于 瀟

（沈陽(yáng)金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司實(shí)驗(yàn)室診斷部，遼寧 沈陽(yáng) 110164）

由乙型肝炎病毒感染引起的感染性肝炎稱為乙型肝炎。目前，常用五項(xiàng)乙型肝炎檢查來(lái)判斷患者病情的嚴(yán)重程度和傳染性[1]。五項(xiàng)血清臨床標(biāo)志物分別為HBsAg血清標(biāo)志物、HBeAb血清標(biāo)志物、HBeAg血清標(biāo)志物、HBcAb血清標(biāo)志物和HBsAb血清標(biāo)志物，檢測(cè)體內(nèi)乙型肝炎病毒感染的標(biāo)志物即“乙型肝炎五項(xiàng)”。在臨床實(shí)驗(yàn)室大多采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)乙型肝炎五項(xiàng)，該方法的特異性及臨床靈敏度高，但操作步驟較復(fù)雜，存在許多臨床問(wèn)題[2]。采用ELISA分析不同血清狀態(tài)和水浴時(shí)間對(duì)臨床乙型肝炎五項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果的影響，有助于提高臨床檢驗(yàn)質(zhì)量。本研究旨在探討酶聯(lián)免疫吸附法與臨床間接免疫熒光法檢測(cè)抗核抗體的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月至2019年1月在沈陽(yáng)金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司實(shí)驗(yàn)室診斷部的200例乙型肝炎五項(xiàng)臨床檢測(cè)樣本，并應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)臨床血清中的HBsAg濃度、血清中抗-HBs濃度、血清中HBeAg濃度、血清中抗-HBe濃度和血清中抗-HBc濃度五項(xiàng)標(biāo)志物。200例乙型肝炎五項(xiàng)檢測(cè)樣本男性109例，女性91例；年齡32～62歲，平均年齡（39.00±1.90）歲。

1.2 方法 晨起取患者空腹?fàn)顟B(tài)下的肘靜脈血12 mL，并其分為5等份，每等份2.4 mL，依次注入5根玻璃管。1個(gè)樣本未經(jīng)抗凝劑處理，1個(gè)樣本經(jīng)臨床抗凝劑處理，另外3個(gè)樣本分別在37.5 ℃水浴加熱20 min。所有標(biāo)本離心4000 r/min 30 min和40 min，并用ELISA法檢測(cè)血清HBsAg濃度、血清HBsAb濃度、血清HBeAg濃度、血清HBeAb濃度和血清HBcAb標(biāo)志物。選用北京普贊生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的5種臨床乙型肝炎檢測(cè)診斷試劑盒，型號(hào)為PZ-KJ-HDA324DD，并嚴(yán)格遵守臨床操作規(guī)范。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察并記錄不同水浴狀態(tài)下5種乙型肝炎病毒的陽(yáng)性檢出率和不同水浴時(shí)間的乙型肝炎陽(yáng)性檢出率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料采用（±s）表示，組間比較行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，組間比較行χ2檢驗(yàn)；P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

抗凝劑處理過(guò)的標(biāo)本陽(yáng)性率與未經(jīng)抗凝劑處理過(guò)的標(biāo)本陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；標(biāo)本水浴加熱20 min的陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果與標(biāo)本水浴加熱30 min的陽(yáng)性率及標(biāo)本水浴加熱40 min的陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 不同血清狀態(tài)乙型肝炎五項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果比較

3 討論

乙型肝炎是一種常見(jiàn)的臨床傳染病，如果不及時(shí)治療將發(fā)展為肝硬化、肝細(xì)胞癌，嚴(yán)重影響臨床患者的生活和健康[3]。ELISA快速、可靠，在我國(guó)臨床上得到了廣泛的應(yīng)用[4]。因此，常用于5種臨床乙型肝炎項(xiàng)目的檢測(cè)中，但在檢測(cè)過(guò)程中有許多影響因素會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)誤差[5]。使用抗凝劑會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性率增加，這是因?yàn)榭鼓齽┰贓LISA中起到促進(jìn)或抑制過(guò)氧化物酶的作用而形成結(jié)合物。ELISA檢測(cè)不同水浴時(shí)間血液中乙型肝炎的結(jié)果不同[6]。水浴加熱時(shí)間越長(zhǎng)，陽(yáng)性率越低[6]。這是因?yàn)樵诓煌瑫r(shí)間水浴加熱的離心血清樣本中纖維蛋白和過(guò)氧化物酶細(xì)胞成分不均等，黏附在96孔板反應(yīng)孔上，最終導(dǎo)致假陽(yáng)性[7]。除了上述2種情況會(huì)影響ELISA的檢測(cè)結(jié)果外，筆者在日常工作中還總結(jié)了以下原因[8]：①標(biāo)本出現(xiàn)嚴(yán)重溶血，血紅蛋白中的亞鐵血紅素具有過(guò)氧化物酶樣活性，并能黏附在ELISA的反應(yīng)孔上。如果不洗掉則可催化底物產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果[9]。②標(biāo)本被細(xì)菌污染，有些細(xì)菌有內(nèi)源性酶或分泌能催化底物著色的酶并導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤。③抗體或抗原的免疫活性隨儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，導(dǎo)致假陰性結(jié)果[10]。④當(dāng)樣本中的HBsAg或（和）HBeAg濃度過(guò)高時(shí)會(huì)發(fā)生鉤子效應(yīng)，使強(qiáng)陽(yáng)性變?nèi)蹶?yáng)性或陰性。為了使ELISA結(jié)果更加準(zhǔn)確可采取以下措施：在檢測(cè)過(guò)程中使用新鮮的血清樣本，適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間、增加離心速度；在血液樣本自然凝固后將血清分離以確保血液樣本中的活性物質(zhì)完全失活，在樣本采集和臨床處理過(guò)程中應(yīng)盡量避免溶血的發(fā)生；在采集和臨床操作過(guò)程中應(yīng)避免細(xì)菌的污染；應(yīng)立即分離血清并低溫保存，高抗原濃度的樣本可適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行后續(xù)操作[11-13]。不同的血清狀態(tài)和水浴加熱時(shí)間可以影響乙型肝炎病毒的ELISA檢測(cè)，且在檢測(cè)過(guò)程中還存在其他臨床影響因素。乙型肝炎五項(xiàng)指標(biāo)被認(rèn)為是一項(xiàng)重要指標(biāo)，要求檢測(cè)人員要認(rèn)真負(fù)責(zé)，并按臨床規(guī)范操作，以減少誤差，同時(shí)做好室內(nèi)質(zhì)量控制，保證結(jié)果準(zhǔn)確、可信[14-16]。檢測(cè)乙型肝炎五項(xiàng)結(jié)果的影響因素可提高臨床檢查質(zhì)量。本研究發(fā)現(xiàn)，抗凝劑處理過(guò)的標(biāo)本陽(yáng)性率與未經(jīng)抗凝劑處理過(guò)的標(biāo)本陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；標(biāo)本水浴加熱20 min的陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果與標(biāo)本水浴加熱30 min的陽(yáng)性率及標(biāo)本水浴加熱40 min的陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

綜上所述，不同的血清狀態(tài)和水浴加熱時(shí)間可影響ELISA檢測(cè)五項(xiàng)乙型肝炎的結(jié)果，但在ELISA檢測(cè)過(guò)程中還存在其他影響因素。臨床試驗(yàn)單位應(yīng)分析ELISA檢測(cè)乙型肝炎五項(xiàng)指標(biāo)的臨床影響因素，以提高臨床檢測(cè)水平。