彭 婧 肖傳斌 王春秀

1.河南農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，鄭州450001；2.河南農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，鄭州450001

中國傳統(tǒng)中草藥板藍根性寒味苦，內(nèi)含靛甙、靛玉紅、生物堿和多糖等成分，具有清熱解毒、涼血消腫、利咽之功效[1-2]。板藍根多糖（IRP）是從板藍根中提取出的一類具有多種生理功能的活性多糖，由于其具有多種免疫調(diào)節(jié)功能，且天然、低毒、無殘留等優(yōu)點，成為近年人們研究的熱點。郭新華等[3]研究表明，板藍根多糖能顯著增加雛雞胸腺、脾臟和法氏囊等免疫器官指數(shù)，促進B細胞發(fā)育，提高雛雞新城疫疫苗免疫后血清抗體滴度；Qiu 等[4]研究證實，板藍根多糖能明顯促進T淋巴細胞增殖，進而提高雛雞ND-IB 二聯(lián)弱毒疫苗的血清抗體水平；許益明等[5]報道小鼠通過腹腔注射IRP 對非特異性免疫和特異性免疫均有一定的增強作用；張婷婷等[6]研究表明，在缺乳仔鼠飼料中添加一定劑量的板藍根多糖可以促進缺乳仔鼠免疫器官發(fā)育，增加正常小鼠的脾和胸腺指數(shù)；趙珊珊等[7]研究證明，板藍根多糖可以促進無初乳仔鼠十二指腸黏膜IgG 和SIgA陽性細胞的表達，增強無初乳仔鼠的消化道黏膜免疫功能。目前，對板藍根多糖的研究多限于其免疫增強功能，而對其促進消化道發(fā)育及增強黏膜免疫功能等研究甚少。賀琴等[8]報道酵母壁多糖能提高斷奶仔豬生產(chǎn)性能，促進斷奶仔豬消化道黏膜上皮細胞發(fā)育；路萬平等[9]證明，板藍根多糖可以促進缺乳仔鼠十二指腸發(fā)育，增加小腸黏膜絨毛高度，增強消化道消化吸收功能。本試驗?zāi)康氖翘接懓逅{根多糖對少乳仔鼠空腸形態(tài)學的影響，通過為板藍根多糖的開發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 器材及藥品

BM-VII 生物包埋機，購自孝感宏業(yè)醫(yī)用儀器有限公司；YD-A 智能型組織攤片機，購自金華益迪醫(yī)療設(shè)備廠；石蠟切片機，購自德國LEICA 公司；Leica 顯微鏡DM 2 000，購自德國LEICA 公司；圖像分析系統(tǒng)Moticam 2 306 3.0 Mplexl，購自美國Moti?cam公司；板藍根，購自河南省藥材公司。

1.2 試驗動物

40 只♀鼠、20 只♂鼠（2.5月齡SPF 級SD 大鼠）均購于鄭州大學醫(yī)學院實驗動物中心。

1.3 試驗方法

1）板藍根多糖的提取純化及測定。板藍根→粉碎→稱量→乙醚脫脂→熱水浸提→離心取上清液→殘渣重復浸提2次→合并上清液→減壓濃縮→透析→測含糖量→乙醇沉淀→有機溶劑洗滌→真空干燥，采用硫酸蒽酮法檢測板藍根多糖含量為89.89%。板藍根多糖用去離子水溶解，常規(guī)高壓消毒備用。

2）試驗動物分組和不同處理。2.5月齡SPF 級SD 大鼠，♀40 只、♂20 只，按雌雄比2∶1 隨機分20 組自由繁殖。母鼠分娩后，0日齡仔鼠按剪腳指（趾）甲法隨機分為4 組：A 組（初乳組）、B 組（少乳組）、C組（少乳+板藍根多糖中劑量組）、D 組（少乳+板藍根多糖高劑量組）。A 組仔鼠正常飼養(yǎng)，B、C 組仔鼠每天08:00 與母鼠分籠，20:00 與母鼠合籠。A～D組仔鼠每天19:00 分別灌胃0.9% NaCl、0.9% NaCl、20 mg/kg 板藍根多糖和40 mg/kg 板藍根多糖，灌胃劑量均按20μL 配制，1 次/d，連續(xù)灌胃7 d。各試驗組仔鼠均在21日齡斷奶。

3）試驗動物取材。試驗結(jié)束后，分別在仔鼠7、14、21、28日齡時取材，小鼠斷頭致死，迅速取空腸2～3 mm，浸入新配制的生理鹽水涮洗掉腸內(nèi)容物，Boin，s 固定液固定24 h，石蠟切片，片厚7 μm，常規(guī)H-E染色。

4）測量指標與方法。組織切片置于Leica 顯微鏡下觀察，利用Moticom2306/3.0 pixel圖象分析系統(tǒng)拍照并測量空腸的絨毛高度、隱窩深度、計算V/C值。每組選6 張切片，每張取5 個最高絨毛、最深隱窩進行統(tǒng)計分析。用SPSS 11.0 對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，試驗結(jié)果用“平均值±標準差”表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 各試驗組空腸黏膜絨毛高度

由表1可知，各日齡A組仔鼠空腸黏膜絨毛高度顯著大于B、C、D組，各日齡B組仔鼠空腸絨毛高度顯著小于C、D組；7日齡時，A、C組空腸絨毛高度顯著大于B、D組；14日齡時，A組空腸絨毛高度顯著大于B、C、D組，B、C、D各組仔鼠空腸黏膜絨毛高度差異不顯著；21日齡時，C組腸黏膜絨毛高度顯著大于B、D組；28日齡時，D組腸黏膜絨毛高度顯著大于B、C組。

表1 各試驗組空腸黏膜絨毛高度mm

2.2 各試驗組空腸隱窩深度

由表2可知，7日齡時，B 組仔鼠空腸隱窩深度顯著小于A、D 組，與C 組差異不顯著；14日齡時，C組仔鼠空腸隱窩深度小于A、B、D組，與A、D組差異顯著，與B 組差異不顯著；21日齡時，C 組仔鼠空腸隱窩深度小于A、B、D 組，差異不顯著；28日齡時，D組仔鼠空腸隱窩深度顯著小于A、B、C組。

表2 各試驗組空腸隱窩深度mm

2.3 各試驗組空腸V/C值

由圖1可知，隨著日齡的增長，V/C值呈下降趨勢，這可能是因為在初期仔鼠處于快速生長期，絨毛長度增大速度小于隱窩深度增大速度。0～21日齡時，C 組V/C值顯著大于B、D 組；其中7日齡時，C組V/C值顯著大于A、B、D 組；14日齡時，A、B、C 組V/C值顯著大于D 組；21日齡時，C 組V/C值顯著大于B 組，與A、D 組差異不顯著；28日齡時，D 組V/C值顯著大于A、B、C組。

圖1 各試驗組仔鼠V/C值

比較圖2和圖3可以看出，C 組21日齡少乳仔鼠空腸腸絨毛高度明顯大于A組。

圖2 A組21日齡空腸（10×40倍）

圖3 C組21日齡空腸（10×40倍）

3 討 論

空腸絨毛是由空腸黏膜上皮和固有膜呈指狀突起突向腸腔而成，是動物營養(yǎng)物質(zhì)吸收的主要部位，其發(fā)育狀況決定著營養(yǎng)物質(zhì)的吸收率和利用率?？漳c是動物營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的最重要部位，空腸絨毛高度與吸收上皮細胞數(shù)量呈顯著正相關(guān)?？漳c絨毛高度的增加，使得吸收細胞面積增大，營養(yǎng)物質(zhì)的吸收效率提高，同時也有利于物質(zhì)的合成。當空腸絨毛變矮時，表明空腸黏膜絨毛上皮吸收細胞數(shù)量減少，消化吸收能力降低。腸隱窩是腸絨毛基部上皮細胞下陷至固有膜形成的管狀結(jié)構(gòu)，隱窩深度的變化反映小腸黏膜上皮吸收細胞的更新速率[10]。隱窩深度變淺則說明腸黏膜上皮吸收細胞成熟率上升，上皮吸收細胞更新速率加快，小腸消化吸收功能增強。小腸絨毛高度與隱窩深度的比值（V/C值）是影響動物消化道消化吸收功能的形態(tài)學結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，V/C值增大，表明消化道黏膜面積變大，消化吸收能力增強；V/C值減小，說明腸黏膜面積變小，消化吸收能力減弱。

板藍根多糖能增加空腸絨毛高度，降低隱窩深度，增加V/C值，可能有以下2 個方面的原因：①許多研究[11-15]證實，寡乳糖、寡半乳糖、甘露寡糖等多糖均可調(diào)節(jié)動物消化道微生物群系，抑制消化道有害微生物群，促進消化道雙歧桿菌和乳酸菌等有益菌的增長，故推測板藍根多糖降解后能形成各種寡糖和單糖，抑制有害病原微生物群的黏附和繁殖，促進有益菌群的發(fā)育，調(diào)節(jié)消化道微生態(tài)平衡，減少病原微生物產(chǎn)生的毒素對腸道絨毛上皮細胞的破壞作用，促進腸道絨毛的發(fā)育。②陳群等[16]報道，動物消化道黏膜上皮細胞更新是一個耗能過程，約占全身能量的24%，而植物多糖能夠促進胰島素分泌，影響糖代謝酶的活性，促使外周組織對葡萄糖的作用，抑制糖異生，加速葡萄糖代謝供能，促進消化道黏膜上皮細胞的更新和發(fā)育。有關(guān)板藍根多糖促進腸道發(fā)育的機理仍需進一步研究。

4 結(jié) 論

板藍根多糖是從中草藥板藍根中提取的植物活性多糖，具有天然、低毒、無殘留等優(yōu)點。給少乳仔鼠灌注不同劑量的板藍根多糖試驗結(jié)果顯示：使用板藍根多糖能顯著增加空腸絨毛高度，降低隱窩深度，增大V/C值，促進空腸的發(fā)育，增強空場消化吸收功能。使用中質(zhì)量濃度（20 mg/kg）的板藍根多糖對0～21日齡仔鼠空腸的發(fā)育效果明顯，而使用高質(zhì)量濃度（40 mg/kg）的板藍根多糖對21～28日齡仔鼠的空腸發(fā)育效果明顯。