梁曉君，詹忠明，袁育珺，朱鈺力，歐陽(yáng)良良

(江西省九江學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 九江 332000)

周?chē)头伟┦桥R床常見(jiàn)的惡性腫瘤，其病灶位于三級(jí)支氣管以下、呼吸性細(xì)支氣管以上。由于周?chē)头伟┹^隱蔽，不易被發(fā)現(xiàn)，且發(fā)現(xiàn)時(shí)已晚。盡管現(xiàn)代診療水平不斷上升，但周?chē)头伟┑拈L(zhǎng)期生存時(shí)間與過(guò)去20年相比并無(wú)明顯改善。提高肺癌生存期的關(guān)鍵手段是早期診斷，miRNA-21異常高表達(dá)與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，而腫瘤標(biāo)志物即膜聯(lián)蛋白Ⅱ(Annexin Ⅱ)在肺癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用。所以本研究通過(guò)檢測(cè)周?chē)头伟┗颊咧夤芄嘞匆?BALF)及血清中miRNA-21和膜聯(lián)蛋白Ⅱ新型有潛力的腫瘤標(biāo)記物的表達(dá)水平，旨在分析測(cè)定腫瘤標(biāo)志物時(shí)BALF標(biāo)本miRNA-21和膜聯(lián)蛋白Ⅱ水平變化對(duì)于周?chē)头伟┗颊呒傲夹苑尾坎∽兓颊叩南嚓P(guān)性分析，并進(jìn)一步探討其對(duì)周?chē)头伟┗颊咴缙谠\斷及病情評(píng)估的價(jià)值，為臨床醫(yī)生提供了新的思路和方法?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：將2018年3月～2019年3月到我院呼吸內(nèi)科住院及門(mén)診進(jìn)行支氣管鏡檢的患者和到我院進(jìn)行體檢的健康者作為研究對(duì)象。其中存在周?chē)头伟┗颊?8例，將其設(shè)為周?chē)头伟┙M，存在肺良性病變44例，將其設(shè)為良性病變組，還有健康體檢者50例，將其設(shè)為對(duì)照組。周?chē)头伟┙M男20例，女18例，年齡25～69歲，平均(46.05±12.05)歲；良性病變組男23例，女21例，年齡24～70歲，平均(45.63±11.64)歲]；對(duì)照組男23例，女27例，年齡21～64歲，平均(41.63±11.64)歲。本次研究經(jīng)過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)纖維支氣管鏡、肺活檢或外科手術(shù)確診，有明確的組織學(xué)依據(jù)[1]；②資料完整；③采樣前未接受化療和放療等抗腫瘤治療[2]；④無(wú)外傷、骨折、原發(fā)性高血壓、糖尿病、冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重的其他腫瘤疾病的患者；②合并嚴(yán)重的血液疾病的患者[3]；③嚴(yán)重的器質(zhì)性病變；④精神障礙、意識(shí)障礙、無(wú)法進(jìn)行正常溝通和交流的患者。

1.3方法：所有研究對(duì)象入院之后采集清晨空腹靜脈血5 ml，其中3 ml進(jìn)行離心處理(4 000 r/min,20 min)，去除上清液之后，將其放置在無(wú)菌小塑料瓶之內(nèi)，放置在-20 ℃的冰箱當(dāng)中保存，待檢測(cè)。另外選擇2ml加入含有7.5%的EDTA二鈉40 μl(抗凝)與抑肽酶40 μl(抑酶)試管當(dāng)中混合均勻，然后進(jìn)行離心處理(4 000 r/min,20 min)，取上清液放置在無(wú)菌小塑料瓶當(dāng)中，同樣放置在-20 ℃的冰箱當(dāng)中保存，待檢測(cè)。

支氣管灌洗術(shù)以及相關(guān)標(biāo)本的處理，支氣管灌洗術(shù)按照Z(yǔ)avalaDC等方法來(lái)進(jìn)行，同時(shí)應(yīng)用纖維支氣管鏡進(jìn)行操作，將纖維支氣管鏡遠(yuǎn)端楔在腫瘤或者其他病變所在段的支氣管開(kāi)口部位，如病變完全阻塞段支氣管開(kāi)口，則在鄰近病灶上方支氣管開(kāi)口部位進(jìn)行沖洗。良性病變組患者，若胸片沒(méi)有明顯異常，則需要對(duì)左中葉和左舌葉段進(jìn)行沖洗，將纖維支氣管鏡楔入，通過(guò)37 ℃的滅菌生理鹽水分次注入，每次注入20 ml，共注入5次進(jìn)行灌洗。然后通過(guò)13.3 kPa的負(fù)壓吸引。支氣管灌洗平均回收率為47.39%(39%～67%)，支氣管肺泡灌洗經(jīng)過(guò)雙層紗布過(guò)濾之后裝入塑料試管中，進(jìn)行離心處理(4 000 r/min,20 min)，將上清液放置在-20 ℃的冰箱當(dāng)中等待檢測(cè)。另外選擇支氣管灌洗沉淀物涂片檢查癌細(xì)胞，支氣管灌洗術(shù)操作結(jié)束之后再進(jìn)行活檢、刷檢。

通過(guò)westernblot檢測(cè)患者肺癌細(xì)胞系當(dāng)中的Annexin Ⅱ水平，通過(guò)紫外分光光度計(jì)測(cè)定miRNA-21水平。

1.4觀察指標(biāo)：比較三組研究對(duì)象的miRNA-21、Annexin Ⅱ水平。

2 結(jié)果

周?chē)头伟┙M的miRNA-21、Annexin Ⅱ水平明顯比良性病變組和對(duì)照組高，良性病變組的相關(guān)水平明顯高于對(duì)照組，相互比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 三組研究對(duì)象的CTFRA21-1、Annexin Ⅱ水平比較

3 討論

近些年來(lái)開(kāi)展的支氣管肺泡灌洗(BALF)作為肺部疾病新的檢查手段在臨床上廣泛應(yīng)用。有研究表明，從腫瘤原發(fā)病變部位獲取標(biāo)本檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物，其敏感性高于血清學(xué)檢測(cè)，如對(duì)肺癌組織分泌至肺泡中的物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，其診斷敏感性高于血液標(biāo)本，可對(duì)周?chē)头伟┑脑\斷起輔助作用[4]。

通過(guò)本文的研究可以得出，周?chē)头伟┙M的miRNA-21、Annexin Ⅱ水平明顯比良性病變組和對(duì)照組高，良性病變組的相關(guān)水平明顯高于對(duì)照組。由此說(shuō)明肺癌患者和肺部良性病變患者的miRNA-21、Annexin Ⅱ水平相比存在差異，可為臨床對(duì)患者的病情診斷提供科學(xué)參考。而miRNAs可以對(duì)反義鏈豐富的靶基因進(jìn)行調(diào)控，從而影響惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。這提示miRNA 分子在腫瘤發(fā)生發(fā)展中具有潛在的重要作用。結(jié)果提示miRNA-21在包括周?chē)头伟┰趦?nèi)的多種腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中具有重要的作用。Annexin Ⅱ?qū)儆谝环N腫瘤標(biāo)志物，在肺癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用。臨床認(rèn)為Annexin Ⅱ在多種疾病以及癌癥中均有異常表達(dá)且與癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為以及預(yù)后密切相關(guān)[5]。所以在對(duì)肺癌的診斷中將BALF中Annexin Ⅱ作為腫瘤標(biāo)記物的檢測(cè)具有更高的敏感度，將來(lái)可作為一種理想的針對(duì)周?chē)头伟┰\斷的腫瘤標(biāo)記物。

綜上所述，經(jīng)過(guò)支氣管灌洗液、miRNA-21、膜聯(lián)蛋白Ⅱ檢測(cè)疑似肺癌患者有助于對(duì)肺癌患者進(jìn)行評(píng)估，可以鑒別肺癌和良性病變，是有效的診斷策略。