相關(guān)。目前有研究表明，hsa-miRNA-196a/b可直接或間接調(diào)控人臀部脂肪組織中HOX基因的表達(dá)，HOXA5在hsa-miRNA-196a的調(diào)節(jié)下抑制胃癌的腫瘤生長[53]，hsa-miRNA-196a通過靶向促進骨肉瘤中HOXA5 mRNA的3′-非翻譯區(qū)來促進細(xì)胞遷移、侵襲和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化[54]。但是，這兩個 miRNA 在 CAD中的作用如何，仍需進行更多的探索。

綜上所述，CCL2、CCL5、CCL8、CCL21、EGR2、IL-7R、HOXA5、HOXB5、HOXB7和HOXC8在CAD患者EAT中表達(dá)失調(diào)，EAT可能通過HOX基因、hsa-miRNA-196/HOX信號通路及CCL促炎基因，以旁分泌的方式，通過趨化免疫細(xì)胞聚集，抑制保護性脂肪細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄、改變冠狀動脈動脈血管表型參與到CAD的病理機制中。